藏藥瑪奴西湯顆粒體外抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉有菊 紅 梅 陳秋紅 韓 梅 孫 偉

(1．青海省藏醫(yī)藥研究院藥物研究所，青海 西寧 810003;2．青海高原醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所中心實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810012)

藏藥“瑪奴西湯”又名四味藏木香湯散，主要成分為藏木香、懸鉤木、寬筋藤、干姜。在青海、西藏等地區(qū)已有1000多年的用藥歷史，先后被列入《青海省藏藥標(biāo)準(zhǔn)》［1］和《衛(wèi)生部部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》［2］，由于對治療瘟病初期、流感初期、惡寒頭痛、關(guān)節(jié)酸痛、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、發(fā)燒等疾病療效顯著，其顆粒制劑作為醫(yī)院院內(nèi)制劑廣泛應(yīng)用，具有重要的地位和價(jià)值。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［3］，其方中的藏木香植物中提取的類黃酮、五羥基黃酮、4，5，7－三羥基黃酮均具有顯著的抗菌作用。為了進(jìn)一步為臨床應(yīng)用提供依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)對藏藥瑪奴西湯顆粒的體外抑菌作用進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)樣品:藏藥“瑪奴西湯”顆粒，由青海省藏醫(yī)藥研究院基礎(chǔ)研究所傳統(tǒng)工藝室提供，生產(chǎn)批號:20111212。

1．2 供試菌種:金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、沙門氏菌由青海金訶藏藥股份有限公司質(zhì)量部饋贈;銅綠假單胞菌(ATCC)凍干粉購自廣東微生物菌種保藏中心。

1．3 培養(yǎng)基:MH肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基，購自北京三藥技術(shù)開發(fā)公司(中國藥品生物制品鑒定所監(jiān)制)，生產(chǎn)批號均為110420。

1．4 儀器:電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司:型號:HH．B11．500);不銹鋼立式壓力蒸氣滅菌器(江蘇江東精密儀器有限公司，型號:LDZX－50FA);精密微量移液器(上海求精生化試劑儀器有限公司，IV型:WKY型200～1000ul)

2 方法與結(jié)果

2．1 藏藥瑪奴西湯顆粒受試物的制備:由于藥物濃度的限制，將藏藥瑪奴西湯顆粒加至培養(yǎng)基中，配成含藥培養(yǎng)基滅菌備用(0．4g/mL)，高壓滅菌后置于0－4℃冷藏備用。

2．2 培養(yǎng)基制備:MH固體培養(yǎng)基的配制(250g/瓶):稱取MH固體水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基36g，加入蒸餾水1000mL，溶解，混勻，調(diào)節(jié)pH值為7．4±0．2(用20%NaOH調(diào)節(jié)pH值7．4)后分裝，115℃30min高壓滅菌后，冷至～60℃，無菌操作傾注于干熱滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿15～20mL，備用。MH液體培養(yǎng)基的配制(100g/瓶):稱取MH液體培養(yǎng)基5g加入蒸餾水200mL，溶解，混勻，調(diào)節(jié)pH值為7．4±0．2(用20%NaOH 調(diào)節(jié) pH 值．4)后分裝，115℃30min高壓滅菌。

2．2 供試菌種的制備［4］:將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、沙門氏菌3種菌苗分別接種于經(jīng)無菌檢查合格的10mL液體培養(yǎng)基中，于37℃恒溫培養(yǎng)24h;銅綠假單胞菌凍干粉接入試管斜面培養(yǎng)基上，置37℃恒溫培養(yǎng)24h后，用無菌液體培養(yǎng)基沖下斜面新鮮菌苔接種于無菌試管，于37℃恒溫培養(yǎng)24h。菌液置0－4℃冷藏備用

2．3 二倍稀釋法［5］:在無菌環(huán)境下將11支滅菌大試管依次編號，按無菌操作每管加入滅菌MH肉湯液體培養(yǎng)基2mL，再吸取瑪奴西湯顆粒(0．4g/mL)2mL放入第1管，混勻后從第1管吸取2mL放入第2管，混勻，同樣吸取2mL放入第3管……按二倍稀釋法，使各管中的藥液依次被逐級稀釋為1∶2、1∶4、1∶8、……1∶256的比例，藥物濃度依次為．4g、0．2、0．1……0．00078g/m L 等各種濃度的液體。第10不加藥物作為對照，以便觀察培養(yǎng)基是否適合于細(xì)菌生長。第11管加受試藥液2mL，混勻取出2．0mL棄去，不加細(xì)菌，以便觀察受試藥液是否受污染。將復(fù)蘇好的菌液用肉湯培養(yǎng)基稀釋并與0．5麥?zhǔn)媳葷峁埽?］對比，使細(xì)菌的濃度近似達(dá)到(1～1．5×108/mL)。取0．1mL菌懸液分別加入上述1～10號管中，混勻后一起放入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。若肉湯混濁，表示細(xì)菌生長，若肉湯完全清亮，表示無細(xì)菌生長。鑒于藏藥瑪奴西湯顆粒藥物顏色深或不透明且有沉淀，無法判定有無細(xì)菌生長，將上面已稀釋好含菌液的不同濃度藥物移種到MH瓊脂平皿培養(yǎng)基上37℃恒溫培養(yǎng)24h后觀察有無細(xì)菌生長，以完全無菌生長的最低藥物濃度，為藥物對該菌種的最小抑菌濃度(MIC)。結(jié)果見表1:

表1 試管二倍稀釋法測定瑪奴西湯顆粒對4種菌的MIC值

由表可知，瑪奴西湯顆粒對金黃色葡萄球菌有較好的抑菌效果，MIC為0．05g/mL，對大腸埃希菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌抑菌作用其次，MIC為0．2g/mL。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌4種引起瘟病初期、流感初期常見的致病菌，采用二倍稀釋法進(jìn)行了體外抑菌實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)表明:藏藥瑪奴西湯對上呼吸道感染常見的4種菌株均有不同程度的抑菌作用。其中對金黃色葡萄球菌具有較好的抑菌作用，最小抑菌濃度為0．05g/mL。這為臨床治療由這些細(xì)菌引起的呼吸道感染提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥［S］．1995:309．

［2］青海省衛(wèi)生廳．青海省藏藥標(biāo)準(zhǔn)［S］．1992:139．

［3］楊革．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，［M］．第1版．北京:科學(xué)出版社，2005:48．

［4］陳奇．中藥藥理研究方法學(xué)［M］．第3版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:361－362．

［5］任斌，陳瑞杰，等．微生物比濁法測定麥白霉素顆粒效價(jià)［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(8);997－998．