胰腺癌hENT1蛋白表達(dá)與吉西他濱化療療效及預(yù)后的相關(guān)性

張怡 楊曉丹 王曉光 吳斌 倪全法 宋政煒 費(fèi)建國

1嘉興市中醫(yī)院病理科，嘉興 314000；2嘉興學(xué)院附屬第二醫(yī)院肝膽外科，嘉興 314000

胰腺癌的特點(diǎn)為發(fā)現(xiàn)晚、惡性程度高、預(yù)后差及治療困難，80%以上患者確診時已經(jīng)發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移[1]。因此在綜合治療胰腺癌的方案中化療的作用不可替代，是晚期胰腺癌唯一有效的方法。吉西他濱是目前胰腺癌化療中的臨床一線方案，但吉西他濱原發(fā)與繼發(fā)性耐藥限制了其臨床療效。近年來體外細(xì)胞學(xué)研究證實(shí)，吉西他濱主要通過人平衡型核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1 (human balanced nucleotide transporter 1，hENT1)途徑進(jìn)入癌細(xì)胞[2]，胰腺癌細(xì)胞hENT1 表達(dá)水平與吉西他濱對胰腺癌的療效呈正相關(guān)[3-4]。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測胰腺癌組織hENTl水平，分析胰腺癌hENT1蛋白表達(dá)與吉西他濱化療療效、不良反應(yīng)及預(yù)后的相關(guān)性。

資料與方法

一、臨床資料

收集2013年6月至2016年1月間嘉興市第二醫(yī)院肝膽胰外科及嘉興市中醫(yī)院肝膽胰外科收治并經(jīng)病理確診的胰腺癌患者83例，其中男性49例，女性34例，年齡48～86歲，平均68歲。記錄患者的性別、年齡、臨床癥狀及腫瘤原發(fā)部位、腫瘤大小、TNM分期、CA19-9水平、CEA水平、有無肝臟轉(zhuǎn)移。所有患者影像學(xué)檢查可見測量或可評價(jià)病灶，既往未接受過全身放化療、生物治療及其他特殊治療，化療前所有患者血常規(guī)、肝腎功能及心肺功能基本正常。本研究經(jīng)嘉興市第二醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署知情同意書。

二、化療方案及臨床評價(jià)

83例患者均采用臨床一線化療方案：吉西他濱1 200 mg/m2，1次/周，連用7周，休1周后改為連用3周休1周，4周為1個療程，重復(fù)療程直到患者出現(xiàn)病情進(jìn)展或不可耐受的不良反應(yīng)時終止[5]，患者均完成2個療程以上化療。每2個周期化療結(jié)束復(fù)查CT或磁共振成像，參照實(shí)體瘤的療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST 1.1)評價(jià)療效，分為完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)和疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)。其中有效為CR+PR+SD的例數(shù)，耐藥為PD的例數(shù)。患者出院后通過門診或電話進(jìn)行隨訪，記錄患者的生存狀態(tài)和死亡時間，總生存期定義為疾病確診之日起至末次隨訪或死亡日期，無進(jìn)展生存期(progression-free survival，PFS)定義為患者確診之日起至第1次發(fā)生腫瘤進(jìn)展或死亡時間，無進(jìn)展生存率為無進(jìn)展生存患者所占百分比。隨訪截止期為2016年3月31日。不良反應(yīng)評價(jià)參照美國國家癌癥中心制定的標(biāo)準(zhǔn)(CTCAE3.0)分為Ⅰ～Ⅳ級。

三、癌組織hENT1蛋白表達(dá)檢測

取內(nèi)鏡超聲下細(xì)針穿刺胰腺癌患者活檢的組織，采用常規(guī)免疫組織化學(xué)染色法檢測hENT1蛋白表達(dá)。兔抗人hENT1一抗及羊抗兔二抗均購于Abcam公司，抗體稀釋比例為1∶200。DAB顯色試劑盒及免疫組化全自動染色儀均購于Leica公司。以PBS代替一抗作為陰性對照。由兩位病理科主任醫(yī)師采用雙盲法讀片，每張病理切片隨機(jī)選取5個高倍鏡視野(200倍)，以胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽性，并依據(jù)陽性細(xì)胞百分率及染色程度進(jìn)行評分。陽性細(xì)胞百分率評分：陰性為0分，陽性細(xì)胞≤10%為1分，11%～25%為2分，26%～50%為3分，>50%為4分；染色強(qiáng)度評分：無色為0分，淡黃色為1分，黃或棕黃色為2分，褐或棕褐色為3分。兩評分相加作為總評分，≤2分為陰性，3～4分為弱陽性，5～6分為陽性，≥7分為強(qiáng)陽性。陰性及弱陽性歸為低表達(dá)組，陽性及強(qiáng)陽性歸為高表達(dá)組。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、影響吉西他濱化療療效的因素

83例胰腺癌組織中37例(44.6%)hENT1高表達(dá)，46例(55.4%)低表達(dá)(圖1)。吉西他濱化療療效與患者的性別、年齡、臨床癥狀及腫瘤原發(fā)部位、腫瘤大小、TNM分期、CA19-9水平、CEA水平、有無肝臟轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，但高表達(dá)組的吉西他濱耐藥率達(dá)78.1%，低表達(dá)組為50.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

圖1 胰腺癌組織hENTl蛋白高表達(dá)(1A)和低表達(dá)(1B)(免疫組化 ×200)

二、胰腺癌組織hENT1蛋白表達(dá)與化療不良反應(yīng)的關(guān)系

所有患者均能耐受吉西他濱化療不良反應(yīng)，無化療相關(guān)性死亡。主要的不良反應(yīng)表現(xiàn)為消化道反應(yīng)、骨髓抑制與流感樣癥狀，且多為Ⅰ～Ⅱ級，僅低表達(dá)組有4例Ⅲ～Ⅳ級白細(xì)胞減少，1例Ⅲ～Ⅳ級血小板減少。低表達(dá)組患者白細(xì)胞及血小板減少發(fā)生率顯著高于高表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩組間其他不良反應(yīng)的發(fā)生率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

三、胰腺癌組織中hENT1蛋白表達(dá)與患者生存期的關(guān)系

隨訪2～23個月，平均隨訪10.9個月，無1例失訪。低表達(dá)組、高表達(dá)患者的中位生存期分別為11、15個月(圖2A)，1年P(guān)FS分別為19.4%、50.0%(圖2B)，低表達(dá)組顯著低于高表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.000，0.045)。

表1 吉西他濱化療療效與胰腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2胰腺癌組織hENT1蛋白表達(dá)與化療不良反應(yīng)的關(guān)系[例(%)]

不良反應(yīng)低表達(dá)組(46例)高表達(dá)組(37例)χ2值P值惡心、嘔吐25(54.3)16(43.2)1.0120.315腹瀉2(4.3)1(2.7)0.1590.690白細(xì)胞減少29(63.0)8(21.6)14.240.000血小板減少22(47.8)6(16.2)9.160.002貧血7(15.2)5(13.5)0.0480.826肝功能損害8(17.4)7(18.9)0.0320.857皮疹、瘙癢4(8.7)3(8.1)0.0090.924流感樣癥狀27(58.7)18(48.6)0.8340.361

圖2 胰腺癌hENTl高表達(dá)組與低表達(dá)組患者的中位生存期(2A)及1年P(guān)FS(2B)

討 論

胰腺癌是惡性程度極高的消化道腫瘤，近年來其發(fā)病率、病死率呈逐年增高趨勢，占全部惡性腫瘤死亡率的7%，位居惡性腫瘤死亡率第4位[6]。目前手術(shù)是唯一可能治愈的方法，但適合根治性手術(shù)治療的患者不到10%[7]，中位生存期僅為15個月，5年生存率只有5%左右[8]，因此化療在胰腺癌綜合治療中發(fā)揮著重要的作用，尤其對晚期胰腺癌是唯一有效的治療方法。迄今為止吉西他濱為胰腺癌臨床化療藥物中的一線藥物，國內(nèi)外多項(xiàng)Meta分析指出吉西他濱為基礎(chǔ)的化療方案可有效提高晚期胰腺癌患者的PFS及總生存期[9-11]，而吉西他濱化療產(chǎn)生的不良反應(yīng)使該治療方式的臨床獲益受到了大大的影響。

吉西他濱系胞嘧啶核苷衍生物，跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)有賴于特定的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，而hENTl是目前發(fā)現(xiàn)的在人體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)吉西他濱的主要蛋白[2]。國外部分研究結(jié)果提示外周血hENT1高表達(dá)與吉西他濱化療提高胰腺癌患者的無瘤生存期及總生存期密切相關(guān)，而hENT1低表達(dá)則預(yù)示著吉西他濱化療效果不佳[3-4]。本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織hENT1蛋白低表達(dá)患者的化療耐藥率明顯高于高表達(dá)組，兩組患者均可以耐受吉西他濱化療不良反應(yīng)，無化療相關(guān)性死亡，但hENT1蛋白低表達(dá)組患者白細(xì)胞、血小板減少發(fā)生率顯著高于hENT1蛋白高表達(dá)組，中位生存期和無進(jìn)展生存期顯著短于高表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證實(shí)了hENT1低表達(dá)可以降低吉西他濱對胰腺癌患者的療效及預(yù)后。已知hENTl由位于6p21.2-p21.1上SLC29A1基因編碼[12]，本研究團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌患者SLC29A1基因1228位點(diǎn)T→A突變型胰腺癌患者的吉西他濱化療不良反應(yīng)發(fā)生率高，療效差[13]，推測hENT1蛋白表達(dá)降低減少了血液中的吉西他濱轉(zhuǎn)運(yùn)入胰腺癌細(xì)胞，降低了吉西他濱化療療效。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突