銅陵地區不同種類牡丹籽提取物抑菌性比較

金 磊方 凌 汪 穎

（銅陵市食品藥品檢測中心，安徽銅陵 244000）

牡丹是毛茛科多年生落葉小灌木，經培育繁衍至今已有幾百個品種，銅陵牡丹屬江南品種群。牡丹花朵碩大，品種繁多，花色奇絕，寓意富貴繁榮，和平幸福，可作觀賞之用；牡丹皮是一種常用中藥，性、苦、辛，微寒，具有鎮靜、解熱、鎮痛、抗炎、抗菌等功能。其中產自銅陵鳳凰山地區的稱為“鳳丹”的牡丹最為出名。近年來，隨著牡丹籽油被國家批準為新資源食品，油用牡丹也逐漸走進人們生活。本試驗以銅陵鳳凰山地區的觀賞牡丹、藥用牡丹、油用牡丹為研究對象，對幾種不同類型牡丹的牡丹籽提取物的抑菌作用進行比較，以期為牡丹進一步開發以及不同類型牡丹種植提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與儀器

試驗材料：2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵鳳凰山景區牡丹園采集觀賞型紫斑牡丹籽約100 g；2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵新橋鎮鳳凰村采集藥用鳳丹籽約100 g；2014年5月12日、2015年5月15日、2016年5月16日由銅陵市食品藥品檢驗中心提供當年油用牡丹籽約100 g；2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵新橋鎮鳳凰村牡丹混載區分別采集觀賞型紫斑牡丹籽、藥用鳳丹籽、油用牡丹籽各約100 g。

1.1.2 供試菌種

經液體、斜面2次復壯活化后的沙門氏菌(Salmonella sp.)、根霉(Rhizopus)，由銅陵市食品藥品檢驗中心提供。

1.1.3 主要儀器

諾基SHZ-C水浴恒溫振搖器；Lab Tech EV331旋轉蒸發儀；賽多利斯BSA224S-CW電子天平(0.1 g)；LMQ.C立式滅菌器；SPX-250B-Z生化培養箱；DHP-9162B電熱恒溫培養箱；蘇凈BHC-1300Ⅱ-A2生物安全柜。

1.1.4 主要試劑

營養瓊脂培養基、孟加拉紅培養基、無菌蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 牡丹籽提取物的制備

取上述試驗材料中不同類型不同地區的牡丹籽去皮、粉碎、烘干，稱量約50 g，加入200 mL正己烷，于水浴恒溫振搖器50℃振蕩提取10 h，過濾；將濾渣烘干，各稱量約30 g，加入95%乙醇150 mL，于水浴恒溫振搖器60℃振蕩提取3 h，過濾，濾渣按上述操作重復提取1次，合并濾液，將其減壓濃縮成浸膏。將浸膏經3次，每次用無水乙醇25 mL溶解洗滌，合并洗液。將洗液減壓濃縮后得到脂溶成分a以及水溶成分b。

1.2.2 菌懸液的制備

將復壯活化后的供試菌種沙門氏菌接種至營養瓊脂平板，于37℃恒溫培養箱中培養48 h；根霉接種至孟加拉紅平板，于28℃恒溫培養箱中培養5 d，用無菌蒸餾水稀釋配制成106cfu/mL～107cfu/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 牡丹籽提取物抑菌試驗

將脂溶成分a用甲醇溶解，水溶成分b用無菌蒸餾水溶解，分別定容至25 mL，得到試液a、b。取6 mm濾紙片置培養皿中經121℃、20 min滅菌，烘干后用無菌鑷子將其放入上述試液a、b中浸潤2 h。用移液槍分別移取沙門氏菌和根霉菌懸液0.1 mL于配制好的營養瓊脂平板和孟加拉紅平板，涂布使其均勻分布在培養基表面。夾取3片濾紙片放入含菌平皿中，分別置于37℃培養箱中培養48 h、28℃培養箱中培養5 d，量取抑菌圈直徑。重復3次，計算平均值，并用甲醇和無菌蒸餾水代替菌懸液做空白對照。

2 結果與分析

2.1 不同牡丹籽提取物抑菌效果

不同牡丹籽提取物抑菌效果分別見圖1、圖2、圖3、圖4。由圖可知，牡丹籽提取物a對沙門氏菌和根霉有抑菌效果；牡丹籽提取物b對根霉有抑菌效果；不同類型牡丹籽的抑菌效果不同：藥用型＞油用型＞觀賞型，且抑菌效果比較穩定；甲醇和無菌蒸餾水組抑菌圈直徑均為0 mm，無抑菌效果。

圖1 2014-2016牡丹籽提取物a對沙門氏菌的抑菌作用

圖2 2014-2016牡丹籽提取物a對根霉的抑菌作用

圖3 2014-2016牡丹籽提取物b對沙門氏菌的抑菌作用

圖4 2014-2016牡丹籽提取物b對根霉的抑菌作用

2.2 混栽區內不同牡丹籽提取物抑菌效果

混栽區內牡丹籽提取物抑菌效果分別見圖5、圖6、圖7、圖8。由圖可知，混栽區內牡丹籽提取物抑菌效果同2.1，但有比較明顯地減弱趨勢。

圖5 2014-2016混栽區牡丹籽提取物a對沙門氏菌的抑菌作用

圖6 2014-2016混栽區牡丹籽提取物a對根霉的抑菌作用

圖7 2014-2016混栽區牡丹籽提取物b對沙門氏菌的抑菌作用

圖8 2014-2016混栽區牡丹籽提取物b對根霉的抑菌作用

3 討論

本次試驗采用抑菌圈法對銅陵地區不同類型的牡丹籽提取物的抑菌作用進行研究，可見牡丹不僅可作觀賞、藥用，而且是一種天然的植物殺菌劑，若進一步對其抑菌成分進行確定、分離、純化，利用其抑菌特性開發新的產品，廣泛應用于日常生活中，可極大改善人們生活。

4 結論

試驗結果表明，牡丹籽提取液a對沙門氏菌和根霉均有抑菌效果，提取液b對沙門氏菌有抑菌效果，對根霉無抑菌效果，抑菌效果為藥用型＞油用型＞觀賞型，且混栽會對原品種抑菌效果產生影響。當不同種類牡丹混栽時，由于花粉交叉傳播，可能使其原有品種的純度發生變化，這樣從抑菌性變化的角度可以對不同種類牡丹的混栽提供一定依據。