全自動免疫分析儀檢測丙型肝炎抗體的性能評價*

孫 梅 耿建利 曲業敏 王曉偉 姚繼承 邵淑麗 孫勝波 王明義*

威高AutolumiS 3000型全自動免疫分析儀目前在國內醫院檢驗科使用廣泛，但對其性能進行評價的研究相對缺少，也無對應的驗證方案提出。根據臨床實驗室質量管理的要求，本研究實驗室對新購進的AutolumiS 3000型全自動免疫分析儀的技術性能進行評價，以丙型肝炎為檢測項目，定性檢測抗-丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)，以雅培i2000全自動化學發光分析儀及配套試劑為參照，驗證檢測AutolumiS 3000型全自動免疫分析儀的精密度、檢出限、陰陽性符合率等性能，為國產自動免疫定量檢測系統的專業化技術評價提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2017年2月至2017年6月威海市立醫院住院及門診患者的血清標本119份，其中無反應性樣本40份、有反應性樣本59份以及確診樣本20份，在-20 ℃條件下保存待測。批內精密度樣本采用門診患者的新鮮血清稀釋一例吸光度值比臨界值(S/CO)為26.91的陽性血清，配制濃度為臨界濃度(1±20)%。準確度評價樣本采用2018年山東省2次室間質評留樣。

1.2 儀器和試劑

AutolumiS 3000型全自動免疫分析儀(威海威高生物科技有限公司)及配套試劑微粒子化學發光免疫分析(microparticle chemiluminescence immunoassay，MCIA)，定性檢測抗-HCV，結果判斷以S/CO≥1.0為陽性；雅培i2000型全自動化學發光分析儀(美國雅培公司)及配套試劑，原理為化學發光微粒子免疫測定(chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA)法，定性檢測抗-HCV，結果判斷以S/CO≥1.0為陽性。重組免疫印跡試驗(recombinant strip immunoblot assay，RIBA)檢測試劑(新加坡MP生物學亞太有限公司)，出現一個條帶判為不確定，即(±)，出現兩個或兩個以上條帶判為陽性?？?HCV標準物質，濃度1 NCU/ml，購自北京康徹思坦生物公司。

1.3 檢測方法

參照全國臨床檢驗操作規程和美國臨床和實驗室標準協會(clinical and laboratory standards institute，CLSI)的要求，嚴格按照儀器的操作規程和試劑說明書操作，在室內質量控制結果允許范圍內對標本進行檢測。以雅培i2000型全自動化學發光分析儀及配套試劑為參照。

1.4 觀察與評價指標

(1)精密度驗證。檢測臨界值±20%濃度的兩個樣本(L1，L2)，連續檢測20次，1 d內完成，計算20個測定值CV評價批內精密度；檢測配套陰性，弱陽性質控品(QCl，QC2)，每日1次，連續檢測20 d，計算20個測定值的CV，評價批間精密度。

(2)準確度。檢測2018年2次的感染性疾病血清學標志物系列A的EQA留樣(批號為182111-182115和182121-182125)。

(3)敏感性。依據CLSIEP12-A2[1]用已知標準值的抗-HCV標準物質，使用無反應性標本系列，稀釋濃度分別為0.5 NCU/ml、0.45 NCU/ml、0.4 NCU/ml、0.35 NCU/ml、0.3 NCU/ml、0.25 NCU/ml、0.2 NCU/ml、0.15 NCU/ml和0.1 NCU/ml。測定其濃度到不再產生變化為止，其不再產生變化的最低濃度即為最低檢測限。每個濃度重復檢測3次，取均值。

(4)陰陽性符合率。AutolumiS 3000與雅培i2000分別檢測20份臨床已確診丙型肝炎的患者血清樣本和20名醫院健康體檢合格人員的20份樣本，統計檢測結果陰陽性符合率。

(5)AutolumiS 3000不同檢測水平與i2000檢測結果一致性比較。AutolumiS 3000檢測的40份無反應性樣本和59份有反應性樣本，判斷結果的一致性，并對臨床22份抗-HCV反應性標本進行重組免疫結合試驗(RIBA)確證實驗。

2 結果

2.1 精密度

AutolumiS 3000的批內精密度良好，(臨界值+20)%濃度樣本100%為弱陽性；(臨界值-20)%濃度樣本100%為陰性，而質控批間精密度完全滿足要求，其精密度驗證見表1。

表1 AutolumiS 3000檢測抗-HCV精密度

2.2 準確度

AutolumiS 3000檢測感染性疾病血清學標志物系列A的抗-HCV結果，在2018年山東省2次室間質評中，符合率均為100%，表明抗-HCV檢測的準確度符合要求。

2.3 最低檢出限

AutolumiS 3000的檢出限濃度為0.15 NCU/ml；i2000的檢出限濃度為0.3 NCU/ml，表明AutolumiS 3000分析有較高的靈敏度。稀釋標準質控血清檢測結果見表2。

表2 AutolumiS 3000與i2000對稀釋標準物質的檢測結果

2.4 符合率

20份臨床確診丙型肝炎標本，2臺儀器抗-HCV檢測結果均為陽性，陽性符合率為100%；20份健康體檢者樣本，2臺儀器抗-HCV檢測結果均為陰性，陰性符合率為100%，見表3。

表3 AutolumiS 3000不同檢測水平與i2000的符合率

2.5 AutolumiS 3000不同檢測水平與i2000檢測結果一致性比較

AutolumiS 3000復測雅培i2000弱反應性樣本22份，結果相符的有3份。RIBA確證試驗檢測陽性結果3份與AutolumiS 3000相符，其余為不確定或陰性，見表4。

表4 22份抗-HCV反應性標本RIBA確證結果

3 討論

丙型肝炎是由HCV引起的傳染病，全球的HCV感染率約為3%，中國是HCV感染高發國家，且感染率逐年增加[2-3]。中國一般人群抗HCV流行率為3.2%，估計有3800萬HCV感染者[4]。丙肝病毒感染發病隱匿，癥狀不典型，往往發現的時候，已經出現了肝硬化甚至肝癌，因此被冠以“沉默殺手”的稱號[5]。為此，篩查的重擔落在檢驗實驗室，須通過檢驗方法來篩查丙肝[6]。丙肝抗體測定是常用于判斷丙肝病毒是否感染的初篩試驗，其測定的正確性具有重要的臨床意義[7]。AutolumiS 3000采用微粒子化學發光免疫分析(MCIA)技術，具有靈敏度高、特異性強、快速、穩定、易于自動化等優點，然而必須對其進行性能驗證以判斷其檢測性能是否滿足臨床需求。

精密度是反映儀器性能的基本指標之一，CLSIEP5-A2要求采用較長的周期進行儀器精密度評價，從而客觀、真實地反映儀器長期的工作性能。本研究結果顯示，AutolumiS 3000型分析儀檢測批內和批間精密度變異系數(CV%)均良好，表明本研究的檢測系統穩定、可靠；感染性疾病血清學標志物系列A的抗-HCV再檢測結果，符合率為100%，表明抗-HCV檢測的準確度符合要求；檢出限評價是評估檢驗方法能檢測到的分析物的最低濃度，而AutolumiS 3000的檢出限為0.15 NCU/ml；陰陽性符合率均為100%，表明檢測系統滿足臨床要求。

表3顯示，AutolumiS 3000檢測的抗-HCV值S/CO為1.01～4.0時與i2000符合率非常低，為13.3%；當S/CO為4.01～8.0時，與i2000符合率的符合率為55.6%；當S/CO≥8.0時，符合率為100%，與趙喬妹等[8]的研究基本一致。由此可見，反應性弱這部分結果，一致性較差，隨著反應性增強，一致性不斷提高，表明AutolumiS 3000在S/CO 1.01～8.0存在一定的假陽性，可能由于丙肝病毒抗原難以提取，因此用于抗-HCV檢測的試劑均采用重組抗原作為包被抗原，在提高檢測靈敏性的同時，也容易出現假陽性[9]。實際工作中，數量眾多的“低值陽性”，或稱為“弱反應性”的結果，給檢驗人員以及臨床醫生造成極大的困惑。因此，本研究收集22份雅培i2000檢測抗-HCV有反應性的標本，用AutolumiS 3000進行復測，并用RIBA做了確證試驗，確認陽性3例，不確定8例，其余為陰性。

本研究結果表明，AutolumiS 3000的特異性、靈敏度都很高，能滿足臨床需求，適用于臨床標本的常規檢測。AutolumiS 3000的使用可以解決國外同類產品價格昂貴和技術封鎖問題，同時也為患者減輕了負擔，有望成為取代進口產品的民族品牌。