鼻竇炎口服液對急性鼻-鼻竇炎大鼠Galectin-9及其受體Tim-3表達的影響

馬志躍（通訊作者） 李彬 馮勇 余曉旭 樊建剛 何剛

（四川省人民醫學科學院·四川省人民醫院耳鼻咽喉頭頸外科 四川 成都 610072）

急性鼻-鼻竇炎（acute rhinosinusitis，ARS）臨床表現為流膿涕、鼻塞、頭昏等，嚴重影響患者日常生活[1]。Galectin-9/Tim-3已被證實可調控炎癥反應[2]，因此，分子水平探討Galectin-9、Tim-3與ARS發病關系，為預防和治療ARS具有重要臨床意義。鼻竇炎口服液已被證實對ARS具有有效性[3]。因此，本實驗從鼻黏膜Galectin-9及其受體Tim-3為切入點，通過動物實驗觀察鼻竇炎口服液對ARS大鼠細胞因子及Galectin-9、Tim-3的影響，了解其對局部炎性病理改變的調節作用及機理，為臨床研究提供理論依據。

1.資料與方法

1.1 實驗動物與分組

24只健康SD大鼠，雌雄各半，200±10g，購于成都達碩實驗動物有限公司，生產許可證號：SCXK（川）2015-030。實驗動物隨機分為空白組、模型組、鼻竇炎口服液組，每組8只，清潔級實驗室飼養。

1.2 大鼠ARS模型構建

大鼠適應性喂養1周后，參考文獻[4]報道的方法造ARS模型：腹腔注射10%水合氯醛（4.5ml/kg）麻醉，整個過程保持無菌操作。在大鼠右側鼻腔用眼科鏡置入修剪好的醫用海綿，隨即滴入0.1ml金黃色葡萄球菌懸液于醫用海綿上，持續7d，造模后自由喂養，出現鼻塞、鼻腔可見黏膿性分泌物顯示造模成功。

1.3 藥物干預

大鼠造模成功后的第2天起開始給藥，鼻竇炎口服液（重慶桐君閣藥廠，批號：10090070）組以10ml/kg灌胃，空白組、模型組以5ml/kg無菌水灌胃，1次/d，連續7d。

1.4 樣本采集

末次給藥1h后，10%水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，離心取血清，4℃低溫保存，待檢測血清指標；剝離雙側鼻中隔黏膜，每只大鼠組織樣本分成兩份，一份于4%多聚甲醛固定，用于后續組織病理檢測，另一份保存于-80℃，用于后續RT-PCR檢測。

1.5 檢測項目

將固定的鼻黏膜組織按常規方法制備石蠟切片，HE染色，鏡檢觀察病理組織學變化；ELISA試劑盒（上海茁彩）檢測大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR檢測鼻黏膜Galectin-9、Tim-3mRNA表達。

1.6 統計學方法

運用SPSS20.0進行數據統計處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間差異采用單因素方差分析，P＜0.05差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 病理組織觀察

空白組鼻黏膜無炎癥反應，模型組可見鼻黏膜水腫、充血，炎癥細胞浸潤，黏膜上皮壞死，鼻竇炎口服液組可見輕度水腫，炎癥細胞明顯減少，圖1。

圖1 大鼠鼻黏膜病理組織學變化

2.2 大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

造模成功后，模型組小鼠血清IgE、IL-4含量較空白組均明顯增加，IFN-γ含量明顯降低（P＜0.01）。通過鼻竇炎口服液干預，IgE、IL-4含量較模型組明顯降低，IFN-γ含量明顯升高（P＜0.01），見表1。

表1 各組大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量

2.3 大鼠鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA表達

造模成功后，模型組較空白組鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA表達明顯增加（P＜0.01）。經鼻竇炎口服液干預，Galectin-9、Tim-3 mRNA表達較模型組明顯降低（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠鼻黏膜Galectin-9、Tim-3 mRNA水平

3.討論

ARS多由上呼吸道感染引起，嚴重者易造成鄰近組織、器官受累引發嚴重病變[1]。因此，尋找有效的治療方案極為重要。本實驗采用鼻竇炎口服液治療ARS大鼠，病理組織考察結果表明，模型組鼻黏膜充血、黏膜上皮壞死，鼻竇炎口服液干預后炎癥細胞明顯減少，黏膜上皮輕度缺損，可明顯減輕鼻黏膜病理損傷。

目前Th1/Th2細胞失衡被認為是發病核心，而INF-γ、IL-4分別是Th1、Th2的重要細胞因子。當Th1反應偏向Th2反應，則致IL-4分泌增加，INF-γ分泌減少，而IL-4進而上調免疫球蛋白（IgE），IgE是觸發呼吸道變應性炎癥的關鍵因素[5]。本實驗結果顯示模型組較空白組IgE、IL-4含量明顯増加，INF-γ明顯降低（P＜0.01），說明ARS發生了Th2的偏移。鼻竇炎口服液干預后IgE、IL-4含量較模型組明顯降低，INF-γ含量明顯增加（P＜0.01），說明鼻竇炎口服液能有效促進形成新的Th1為主的平衡。

Galectin-9-Tim-3在炎癥調節中起重要作用。Galectin-9可誘導Th1極化并可阻止IgE抗原抗體復合物的形成。Tim-3可在活化的Thl細胞表面特異性表達，抑制Thl介導的細胞免疫[6]。同時，鼻黏膜局部Galectin-9、Tim-3表達與外周血IL-4、IFN-γ含量存在明顯相關性，Galectin-9通過與Tim-3結合可抑制Th1免疫應答，誘導炎癥因子產生，引起鼻腔黏膜水腫、鼻分泌物增加、上皮細胞損傷[7]。本實驗結果顯示Galectin-9、Tim-3 mRNA表達模型組明顯高于空白組（P＜0.01），提示Galectin-9、Tim-3可能是導致鼻腔炎癥表現的因素之一。鼻竇炎口服液干預后Galectin-9、Tim-3 mRNA表達較模型組明顯降低（P＜0.01），說明鼻竇炎口服液可影響Galectin-9、Tim-3表達。

綜上所述，鼻竇炎口服液可有效抑制Galectin-9、Tim-3表達，平衡細胞因子，提示Galectin-9/Tim-3參與ARS發展過程，Galectin-9/Tim-3可作為治療ARS新的方向。