代森聯中雜質ETU的高效液相色譜分析方法研究

王 琴，武 鵬，石凱威，吳進龍*

(1.湖南加法檢測有限公司，湖南 長沙 410017；2.農業農村部農藥檢定所，北京 100125)

1 前言

代森聯(metiram)是一種乙撐二硫代氨基甲酸鹽(EBDCs)，可作為保護性殺菌劑而被廣泛應用于蔬菜水果在斑點落葉病等的防治[1]。隨著對代森聯產品的深入研究，人們發現在其生產及施用過程中會產生一種代謝產物——ETU[2]。與此同時，ETU同時也是代森聯產品中的主要雜質，具有致癌、致畸及致突變的作用，引起研究者們的較大關注[3]。雖然目前已有相應的國家標準對生產中ETU含量進行嚴格的控制[4，5]，但為了更好地實現ETU含量測定，我們對ETU的分析方法進行了進一步的探究，并通過試驗確定了ETU的最優分析測定條件，該方法操作簡便、快速、準確，具有較好的精密度、準確度。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；水：超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；磷酸；ETU標樣：已知質量分數，99.5%(由農業農村部農藥檢定所提供)；試樣：60%吡唑醚菌酯·代森聯水分散粒劑(由某公司提供)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1100，具有二極管陣列檢測器和自動進樣器；Agilent色譜工作站；Millipore超純水制備系統；色譜柱：250mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內裝ZORBAX SB-C185μm填充物。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：ψ(甲醇∶乙腈∶水)=(0.9∶0.7∶98.4，0～6min；90∶0∶10，6.01～14min；0.9∶0.7∶98.4，14.01～20min)(V/V)；流量：1.0mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：233nm；進樣體積：5μL；保留時間：ETU約4.7min。

ETU標樣和試樣中ETU的高效液相色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 ETU標樣高效液相色譜圖

圖2 試樣中ETU的高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的配制 稱取0.01g(精確至0.000 1g)ETU標樣于100mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)定容至刻度，超聲波振蕩5min使標樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液3mL于另一50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取0.3g(精確至0.000 1g)試樣于50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀釋至刻度，超聲波振蕩5 min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，過濾，注：試樣溶液應現配現用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化<1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中ETU峰面積分別進行平均。試樣中ETU的質量分數ω(%)，按式(1)計算：

好不容易等來一輛車，卻是人滿為患。此時會猶豫，上還是不上？這么久沒來車了，也許后面的車很快就會跟上來。上吧，至少上了就有希望；可是，這么多人，說不定后面的車比這一輛還快呢。糾結。

(1)

式中：

ω1——試樣中ETU的質量分數，%；

A2——試樣溶液中，ETU峰面積的平均值；

m1——ETU標樣的質量，g；

ω——ETU標樣的質量分數，%；

A1——標樣溶液中，ETU峰面積的平均值；

100/3——標樣溶液的稀釋倍數。

3 結果與討論

3.1 波長的選擇 通過Agilent 1100高效液相色譜儀的光譜數據采集功能，獲得ETU的紫外波長掃描圖(圖3)。從圖中可以看到ETU最大吸收波長在233nm處，在該波長處，靈敏度較高，干擾較少，故檢測波長確定為233nm。

圖3 ETU紫外吸收譜圖

3.2 溶劑的選擇 從同一樣品平行稱取3份試樣約0.3g，分別用50mL甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3種不同溶劑溶解試樣，過濾。同時，稱取3份相同的ETU標樣約0.01g，用上述方法配置3個標樣溶液。對上述每個溶液連續進針進行分析，考察ETU峰面積隨時間的變化，結果(圖4、圖5、表1和表2)。

試驗結果顯示，(1)ETU標樣溶液中的ETU峰面積的相對變化率呈正態分布，且變化很小，說明ETU在選定的測定條件下是穩定的；(2)在甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3種溶劑中試樣中ETU的峰面積總體均呈增加趨勢(0～16h)，說明試樣溶液中溶解有代森聯，代森聯在逐步分解產生ETU；(3)不同溶劑樣品溶液ETU面積變化情況是顯著不同的，0.5h時，甲醇(13.36%)、水(5.24%)、磷酸水(pH 4.0)(5.03%)，這種規律的變化可能是由于不同溶劑對代森聯的溶解度的不同所引起的，也可能是由于代森聯在不同溶劑中的分解速度不同造成的。綜合以上結果，我們選擇磷酸水(pH 4.0)作為最佳的溶樣溶劑。

3.3 分析方法的線性相關性試驗 通過上述實驗確定色譜分析條件后，我們進行了分析方法的線性相關試驗。在一定質量范圍內，配制ETU標樣母液，按照濃度遞增的順序分別移取不同體積ETU標樣母液進行稀釋。以ETU質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，測得ETU線性方程為y=47 582.704 6x-0.023 594 9，相關系數R為1.000 00。結果表明ETU在測試的質量濃度范圍內線性關系較好。

3.4 分析方法的精密度試驗 從同一樣品中準確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，測得ETU的標準偏差為0.005，變異系數為4.45%(表3)。

圖4 在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))條件下試樣中的ETU峰面積隨著時間的變化圖(0～16h);

圖5 在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))條件下ETU標樣峰面積隨著時間的變化圖(0～16h)

表1 0～16h內，試樣中的ETU在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面積的相對變化率(%)

表2 0～16h內，ETU標樣在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面積的相對變化率(%)

表3 分析方法的精密度試驗結果

3.5 分析方法的準確度試驗 采用已知質量分數的ETU試樣(0.11%)中稱取5個試樣，分別加入一定量的ETU標樣(99.5%)，在上述色譜操作條件下進行分析，測得平均回收率為93.53%(表4)。

表4 分析方法的準確度試驗結果

4 結論

建立了高效液相色譜法檢測60%吡唑醚菌酯·代森聯水分散粒劑中雜質ETU的分析方法。詳細研究了3種不同的溶樣的溶劑對分析方法的影響，試驗結果表明，相對于甲醇和水，選擇磷酸水(pH 4.0)作為最佳溶劑，ETU在測試濃度范圍內線性關系良好，方法準確度和精密度較高，具有操作簡便、快速的特點，是產品質量控制和應用研究中較為理想的分析方法。