卵巢癌組織高遷移率族蛋白B1的表達(dá)及臨床意義

智華 馬海燕 曲瑞華

·論著·

卵巢癌組織高遷移率族蛋白B1的表達(dá)及臨床意義

智華 馬海燕 曲瑞華

目的觀察卵巢癌組織高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測40例卵巢癌、60例卵巢良性腫瘤及30例正常卵巢組織HMGB1的表達(dá)水平。另選取卵巢癌SKOV3、A2780、3AO細(xì)胞系，采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測HMGB1表達(dá)水平。結(jié)果與卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織比較，卵巢癌組織HMGB1表達(dá)水平顯著增高(P<0.05)；且其表達(dá)與卵巢癌病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關(guān)(P<0.05)，而與組織學(xué)類型無關(guān)。卵巢癌SKOV3、A2780、3AO細(xì)胞均表達(dá)HMGB1，表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論HMGB1在卵巢癌組織表達(dá)上調(diào)，這可能參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移。

卵巢癌；高遷移率族蛋白B1；免疫組織化學(xué)

研究顯示，卵巢癌的病死率位居婦科惡性腫瘤首位，具有易于播散、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)[1,2]。高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)是一種廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)、與染色體結(jié)合的非組蛋白。近來研究發(fā)現(xiàn)HMGB1作為一種腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因，在多種惡性腫瘤組織表達(dá)上調(diào)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程[3,4]。但目前有關(guān)卵巢癌組織HMGB1表達(dá)的報道尚不多見。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織HMGB1的表達(dá)狀況，為闡明卵巢癌的發(fā)病機(jī)制及治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取張家口市第五醫(yī)院2011年4月至2012年10月期間手術(shù)切除的卵巢腫瘤組織標(biāo)本100例，術(shù)后經(jīng)病理確診為卵巢癌40例(卵巢癌組)，卵巢良性腫瘤60例(卵巢良性腫瘤組)。卵巢癌患者年齡30～72歲，平均年齡45.5歲。40例卵巢癌中，卵巢漿液性囊腺癌24例，黏液性囊腺癌11例，子宮內(nèi)膜樣腺癌5例；病理分級參照WHO標(biāo)準(zhǔn)，其中高分化14例，低分化16例，中分化10例；臨床分期參照FIGO標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期8例，Ⅱ期9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期11例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例，無轉(zhuǎn)移者28例。卵巢良性腫瘤患者年齡28～64歲，平均年齡32.5歲。所有患者均排除肝、腎、免疫系統(tǒng)疾病及其他部位腫瘤，術(shù)前均未接受放化療和激素治療，臨床病理資料完整。同時選取張家口市第五醫(yī)院同期30例正常卵巢組織作為對照組。3組年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 主要試劑 兔抗人HMGB1單克隆抗體購自Santa Cruz公司。免疫組化SP試劑盒和羊抗兔IgG購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶、小牛血清購自美國Promega公司。

1.3 實(shí)驗方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)：標(biāo)本用10%甲醛固定，石蠟包埋，切成4 μm厚的石蠟切片，65℃烘烤，脫蠟，采用免疫組織化學(xué)染色 SP法測定HMGB1，參照試劑盒說明書進(jìn)行操作，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。HMGB1主要表達(dá)在細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。隨機(jī)選取至少10個視野，計數(shù)200個細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性，<10%為陰性。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)：在含 5% CO2、37℃飽和濕度條件下，用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)SKOV3、A2780、3AO細(xì)胞，每隔2～3 d用0.25%胰蛋白酶消化傳代1次。

2 結(jié)果

2.1 HMGB1蛋白在卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示，HMGB1蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。在卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中，HMGB1蛋白陽性表達(dá)率分別為77.5%(31/40)、23.3%(14/60)、10.0%(3/30)，HMGB1蛋白在卵巢癌組織的陽性表達(dá)率顯著高于卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而HMGB1在卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同卵巢組織HMGB1蛋白表達(dá)的比較

注：與卵巢癌組比較，*P<0.05

2.2 HMGB1蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系 HMGB1的陽性表達(dá)與卵巢癌不同病理分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而與組織學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 HMGB1表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.3 HMGB1蛋白在卵巢癌SKOV3、A2780、3AO細(xì)胞系的表達(dá) 免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，HMGB1蛋白在SKOV3、A2780、3AO細(xì)胞中均呈陽性表達(dá)，HMGB1主要定位于細(xì)胞核,少量表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中。

3 討論

HMGB1是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)序列高度保守的DNA結(jié)合蛋白，與染色質(zhì)非特異結(jié)合后參與DNA空間構(gòu)象的構(gòu)建、細(xì)胞復(fù)制與分化及基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等多種生理過程。近年來多項研究證實(shí)，HMGB1及其配基晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)在胃癌、肝癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[5，6]。

本實(shí)驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織存在HMGB1蛋白的高表達(dá)，與卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；進(jìn)而我們檢測了HMGB1在3種卵巢癌細(xì)胞系(SKOV3、A2780、3AO)中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示HMGB1在這3種高侵襲性卵巢癌細(xì)胞中均呈強(qiáng)陽性表達(dá)，提示HMGB1與卵巢癌的病理過程密切相關(guān)。研究顯示，HMGB1過表達(dá)具有抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的作用；反之，張捷等[7]利用siRNA技術(shù)敲低HMGB1在卵巢癌S1，A1和HO8910PM細(xì)胞中的表達(dá)后細(xì)胞增殖被顯著抑制。由此提示，HMGB1過表達(dá)與卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程高度相關(guān)，靶向HMGB1/RAGE基因表達(dá)的抑制劑有可能成為治療卵巢癌的新措施。本研究結(jié)果顯示，HMGB1在卵巢癌組織的高表達(dá)與卵巢癌病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況有關(guān)，這與劉曉燕等[3]研究結(jié)果一致。綜合我們和他人研究結(jié)果可以看出，卵巢癌組織HMGB1高表達(dá)可能通過某種細(xì)胞內(nèi)信號機(jī)制導(dǎo)致疾病的惡化。

HMGB1可由單核巨噬細(xì)胞和壞死的腫瘤細(xì)胞分泌，與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用并誘導(dǎo)新生血管形成，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。其可能機(jī)制如下：(1)HMGB1與RAGE等細(xì)胞膜分子結(jié)合，激活MAPK、P38、JNK及P42/P44等信號途徑，直接造成纖維蛋白溶酶激活級聯(lián)的下游靶點(diǎn)MMP-2和MMP-9的激活，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[8]；(2)HMGB1/RAGE通過上調(diào)VEGF的表達(dá)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移增殖、新生血管生成和淋巴轉(zhuǎn)移[9]；(3)HMGB1參與了類固醇激素等多個與惡性腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過程，這些基因的異常表達(dá)造成細(xì)胞表型的改變。這些可能是HMGB1促進(jìn)卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。

綜上所述，HMGB1在卵巢癌組織高表達(dá)，這與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。采用抑制劑或siRNA技術(shù)阻斷 HMGB1 的高表達(dá)可能直接抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程。總之，對HMGB1表達(dá)水平的監(jiān)測不僅可作為卵巢癌預(yù)后評估的重要指標(biāo)，更重要的是，深入研究HMGB1參與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的信號機(jī)制可為卵巢癌的基因治療提供潛在的治療靶點(diǎn)，并有利于研發(fā)新的抗腫瘤藥物。

1 Cho KR，Shih Ie M． Ovarian cancer．Annu Rev Pathol，2009，4: 287-313．

2 Bast RC，Hennessy B，Mills GB．The biology of ovarian cancer: new opportunities for translation．Nat Rev Cancer，2009，9:415-428．

3 劉曉燕,張捷,陳潔.高遷移率族蛋白 B1在卵巢癌組織及單克隆細(xì)胞亞系中的表達(dá)及其臨床意義．山東大學(xué)學(xué)報，2011，49:123-131．

4 Diener KR,Al-Dasooqi N,Lousberg EL,et al.The multifunctional alarmin HMGB1 with roles in the pathophysiology of sepsis and cancer.Immunol Cell Biol,2013，31：1721-1726.

5 肖建彪,陳龍華,陳斌.HMGB1在多種人體惡性腫瘤組織、癌旁組織中的表達(dá)及意義.山東醫(yī)藥，2013,53：1-3.

6 曹清心,劉宇,凌昌全.HMGB1與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展.臨床腫瘤學(xué)雜志，2012,17：282-285.

7 張捷，趙躍然，陳潔.RNA干擾抑制高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2012,21：241-245.

8 Liu PL，Tsai JR，Hwang JJ，et al． High-mobility group box 1-mediated matrix metalloproteinase-9 expression in non-small cell lung cancer contributes to tumor cell invasiveness． Am J Respir Cell Mol Biol，2010，43:530-538．

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ExpressionandclinicalsignificanceofHMGB1inovariancarcinoma

ZHIHua*,MAHaiyan,QURuihua.*QiaoxiDistrictCenterforDiseaseControlandPrevention,Hebei,Zhangjiakou075000,China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of HMGB1 in ovarian carcinoma.MethodsThe expression levels of HMGB1 were detected by immunohistochemistry in 40 cases of ovarian carcinomas,60 cases of benign ovarian tumors and 30 cases of normal ovarian tissues,and the expression levels of HMGB1 were also detected in ovarian carcinoma cells (SKOV3,A2780 and 3AO) by immunohistochemistry.ResultsAs compared with those in benign ovarian tumors and normal ovarian tissues,the expression levels of HMGB1 in ovarian carcinoma tissues were significantly increased (P<0.05),moreover,which were closely related with pathological classification,clinical staging and lymph node metastasis of ovarian carcinoma (P<0.05),however,which were not correlated to histological type.The expression of HMGB1 was positive in SKOV3,A2780,3AO cells,but there were no significant differences in expression levels among them (P>0.05).ConclusionThe expression levels of HMGB1 in ovarian carcinoma are up-regulated,which may be involved in the pathogenesis,development and metastasis of ovarian carcinoma.

ovarian carcinoma; high mobility group box 1;immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.007

075000 河北省張家口市橋西區(qū)疾病預(yù)防控制中心(智華)；河北省張家口市第二醫(yī)院骨五科(馬海燕)；河北省張家口市第五醫(yī)院(曲瑞華)

R 737.31

A

1002-7386(2014)10-1461-03

2013-12-27)