HPLC測定板藍根顆粒中表告依春的含量

云南省紅河州食品藥品檢驗所，云南 蒙自 661100

板藍根顆粒是采用板藍根等中藥材加工制成，具有清熱解毒、涼血利咽功效，在肺胃熱盛引起的咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫痛等癥狀疾病治療中具有較好的作用效果。其中，表告依春作為板藍根顆粒抗病毒功效的主要成分之一，也是板藍根顆粒質量檢測控制的重要指標，通過對板藍根顆粒中表告依春含量測定分析，能夠有效鑒別和判斷板藍根顆粒的質量[1]。因此，采用高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春含量具有十分積極的作用和意義[2]。本研究采用高效液相色譜法對板藍根顆粒中表告依春含量檢測進行測定研究。報告如下。

1 儀器及材料

1.1 儀器 Agilent1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；DV215CD型號的電子天平(十萬分之一,OHAUS)；BS110S型號的電子天平(萬分之一，北京賽多利斯天平有限公司)；KQ-300DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 試劑板藍根顆粒(批號：090624、090625、090626，蚌埠豐原涂山制藥廠，每袋10 g，有蔗糖型)，表告依春(批號：100018-200107，中國藥品生物制品檢定所)；甲醇(色譜純)，水(蒸餾水)[3]等。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(15∶85)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：245 nm；進樣量：10 μL，以進行板藍根顆粒中表告依春含量的檢測分析。

2.2 供試品溶液的制備 精確稱取樣品2.0 g，加入75%乙醇25 mL，稱定重量，超聲提取30 min(頻率為40 kHz，功率為250 W)，放置冷卻，再稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液5 mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至25 mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜進行過濾，濾液作為供試品溶液[4]。

2.3 對照品溶液的制備 精確稱量10.32 mg的表告依春對照品，放置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜進行過濾，得濃度為0.1032 mg/mL的對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按照處方比例將板藍根去除后，根據相關制備工藝要求進行陰性樣品制備，再按“2.2”方法制備陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗 分別吸取上述2.2～2.4制備的三種溶液，按2.1的色譜條件進行檢測分析，經分析后顯示，供試品溶液的色譜圖與對照品溶液的色譜圖在相對應位置存在相同保留時間的色譜峰；此外可以看出，供試品溶液的色譜圖與陰性對照溶液的色譜圖對比，無相同保留時間的色譜峰值變化特征，表明陰性干擾不存在。如圖1所示。

2.6 線性關系考察 精確量取2.3的對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、20.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的對照品溶液，并按“2.1”色譜分析條件進行檢測分析，對不同進樣量的色譜峰值變化進行記錄，以表告依春對照品峰面積(Y)的變化與進樣量(X)的關系進行線性回歸分析。得回歸方程為Y=105655.6X-0.73(r=0.9999)，表明表告依春在0.1032～2.064 μg范圍內與峰面積具良好的線性關系。

2.7 精密度試驗 取同一批次樣品(批號: 090624)，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果表告依春峰面積的RSD為0.33%，表明儀器精密度良好。

2.8 溶液穩定性試驗 取同一批次樣品(批號: 090625)， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 h時按“2.1”的色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果表告依春峰面積的RSD為0.85%，表明供試品溶液在24 h內較穩定。

2.9 重復性試驗取 同一批次樣品(批號: 090626)， 按“2.2”的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按“2.1”的色譜條件進樣測定。表告依春的平均含量為0.821 mg/g，RSD為1.0%，結果表明重復性良好。

2.10 回收率試驗 精密稱取6份供試品(批號: 090626，表告依春含量為0.821 mg/g)，每份約2.0 g，置具塞的錐形瓶中，分別加入表告依春對照品約10.0 mg，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進樣測定。計算回收率。結果表告依春的平均回收率為99.20%，RSD(n=6)為0.94% 。

2.11 樣品含量測定 取三個批次的板藍根顆粒，按“2.2”方法制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進樣測定，計算含量。結果見表1。

表1

3 討論

通過上述實驗方法，對市場上多個生產廠家所生產板藍根顆粒中表告依春含量檢測分析顯示，部分廠家生產的板藍根顆粒中表告依春含量均比較低，甚至存在未檢出表告依春含量的情況。由此可見，加強對市場上供應板藍根顆粒中表告依春含量檢測，有利于促進其產品質量控制，確保其作用功效發揮。

高效液相色譜法檢測分析的流動相比例確定中，通過對多種比例對比分析顯示，其比例設計為15∶85時，以甲醇-水為流動相的實驗分析過程中能夠實現表告依春峰達的較好分離，且峰形變化較好。

對高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春含量的可行性進行驗證，有利于促進其在實踐中的推廣應用，對實現板藍根顆粒生產質量的全面監控有積極作用，值得進一步研究。