全自動尿沉渣分析儀計數體液細胞的性能評價

李春蕓 陳春燕 陳 彬

體液細胞常規檢驗是鑒別滲出液與漏出液的重要方法之一，目前常規測定方法是用牛鮑氏手工鏡檢法計數，其存在的弊端是操作繁瑣，重復性差，且與檢驗人員水平密切相關。因此，迫切需要一種更簡單、快速、精密度高以及準確度高的方法替代。血常規分析儀計數體液細胞是目前使用最多的一種替代方法，但由于大部分血細胞分析儀白細胞(white blood cell，WBC)檢測下限為100×106/L，且間皮細胞、腫瘤細胞對WBC的檢測易造成干擾，影響結果的準確性[1-2]。IRIS IQ200型全自動尿沉渣分析儀(簡稱IQ200分析儀)主要用于尿液沉渣定量分析，其測定WBC和紅細胞(red blood cell，RBC)的線性范圍大，且IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據檢測人員經驗進行判斷，重新分類。

本研究參照“2014版國際血液學標準化委員會(ICSH)體液細胞自動化計數儀性能和驗證指南”對IQ200分析儀計數體液WBC和RBC進行性能評價[3-4]。評估IQ200分析儀計數體液WBC和RBC的各項性能指標(精密度，攜帶污染率，檢出下限，相關性)，評價IQ200分析儀計數體液中WBC和RBC的應用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年1-6月海口醫院住院的150例患者的150份體液(胸水、腹水及腦脊液)標本，其中腦脊液33份，胸水67份，腹水50份。外觀正常標本26份，微渾標本38份，黃色渾濁標本40份，血性46份。標本立即送檢，并在2 h內完成計數。

1.2 儀器與試劑

采用IQ200分析儀[美國國際遙控影像系統有限公司(International Remote Imaging System，IRIS)]及配套試劑、質控品(美國IRIS公司)；牛鮑氏計數板(上海求精生化試劑儀器有限公司)；光學顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；生理鹽水(自配)。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本前期處理

對不同外觀的標本進行前期處理，外觀正常標本直接計數，血性、渾濁標本用生理鹽水按1∶5～1∶100倍稀釋。每份標本分成兩份，一份用于手工計數，一份用于IQ200分析儀計數。計數結果乘以稀釋倍數即為最終細胞數，見表1。

表1 不同外觀標本采用的稀釋倍數

1.3.2 空白實驗

用去離子水作為樣本，分別使用儀器法和手工法檢測3次，計數WBC和RBC。由2名有經驗的檢驗人員采用雙盲方式完成，取2次測定結果的平均值進行報告。

1.3.3 批內精密度

選取WBC和RBC含量低值、中值及高值的3份體液標本，每份分別使用儀器法和手工法連續計數11次，各剔除1個最差的結果，分別統計每組10個結果的標準差(S)和變異系數(coefficient of variation，CV)。

1.3.4 攜帶污染率

分別取WBC和RBC高值體液標本連續測定3次(H1、H2、H3)，然后再測定3次低值標本(L1、L2、L3)，計算污染率，其計算為公式1：

污染率=(L1-L3)÷(H3-L3)×100% (1)

1.3.5 牛鮑氏手工計數法

標本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻，然后用移液管吸取少量滴入牛鮑氏計數板稍待靜置5～10 min，低倍鏡下計數10個大方格內RBC數和WBC數。由2名有經驗的檢驗人員采用雙盲方式完成，取2次測定結果的平均值進行報告，上述所有標本2 h內測定完畢。

1.3.6 IQ200分析儀計數法

標本前期處理后，再手工顛倒15次充分混勻后按照儀器說明書上機檢測。本實驗由有經驗的檢驗人員對可疑的成分圖像重新判斷，并記錄修飾后的定量計數結果。

1.4 統計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統計分析，相關性采用Spearman相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法空白實驗

用去離子水作為樣本，手工法計數WBC和RBC均為0，儀器法計數WBC和RBC均為0。

因此IQ200分析儀計數體液WBC和RBC的檢測下限可達到0，同手工法計數。

2.2 兩種方法計數體液細胞精密度

兩種方法分別計數高值、中值及低值細胞11次后，各剔除一個最差結果，其平均值，標準差，變異系數見表2。

表2顯示，在兩種方法檢測中，細胞數越少，精密度越差。儀器法和手工法比較，IQ200分析儀計數體液WBC、RBC變異系數均＜10%，比手工法低，可見IQ200分析儀計數體液細胞精密度高，適用于體液細胞計數。

2.3 IQ200分析儀攜帶污染率

WBC攜帶污染率為0.03%，RBC攜帶污染率為0。IQ200分析儀計數體液WBC和RBC的攜帶污染率較低，在計數體液細胞時，可以不必清洗后再測定，見表3。

2.4 兩種方法計數體液細胞的相關性分析

IQ200分析儀與手工法計數體液WBC相關性呈高度相關r=0.943，如圖1所示。

表2 手工法和IQ200分析儀計數體液細胞的變異系數CV(%，

表2 手工法和IQ200分析儀計數體液細胞的變異系數CV(%，

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表3 IQ200分析儀攜帶污染率

圖1 IQ200分析儀與手工法計數體液WBC相關性散點圖

IQ200分析儀與手工法計數體液RBC相關性呈高度相關r=0.982，如圖2所示。

圖2 IQ200分析儀與手工法計數體液RBC相關性散點圖

3 討論

牛鮑氏手工鏡檢法計數是計數體液細胞的常規方法和金標準，但存在的缺點是操作繁瑣，重復性差，耗時長，對檢驗人員水平要求較高。2014版國際血液學標準化委員會體液細胞自動計數儀性能和驗證指南建議自動細胞計數儀準確計數體液細胞的驗證方法[4]。

目前，有多種血液分析儀應用于漿膜腔積液細胞的計數，但體液中間皮細胞，腫瘤細胞對WBC的檢測造成干擾，特別是間皮細胞，有些分析儀會把間皮細胞歸類在WBC中計數，造成WBC計數增加，而影響結果[5-6]。一些血液分析儀由于其背景計數高，對體液細胞計數有一定的局限性，尤其當低細胞濃度時影響更加明顯[7]。低細胞數導致了自動化檢測的精密度下降，其CV甚至＞20%，越接近自動化分析儀的最低檢出限，細胞計數的準確性和精密度越差[8-9]。由于低值細胞計數常見于各種體液，尤其是腦脊液，因此必須驗證儀器準確計數低值細胞的性能[4]。IQ200分析儀空白試驗WBC可達到0，其最低檢出限可達到0。當體液細胞過少時，IQ200分析儀比血液分析儀更有優勢，血液分析儀在細胞＜1×106/L時，儀器不能準確測出。許多研究報道顯示，血液分析儀僅用于漿膜腔積液細胞的計數，不能用于腦脊液的計數。IQ200分析儀不僅適用于漿膜腔積液，而且也適用于腦脊液的計數，但其不足之處在于不能對WBC進行分類。

IQ200分析儀使用流式細胞原理和先進的自動粒子識別(APR)分析系統。應用流式細胞技術，每個檢測樣本在鞘液包裹下進入一個流動樣本室，再進行連續攝影成像，將攝像所得的有形成分與記憶庫中有形成分進行對比，從而判斷有形成分的種類及精確計數有形成分的數量。同時IQ200分析儀具有人工修飾功能，可任意地選取熒光屏上可疑的成分圖像，根據檢測人員對形態判定的經驗進行判斷，重新分類，并且可以計算出對應的數量，修飾功能可以極大提高檢測準確性。

IQ200分析儀具有很好的精密度，無論是高值、中值及低值體液細胞數，其變異系數均＜10%。IQ200分析儀還具有較低的互染率，RBC互染率為0，WBC互染率為0.03%；與手工計數法之間均呈高度相關(WBC r=0.943、RBC r=0.982)。故IQ200分析儀計數體液WBC和RBC具有檢出下限低、精密度高及攜帶污染率低，與手工計數法相關性高的特點，且簡便、重復性好，適用于體液WBC和RBC計數。