新疆、甘肅地區甘草質量評價研究

謝曉婷，李 霞，陳衛東，彭 燦，朱光宇

(1.安徽中醫藥大學藥學院，安徽 合肥 230012；2.安徽省中醫藥科學院，安徽 合肥 230012；3.安徽中醫藥大學藥物代謝研究所，安徽 合肥 230016；4.馬鞍山市中心醫院，安徽 馬鞍山 243000)

甘草為豆科屬植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)、脹果甘草(GlycyrrhizainflataBat.)、光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥的根及根莖，具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥之功效[1]。近年來，由于甘草中黃酮類成分具有抗腫瘤作用[2]，甘草酸等具有抗病毒活性[3]，引起國內外廣泛關注，甘草的需求量也越來越大。

甘草是多年生草本植物，由于生長環境的限制，甘草主要生長地在我國新疆、甘肅、內蒙古、寧夏等地，其藥用來源有野生和栽培之分，生長環境的差異對甘草藥材的質量具有一定影響[4]。

課題組前期資源調研發現，甘肅和新疆的甘草藥材以烏拉爾甘草為主，脹果甘草和光果甘草較少，且種子均來源于內蒙古。因此，為探明環境差異對甘草藥材質量的影響，本課題組從不同產地收集樣品，圍繞甘草的性狀、顯微特征及指標性成分的含量開展系統研究，以期為甘草藥材的質量標準研究及甘草藥材的后續開發提供依據。

1 材料

TOUPCAM顯微鏡：浙江舜宇光學科技有限公司；LC-16C高效液相色譜儀：日本島津；乙腈為色譜純：美國Sigma公司。甘草藥材采自新疆庫爾勒、甘肅蘭州，見表1；飲片購自于新疆、甘肅，見表2。原植物標本由安徽中醫藥大學俞年軍教授鑒定為烏拉爾甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)。

表1 藥材采集信息

表2 飲片信息

2 方法與結果

2.1 性狀描述 取干燥的烏拉爾甘草藥材和飲片，按2015版《中華人民共和國藥典》所載方法對甘草藥材和飲片的形狀、大小、表面、質地、斷面、氣味等特征進行描述。結果表明，甘草藥材性狀與2015版《中華人民共和國藥典》[1]一致。甘肅、新疆相同生長年限和采收期的甘草藥材，甘肅地區藥材根的直徑為0.6～1.5 cm，而新疆地區藥材根的直徑為1.0～3.5 cm。見圖1。新疆、甘肅家種飲片樣品比較，甘肅飲片的形成層環較新疆飲片更加明顯。見圖2。

2.2 顯微鑒別 取干燥的烏拉爾甘草藥材和飲片，按2015版《中華人民共和國藥典》的顯微鑒別法，對藥材粉末、切片進行顯微觀察。兩地區甘草共有的顯微結構與2015版《中華人民共和國藥典》描述一致。與甘肅家種甘草藥材相比，新疆家種甘草藥材中淀粉粒的數量略高，且新疆甘草藥材的淀粉粒平均粒徑略大于甘肅半野生甘草藥材，其他未見有明顯差異。見圖3。

圖1 甘草藥材圖(A.甘肅甘草藥材；B.新疆甘草藥材)

圖2 甘草飲片圖(A.新疆甘草飲片；B.甘肅甘草飲片)

圖3甘草藥材和飲片的粉末結構顯微圖

兩地區樣品的根莖橫切面顯微結構見圖4。結果顯示，與新疆野生甘草藥材相比，新疆家種甘草藥材的木栓層厚，木質部所占根直徑的比例大，占30%～70%，維管束間間隔較小，均有裂隙；與甘肅家種甘草藥材相比，新疆家種甘草藥材的導管較多，排列較緊密，維管束間間隔小，其中甘肅甘草藥材木質部所占根直徑的比例小，占20%～50%，裂隙少；此外，春季采收的甘草藥材質地疏松，秋末采收的甘草藥材質地堅實。

注：A、B為新疆野生甘草藥材；C、D為新疆家種甘草藥材；E、F為甘肅家種甘草藥材

圖4甘草藥材根莖橫切面顯微圖(10×40倍)

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 參照2015版《中華人民共和國藥典》方法，選用C18色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05%磷酸水溶液為流動相B。按照以下程序梯度洗脫：0～8 min，19% A；8～35 min，19%～50% A，35～36 min，50%～100% A；36～40 min，100%～19% A。檢測波長237 nm，柱溫維持30 ℃，進樣容積20 μL，理論板數按甘草苷峰計算應不得低于5 000。對照品和供試品色譜圖見圖5。

注：S1.供試品;S2.對照品；1.甘草苷;2.甘草酸

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱定甘草粉末0.1 g(過三號篩)，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，密塞，稱質量，超聲30 min，放冷，再稱質量，用70%乙醇補足減失質量，搖勻過濾，即得。

2.3.3 對照品溶液的制備 稱取甘草苷、甘草酸適量，精密稱定，加70%乙醇溶解并稀釋成甘草苷、甘草酸濃度分別為200 μg/mL、1.0 mg/mL的混合對照品溶液。

2.3.4 線性關系考察 取混合對照品儲備液，用70%乙醇溶液配制成不同濃度的混合對照品溶液，按“2.3.1”項下方法進行檢測，分別以甘草苷、甘草酸濃度(X)為橫坐標，以峰面積(Y)為縱坐標，建立回歸方程分別為Y=50 157X-839.61(r=0.999 6)、Y=11 634X-1 220.9(r=0.999 9)。甘草苷、甘草酸在0.1～100 μg/mL、0.5～500 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.5 樣品含量測定 分別精密量取各供試品、對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測定結果見表3。

表3 新疆、甘肅甘草中甘草苷、甘草酸含量測定結果

3 討論

本研究結果顯示，新疆、甘肅兩個地區甘草的性狀和顯微結構均符合2015版《中華人民共和國藥典》中的描述，但是在根徑粗細、淀粉粒多寡、大小，木栓層厚度，木質部比例及導管排列緊密度等方面存在差異。此外，觀察不同季節采收的甘草藥材發現，春初采收的藥材質地疏松，秋末采收的藥材質地堅實，表明甘草藥材采收期可能對甘草藥材性狀產生影響。兩地區甘草中甘草苷、甘草酸含量差異可能會影響藥材中有效成分的溶出，從而影響其含量的表達，對不同產地藥材的采收期、有效成分的提取部位的選擇有必要展開進一步研究。

實地考察發現，新疆、甘肅兩地區環境差異主要體現在溫度、濕度、土壤性質、海拔等方面，新疆晝夜溫差大，空氣濕度較低，土壤干旱，海拔約1 000 m；甘肅晝夜溫差小，土壤濕度較高，海拔約3 000 m，故推測土壤性質、溫度、濕度等差異對甘草藥材根徑大小、顯微結構和易水解成分的含量產生影響，甘草生長過程中環境變化是否會導致甘草藥材中成分之間的生物轉化尚有待進一步研究。