血清CD40L、VCAM-1及炎性因子在支氣管哮喘合并肺炎支原體感染患兒中的表達及預后意義

常滋毓

支氣管哮喘是因多種細胞特別是肥大細胞、嗜酸粒細胞及T淋巴細胞參與的慢性氣道炎癥[1]。它是一種優于機體內免疫系統發生紊亂而導致的變態反應性疾病。小兒支氣管哮喘的發病率較高，統計學調查發現與呼吸道感染有密切關系[2]。而肺炎支原體為兒童呼吸道感染的常見病原體之一，并且已成為小兒呼吸系統感染的重要病原微生物，兒童及青少年多見，發病時可引起廣泛而多樣的肺內、肺外疾病，且發病率有逐年升高的趨勢[3]。臨床中對于哮喘以抗炎治療為主，輔以針對相應的臨床癥狀對癥處理，但尚不能根治，只能得到控制緩解，阻止病情進展，盡可能保護肺功能的正常及防止不可逆性氣流阻塞發生，提高患者生活質量[4]。雖然支氣管哮喘能夠達到臨床控制，但是氣道炎癥仍然存在，需要能夠客觀、準確、實時反映氣道炎癥變化的指標來評估，指導臨床治療、評估預后。因此，本文將探究支氣管哮喘合并肺炎支原體感染患兒血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平與預后的相關性，旨在為臨床醫師更好評估支氣管哮喘合并肺炎支原體感染患者預后。

材料與方法

一、臨床資料

本項目經過我院道德倫理委員會的審理批準，獲得患者及家屬的同意，簽訂知情同意書。納入標準：(1)入組對象年齡<8歲；(2)符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》標準。排除標準：(1)伴有過敏性疾病；(2)合并有急性呼吸道感染或嚴重心臟疾病者；(3)呼吸道畸形；(4)患者同意入組。依據納入排除標準，選取我院2014年1月至2018年1月收治的50例支氣管哮喘患者作為研究對象，入院后完善支原體檢查(即MP-IgM檢查)，根據是否存在支原體感染分為B組39例(單純支氣管哮喘組)，其中男性25例，女性14例，平均年齡(6.91±0.58)歲，平均病程(1.09±0.24)年；C組11例(支氣管哮喘合并支原體感染組)，其中男性7例，女性4例，平均年齡(6.72±0.63)歲，平均病程(1.16±0.37)年。并選取同期40名健康體檢兒童作為A組，其中男性24例，女性16例，平均年齡(6.32±0.71)歲。在C組中依據MP-IgM抗體效價滴度，分為低滴度(即1:40)4例、中滴度(即1:80)4例、高滴度(即≥1:160)3例。三組患者性別、年齡比較無統計學差異(P>0.05)；B、C兩組患者病程比較無統計學差異(P>0.05)；可進行對比分析。

二、研究方法

1. 診斷標準： 支氣管哮喘診斷標準：依據2016《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[5]；(1)有反復氣喘、氣促等多種接觸變應原癥狀；(2)發作時可聞及雙肺散在或彌漫性、以呼吸相為主的哮鳴音，呼吸相延長；(3)上述癥狀及體征經過抗哮喘治療有效或者自行緩解；(4)除外其他疾病引起的氣喘、咳嗽氣促及胸悶；(5)臨床癥狀不典型者；符合以上1～4條或第4、5條者，可診斷為支氣管哮喘。

2. 血清CD40L、VCAM-1水平檢測： 收集入組對象清晨空腹靜脈血5 ml，以離心半徑8 cm 1 500 r/min 離心15 min，獲得血清保存至-20 ℃冰箱中；采用ELISA法檢測CD40L、VCAM-1水平，試劑盒由上海藍基生物科技有限公司提供，操作步驟嚴格按照說明書執行。

3. 炎性因子水平檢測： 收集入組對象清晨空腹外周靜脈血5 ml，以離心半徑r=8 cm 1 500 r/min 離心15 min，獲得血清；C反應蛋白(CRP)采用深圳國賽的C反應蛋白儀器進行測定適用機型Astep PLUS進行測定，試劑深圳國賽提供；降鈣素原(PCT)用化學發光法進行測定，試劑由深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司提供；所有操作步驟均嚴格按照說明書執行。

4. 隨訪： 對入組對象在治療結束后開始，每3個月隨訪一次，隨訪時間為1年，隨訪方式為電話、門診等，記錄支氣管哮喘急性發作次數、平均住院時間、平均住院次數、呼氣峰值流量(peak expiratory flow, PEF)情況。

三、統計學方法

實驗數據選用SPSS21.0軟件進行分析；計數資料采用χ2檢驗比較差異，計量資料：兩組比較采用t檢驗，多組比較采用方差分析比較差異；P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、三組研究對象CD40L、VCAM-1及炎性因子水平檢測結果比較

支氣管哮喘患者CD40L、VCAM-1、CRP、PCT水平高于健康兒童(P<0.05)；C兩組患兒CD40L、VCAM-1、CRP、PCT水平均高于B組患兒，比較具有統計學意義(P<0.05)。具體數據，見表1。

表1 三組血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平檢測結果比較

二、不同MP-IgM滴度患兒血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平檢測結果

中滴度及高滴度患兒血清CD40L、VCAM-1、CRP、PCT水平均高于低滴度患兒(P<0.05)；中滴度與高滴度患者血清CD40L、VCAM-1水平比較無統計學差異(P>0.05)；高滴度患兒血清CRP、PCT水平高于中滴度患兒(P<0.05)；支氣管哮喘合并支原體感染患兒血清CD40L、VCAM-1、CRP、PCT水平與MP-IgM滴度呈正相關(r=0.7324，P<0.05)。具體數據，見表2。

表2 不同MP-IgM滴度患兒血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平檢測結果

三、支氣管哮喘患者預后比較

C組患者支氣管哮喘急性發作次數平均(3.42±0.84)次/年、平均住院時間(7.23±1.26)d/年、平均住院次數(2.35±0.84)次/年，顯著高于B組支氣管哮喘急性發作次數平均(1.27±0.35)次/年、平均住院時間(5.36±0.91)d/年、平均住院次數(1.28±0.55)次/年，PEF值A組(87.14±4.21)L/min低于B組(73.26±3.33)，差異具有統計學意義(P<0.05)。

討 論

支氣管哮喘是一種以氣道慢性炎癥和氣道高反應性為特征的變態反應性疾病，多種細胞因子和免疫炎性細胞參與了氣道慢性變態反應炎癥過程，臨床上主要表現為反復發作的氣急、喘息、咳嗽或胸悶等癥狀，以清晨及夜間常發作[6-7]。支原體作為一種特異抗原，通過速發型變態反應和遲發型變態反應而引起哮喘速發相反應和哮喘遲發相反應，進而導致氣道的變態反應炎癥[8]。研究發現，支氣管哮喘與支原體感染的肺炎有著相似的遺傳易感性，這就從基因角度證明支原體感染可誘導支氣管哮喘的發展[9]。研究發現，臨床經過規范化治療支氣管哮喘合并支原體感染，可達到支氣管哮喘臨床控制，肺部感染痊愈，但是對于支氣管哮喘并未達到真正的臨床控制，患者的慢性氣道炎癥仍然存在[10]。因此，如何能夠準確、有效的評價支氣管哮喘急性發作期治療過程中患者氣道炎癥狀況，對指導治療、評估患者預后具有重要意義。

研究發現，支原體感染可直接侵入氣道上皮細胞及引起免疫系統紊亂，增加氣道高反應，致氣道出現慢性炎癥，刺激機體轉化生長因子-β1、血管內皮生長因子、TNF-α、嗜酸細胞陽離子蛋白等多種細胞因子釋放，加重支氣管哮喘[11-12]。CD40-CD40L為機體中一對非常重要的協同刺激分子，可激活T細胞，調節T細胞與B細胞相互作用，同時對于抗原提呈細胞的激活起著非常重要作用[13]。另外，CD40-CD40L同時處于炎癥反應系統的關鍵環節，能夠調節多種炎癥反應，促進基質金屬蛋白酶、白介素、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子的釋放，誘發哮喘的發生[15-16]。本次研究結果顯示，支氣管哮喘合并支原體感染患者的C40L水平明顯高于健康患兒及單純支氣管患兒，且CD40L隨著支原體IgM抗體效價滴度的增高而升高；結果說明支原體感染可進一步激活CD40-CD40L信號分子，進而影響與之相關的免疫反應及炎性反應，加重哮喘病情。VCAM-1為臨床中常用的判斷內皮功能是否受損的一種炎癥指標，其可促進病灶中單核細胞及T淋巴細胞活性，增加細胞間相互作用，進而放大免疫應答，抑制致敏，及誘導免疫耐受，引發哮喘的發作[17-19]。本次研究結果顯示，支氣管哮喘合并支原體感染患者的VCAM-1水平明顯高于健康患兒及單純支氣管患兒，且VCAM-1隨著支原體IgM抗體效價滴度的增高而升高；結果說明支原體感染后，使起到內皮損傷加重，且二者呈正相關，誘發哮喘的發作。

研究發現，肺支原體感染后能夠對肺部再次炎癥損傷，并引起細胞免疫的發生，進而使支氣管哮喘的發生或使病情加重[20]。炎癥細胞及細胞因子貫穿于整個支氣管哮喘的發生、發展過程，對疾病起到重要影響[21-22]。C反應蛋白為一種急性時相蛋白，在組織受到感染時，可急劇升高，是組織損傷及感染的一種非特異性標志物，利于感染性疾病的早期診斷[23-25]。P物質為機體中重要的一種感覺神經肽，廣泛分布于氣道上皮、支氣管黏膜下腺體、氣道平滑肌中。P物質可引起呼吸系統巨噬細胞、中性粒細胞趨向運動，激活肥大細胞、嗜酸性粒細胞，收縮平滑肌，促進細胞因子釋放，加重炎癥反應[26-27]。降鈣素原為一種新型炎性因子，其為降鈣素的前體激素，本身無激素活性，當其被蛋白酶水解后，可轉變為降鈣素發揮生物學效應[28-30]。在正常人血清中降鈣素原含量極低，但合并有機體感染后，降鈣素原水平明顯升高，但此時的降鈣素原主要有甲狀腺以外組織分泌。本次研究結果顯示，支氣管哮喘合并支原體感染患者的CRP、SP、PCT水平明顯高于健康患兒及單純支氣管患兒，且CRP、SP、PCT水平隨著支原體IgM抗體效價滴度的增高而升高；結果說明支原體感染機體后，釋放大量CRP、SP、PCT，加重炎癥反應；同時可激活補體，啟動免疫吞噬系統殺傷病原體。

本次試驗結果顯示，支氣管哮喘合并支原體感染的患兒支氣管哮喘急性發作次數、平均住院時間、平均住院次數高于單純支氣管哮喘患兒，PEF值低于單純支氣管哮喘患兒，說明支氣管哮喘合并支原體感染患兒預后較差，且容易復發，臨床中醫師可通過監測血清CD40L、VCAM-1、CRP、SP、PCT水平指導治療、評估患者預后。

綜上所述，支氣管哮喘合并肺炎支原體感染患兒血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平明顯升高，進而加重呼吸道慢性炎癥及氣道高反應，加重支氣管哮喘病情；并且患兒血清CD40L、VCAM-1及炎性因子水平越高，患兒預后越差。由于本研究為單中心的研究，具有一定局限性，尚需多中心聯合研究予以完善研究結果。