Survivin和Maspin在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

陳海倫，宏小翠，羅幸波，易智君 （. 廣東省惠州市中心人民醫院婦產科，廣東惠州 5600；. 廣東醫科大學附屬醫院腫瘤中心，廣東湛江 5400；. 廣東省惠州市中心人民醫院病理科，廣東惠州5600）

宮頸癌在全球女性腫瘤中的發病率占第三位、 死亡率占第四位。細胞凋亡抑制因子及抑癌基因異常在人類多種惡性腫瘤的發生發展中占有十分重要的地位[1-3]。生存素(Survivin)是目前發現的作用功能最強的凋亡抑制因子，是凋亡抑制蛋白 (inhibitors of apoptotic protein，IAP)家族成員之一，在人類大多數常見的惡性腫瘤中均有高表達[4]。Maspin(Mammary-serpin)基因屬于絲氨酸蛋白酶抑制基因，是一種腫瘤抑制基因產物，在多種人類腫瘤的發生、發展過程中發揮重要的作用[5]。我們采用免疫組化法檢測Survivin和Maspin在宮頸癌、宮頸上皮內瘤樣變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和正常宮頸組織中的表達情況，旨在探討兩者在宮頸癌發生、發展過程中所起的作用。

1 材料和方法

1.1 材料來源

收集惠州市中心人民醫院和廣東醫科大學附屬醫院2014年1月至2017年12月住院手術和門診活檢病理標本135例，其中宮頸癌組織65例，CIN組織35例，正常宮頸組織35例。宮頸癌按FIGO制定的標準進行相應分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期20例，Ⅲ期25例，Ⅳ期10例；中分化25例，低分化21例，高分化19例。所有入選者均未行放化療或免疫靶向治療，各組年齡比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 主要試劑及方法

即用型免疫組化試劑盒由中國福州邁新生物技術開發有限公司生產出品；兔抗人單克隆抗體Survivin和山羊抗人Maspin單克隆抗體均由美國Santa Cruz公司生產出品，稀釋濃度為1：50。采用免疫組織化學SP方法檢測，DAB染色液顯色，具體操作嚴格按說明書要求進行。采用PBS代替一抗方式作為陰性對照標準，采用該生物公司提供的陽性切片作為陽性對照標準。

1.3 判定標準

Survivin和Maspin分別以胞核和(或)胞漿中出現棕黃色或棕色顆粒視之為陽性細胞。按照半定量積分法判斷兩者的具體表達情況，根據染色強度深淺和陽性細胞所占的比例分別標記為0～3分。染色強度判斷標準：未著色的標記為0分、著色淺的標記為1分、中度著色的標記為2分、著色深的標記為3分[6]。陽性細胞百分率結果判定標準：高倍鏡(×400)下隨機選取10個視野，每個視野共計算100個細胞。計算其平均陽性細胞百分率。根據平均陽性細胞百分率標記：陽性細胞數≤5%的標記為0分、6%～25%的標記為1分，26%～49%的標記為2分，≥50%的標記為3分。兩項評分結果相加判定，0～1分標記為(-)，2分 標 記 為 (+)， 3～4分 標 記 為 (++)， 5～6分 標 記 為(+++)，(+)～(+++)均表示為陽性[5]。

1.4 統計學處理

采用SPSS22.0統計分析軟件進行分析，各組間比較選用χ2分割法檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達情況

Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的陽性表達率分別為0.00%、51.43%和73.85%。其中宮頸癌和CIN組織中Survivin陽性表達率均高于正常宮頸組織，且宮頸癌組織中Survivin陽性表達更顯著，3組間差異有統計學意義(P＜0.05或0.01)。詳見表1。

表1 Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達情況

2.2 Survivin在宮頸癌組織中的表達與臨床病理因素的關系

Survivin表達水平與宮頸癌組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移有關(P＜0.05)。詳見表2。

表2 Survivin的表達與宮頸癌臨床病理因素的關系

2.3 Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達情況

Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達陽性率分別為80.00%、57.14%和27.69%。宮頸癌組織中Maspin的陽性表達率低于CIN組織和正常宮頸組織，且CIN組織中Maspin的陽性表達率亦低于正常宮頸組織，3組間差異有統計學意義(P＜0.05或0.01)。詳見表3。

表3 Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達情況

2.4 Maspin在宮頸癌組織中的表達與臨床病理因素的關系

Maspin的表達與宮頸癌FIGO分期、淋巴結轉移有關(P＜0.05或0.01)。詳見表4。

表4 Maspin的表達與宮頸癌臨床病理因素的關系

3 討論

Survivin基因定位于人17q25染色體上，全長14.7 kb，由3個內顯子及4個外顯子構成，編碼分子量為16.5 kDa的蛋白質。Survivin在參與細胞周期調節、抑制細胞凋亡、促進腫瘤血管形成等方面發揮十分重要的作用[7]。 Wang等[8]研究210例非小細胞肺癌(NSCLC)組織標本中Survivin和VEGF-A表達水平與患者生存率之間的關系，結果表明：NSCLC組織中Survivin的陽性表達率為53.33%(112/210)，Survivin的表達水平與NSCLC臨床分期呈正相關。本研究結果表明，在正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤樣變組織和宮頸癌組織中，Survivin的陽性表達率逐漸上升；Survivin在宮頸癌組織中的表達水平與宮頸癌FIGO分期、組織學分化程度和淋巴結轉移有關，說明Survivin作為功能最強的凋亡抑制因子，在宮頸癌的發生、發展中發揮著重要作用。

Maspin基因定位于18q21.3，由4個內含子和7個外顯子構成，編碼一種含375個氨基酸殘基的蛋白質，分子量為42 kDa，為絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibitor，Serpin)超家族的重要成員之一，可以調節腫瘤細胞的生長、粘附、侵襲及轉移[9]。梁啟廉等[10]應用免疫組化法檢測102例胃癌患者手術切除的癌組織和癌周正常組織中Maspin的表達水平，結果提示Maspin在胃癌組織中的表達強度明顯低于在正常組織中的表達，且癌組織中Maspin表達強度與胃癌淋巴結轉移、漿膜浸潤和5年生存率等明顯相關，提示Maspin表達與胃癌的生物學行為有關，可作為判斷胃癌浸潤轉移潛能和預后的參考指標。本研究結果表明，隨著FIGO分期的增高，Maspin陽性表達率依次降低(P＜0.01)；有淋巴結轉移的宮頸癌患者Maspin陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移的宮頸癌患者(P＜0.05)，與王珍[11]的研究結論相似。

綜上所述，Survivin和Maspin在宮頸癌組織中異常表達，參與了宮頸癌的發生和發展過程，其表達水平的檢測對分析、判斷宮頸癌的浸潤轉移潛能、生物學行為和預后具有十分重要的意義。