芫荽愈傷組織分化及細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)研究

[摘 要] 為了防止芫荽因天氣情況造成大量減產(chǎn)，提高芫荽產(chǎn)量，保證市場(chǎng)供求平衡，可采用組織培養(yǎng)方法培育芫荽。根據(jù)芫荽易于組織培養(yǎng)、易于誘導(dǎo)胚狀體這一特點(diǎn)，本文對(duì)芫荽的愈傷組織進(jìn)行分化及細(xì)胞培養(yǎng)，以期培育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)芫荽。

[關(guān)鍵詞] 芫荽;愈傷組織;分化;細(xì)胞培養(yǎng)

[中圖分類號(hào)] S636 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1674-7909（2019）02-87-2

芫荽（Coriandrum satium L.），又名胡荽，俗稱香菜，是雙子葉草本植物[1]。植物基因型不同，組織培養(yǎng)的難易程度不同，如草本植物易于木本植物，雙子葉植物易于單子葉植物[2]。組織培養(yǎng)的再生途徑受植物基因型影響，芫荽易于誘導(dǎo)胚狀體[3]。2018年，我國部分芫荽主產(chǎn)區(qū)皆因?yàn)樘鞖庠驅(qū)е萝据词粘刹缓茫嗟剀据催€未收割就已經(jīng)爛在地里，而芫荽市場(chǎng)需求旺盛，供求關(guān)系的不平衡導(dǎo)致各地芫荽價(jià)格一路飆升，人們甚至將芫荽戲稱為“芫荽礦”。進(jìn)行芫荽組織培養(yǎng)可以使芫荽避免自然生長(zhǎng)過程中受到天氣原因的影響，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)儀器。恒溫光培養(yǎng)箱、立體壓力蒸汽滅菌器、SW-CJ-2F型雙人雙面凈化工作臺(tái)（超凈工作臺(tái)）、分析天平、大燒杯（1 000 mL）、容量瓶、玻璃棒、三角瓶、培養(yǎng)基、電爐、無菌紙、解剖刀、鑷子、刀片、若干燒杯、封口膜、牛皮紙、pH試紙、量筒、試劑瓶、刻度吸管、洗瓶、洗耳球、移液管、一次性手套和標(biāo)簽紙。

1.1.2 試驗(yàn)試劑。CuSO4·5H2O、NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、Na2EDTA、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、FeSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CaCl2·2H2O、ZnSO4·7H2O、甘氨酸、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、肌醇、蔗糖、2，4-D、6-KT、瓊脂粉、NaOH、HCl、無水乙醇、NaClO溶液和蒸餾水。

1.1.3 試驗(yàn)材料。本試驗(yàn)將芫荽作為試驗(yàn)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

首先，配置MS培養(yǎng)基。按照表1配方稱量各試劑置于大燒杯中，在其中加入1.0 mg/L KT和1.5 mg/L 2，4-D和0.7%瓊脂（瓊脂粉3.5 g），用少量的1 mol/L HCl和NaOH調(diào)節(jié)pH值至6.5，定容至500 mL，在電爐上加熱并充分?jǐn)嚢枋弓傊酆团囵B(yǎng)基溶解。其次，制備無菌水，將240 mL蒸餾水加入250 mL三角瓶中。再次，對(duì)培養(yǎng)基、無菌水與接種用具進(jìn)行滅菌，芫荽的表面消毒在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，先用75%酒精消毒表面2～3 min，并用無菌水沖洗，然后用0.1%NaClO溶液浸泡1～2 min，最后用無菌水沖洗數(shù)次。然后，切取芫荽主枝和葉子之間易于誘導(dǎo)分化的葉柄0.5 cm接種于6組已滅菌的培養(yǎng)基表面，分別標(biāo)號(hào)1～6號(hào)，方便分析試驗(yàn)結(jié)果，其中4號(hào)接種了2個(gè)葉柄。最后，將接種后的培養(yǎng)基放于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在20～25 ℃，光照強(qiáng)度控制在1 500～2 000 lx，每天光照10 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

1號(hào)和2號(hào)三角甁出現(xiàn)相同情況，輕微長(zhǎng)菌且為白色，有些輕微透明，表面光滑，濕潤易挑取，但菌落污染不明顯。3號(hào)和4號(hào)三角瓶大面積長(zhǎng)菌，其中3號(hào)周圍培養(yǎng)基布滿淡粉色菌落，且菌落連成片，再者淡粉色之外有白色菌落，有3個(gè)菌落較大、較明顯，淡粉色和白色菌落表面都光滑，濕潤易挑取，且葉柄由一開始的鮮綠色變?yōu)辄S色發(fā)輕微的黑色。另外，4號(hào)三角瓶接種了2個(gè)葉柄，一個(gè)周圍沒有長(zhǎng)滿菌落，且長(zhǎng)勢(shì)為青色，長(zhǎng)勢(shì)良好，但另外一個(gè)周圍大面積長(zhǎng)滿白色菌落，且該白色菌落和2號(hào)與3號(hào)有很大不同，該菌落表面粗糙，長(zhǎng)有菌絲，干燥且不易挑取，葉柄發(fā)黑比較嚴(yán)重且有發(fā)霉的跡象，該三角瓶是最早長(zhǎng)菌的。對(duì)于沒有污染的5號(hào)和6號(hào)三角瓶，觀察到在切口處出現(xiàn)淡黃綠色的愈傷組織，接種的葉柄有些變黃。

2.2 分析

試驗(yàn)中出現(xiàn)3種菌落污染，原因可能是在無菌操作時(shí)不夠嚴(yán)謹(jǐn)，導(dǎo)致細(xì)菌污染。觀察到5號(hào)和6號(hào)在切口處出現(xiàn)淡黃綠色愈傷組織，原因可能是切口處太小，肉眼對(duì)顏色辨別不準(zhǔn)確，或者細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的配比偏低，或者培養(yǎng)時(shí)間不夠。因高壓滅菌不徹底，芽孢桿菌是細(xì)胞污染中數(shù)量最多的，1～3號(hào)均為細(xì)菌污染。本試驗(yàn)接種后4 d出現(xiàn)菌絲，為真菌污染，繼而很快出現(xiàn)白色孢子，其中4號(hào)最先出現(xiàn)的菌落污染為真菌中的霉菌污染[4]。

由此可知，對(duì)芫荽的愈傷組織進(jìn)行分化及細(xì)胞培養(yǎng)可以實(shí)現(xiàn)，而要想培育出優(yōu)質(zhì)品種，還需要進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)過程，盡量消除培養(yǎng)過程中可能會(huì)出現(xiàn)的細(xì)菌和真菌污染，進(jìn)而可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]嚴(yán)玉華.香菜的營養(yǎng)與藥膳食療[J].醫(yī)藥與保健，2007（11）：61-62.

[2]滕春喜.甜菜M14單體附加系的組織培養(yǎng)[D].哈爾濱：黑龍江大學(xué)，2007.

[3]馬珂馨.藍(lán)百合組織培養(yǎng)再生體系的建立[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué)，2007.

[4]連榮芳.馬鈴薯組織培養(yǎng)中常見的污染類型及防治措施[C]//中國作物學(xué)會(huì)馬鈴薯專業(yè)委員會(huì)年會(huì)，2004.