兩株羊肚菌的人工栽培技術研究

張 勇 曹晉良 李弘文 南曉潔 楊 麗

（1山西省農業科學院食用菌研究所，山西太原030031；2太原芳草地食用菌科技有限公司，山西太原030032；3山西省農業科學院，山西太原030031）

羊肚菌（Morchella）別稱陽雀菌、蜂窩蘑，隸屬于子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科[1]，是一種名貴的食藥兼用真菌。羊肚菌肉質脆嫩可口，味道鮮美，含有豐富的酶、多糖、氨基酸、甾醇、有機酸和微量元素等營養成分，在降血脂、調節免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老、保護心血管系統、胃黏膜、腎臟和肝臟等方面具有顯著作用[2-6]。羊肚菌既可以鮮品直接進入市場，又可制成干貨，便于儲藏和遠距離流通，還可應用于化妝品和醫療行業，具有良好的發展前景[7]。因此，羊肚菌的栽培一直為全球食用菌愛好者所重視。羊肚菌的人工栽培研究已有一百多年的歷史，20世紀80年代美國首次報道了室內羊肚菌子實體栽培成功[8]，我國于20世紀70年代初開始探討羊肚菌的人工栽培技術，1992年四川綿陽食用菌研究所朱斗錫[9]教授帶領的團隊取得羊肚菌室外人工栽培技術的成功并推廣應用。時至今日，羊肚菌的人工栽培技術和栽培規模都取得了較大發展，但栽培技術尚不成熟，出菇不穩定，減產和絕收時有發生。目前，我國栽培的羊肚菌以黑色品系為主，梯棱羊肚菌（Morchella importuna）產量高及穩定性好，占栽培總面積的95%以上，六妹羊肚菌（Morchella sextelata）次之，開發潛力較大[10]。試驗對梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌進行了母種培養基和原種培養基的篩選，并比較了溝播、壟播、覆膜和不覆膜栽培2株羊肚菌的生長情況，以期為羊肚菌的栽培提供理論指導，實現產量和效益最大化。

1 材料與方法

1.1 菌（株）種

梯棱羊肚菌（M.importuna）菌株T-1、六妹羊肚菌（M.sextelata）菌株L-1均由山西省農科院食用菌研究所提供。

1.2 母種培養基的篩選

1.2.1 母種培養基

選用6種母種培養基（表1）。

1.2.2 培養及考察方法

分別將T-1菌株和L-1菌株接種于PDA平板上，置于恒溫培養箱中20℃暗培養15 d，待菌絲長滿平板后，用直徑8 mm的打孔器在菌落邊緣打孔，獲得大小相同長有菌絲的菌餅，然后取1塊同步菌餅接入供試的母種培養基中央，置于恒溫培養箱中20℃暗培養15 d。觀察菌落形態，記錄菌絲體生長情況，并計算菌絲體生長速度[11]。每一處理5次重復，

1.3 原種培養基的篩選

1.3.1 供試原種培養基

選用6種原種培養基（表2）。6種培養基按配方拌勻后，加水，使料含水量達65%，料裝入16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋，滅菌。

1.3.2 原種培養及考察方法

將母種接入供試原種培養基上，20℃暗培養，觀察菌絲體生長情況，記錄菌絲長滿培養基的時間，并利用以下公式計算菌絲體平均生長速度。每一處理3次重復。

表1 母種培養基配方

表2 原種培養基配方

菌絲生長速度（mm/d）=[（菌落直徑-7 mm）÷2]÷培養天數

1.4 栽培試驗

以表2中的6種原種培養基配方料制作T-1菌株和L-1菌株栽培種。采用16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋裝料，裝袋后料柱高20 cm，每袋裝濕料600 g。121℃下滅菌1.5 h，冷卻后在接種箱內接種。在20℃的培養室內發菌，菌絲滿袋后，用于播種[12]。

栽培試驗分別設置溝播（將菌種撒在壟與壟之間的溝內）不覆膜、溝播覆膜、壟播不覆膜和壟播覆膜四個處理。

播種前搭建鋼架結構的拱棚作為遮陽棚，然后整地，先將土地澆濕，耕翻一遍，然后分壟挖溝，整理成高畦狀，壟寬60 cm，溝寬60 cm，深10～15 cm，每667 m2地撒100～150 kg石灰。在土壤含水量為20%～28%，即手放在土壤上有涼爽感，用力捏可成團無水滲出，松手后手上有輕微水印時，將羊肚菌菌種揉碎，按每667 m2300袋菌種撒在溝面和壟面。用釘耙翻耕平整菌種和土層，確保有70%以上的菌種被翻入土，覆土厚度為3～5 cm[13]。待地面返白后每20～40 cm放置一個扎孔營養包[營養包配方為：小麥85%，稻殼15%，石膏1%，石灰1%。按配方拌勻后，加水使含水量達65%，然后裝入16 cm×33 cm（折幅×長度）的聚丙烯袋滅菌]，呈品字形擺放。待菌絲長滿營養包后，再撤去。在出菇期間，采用微噴管澆水，時間控制在每天0.5～1 h，保持土壤水分在28%～35%，保持空間相對濕度85%～95%，控制地溫和棚溫不高于20℃，適度通風。觀察并記錄原基、子實體發生時間。待羊肚菌子實體成熟后采收，并記錄產量。

1.5 統計學分析

試驗數據經Microsoft Excel處理并作圖，經Photoshop處理，試驗結果以平均值±標準差表示，用SPSS 18.0統計軟件對數據進行差異顯著性檢驗（P＜ 0.05）。

2 結果與分析

2.1 母種培養基篩選結果

L-1菌株在供試母種培養基上的生長情況見圖1和表3。由圖1和表3可知，L-1菌株在加土PDA上生長速度最快，為（2.51±0.08）cm/d，與PDA和加富加土PDA上的生長速度差異不顯著（P＜0.05）；菌絲濃密，呈黃褐色，培養第10天產生少量菌核。但L-1菌株在PDA和加富加土PDA上菌絲較稀疏，均于培養第10天產生菌核，且后者的菌核數是6種培養基中最多的。在碳氮基礎培養基上，L-1菌株菌絲體雖然致密，但生長速度非常緩慢，為（0.87±0.09）cm/d，15 d內未產生菌核。同樣，在加富PDA上，菌絲雖濃密但生長緩慢，15 d內未產菌核。而在麥粒煮汁培養基上，菌絲稀疏，呈淡白色，生長速度也較緩慢，為（1.79±0.11）cm/d，15 d內未產生菌核。綜合考慮，L-1菌株的最適母種培養基為加土PDA。

圖1 供試母種培養基上L-1菌株的菌落形態（培養10 d）

圖2 供試母種培養基上T-1菌株的菌落形態（培養10 d）

表3 供試6種母種培養基中L-1菌株菌絲生長情況

T-1菌株在供試母種培養基上的生長情況見圖2和表4。由圖2和表4可知，T-1菌株在加富PDA上生長速度最快，為（2.39±0.12）cm/d，與其加富加土PDA上的生長速度差異不顯著（P＜0.05）；菌絲較濃密，呈黃白色，于培養第10天產生少量菌核。在加土PDA上，雖然菌絲的生長速度略低于加富PDA和加富加土PDA，但菌絲濃密，呈樹枝狀，黃褐色，同樣于培養第10天產生少量菌核。T-1菌株在PDA和麥粒煮汁培養基上的生長緩慢，菌絲稀疏，呈白色，均于培養第10天產生少量菌核。在碳氮基礎培養基上，L-1菌株菌絲體雖然潔白濃密，但生長速度非常緩慢，為0.21±0.05 cm/d，另外，菌落呈絨毛狀，15 d內未產生菌核。綜合考慮，T-1菌株的最適母種培養基為加土PDA，其次為加富PDA和加富加土PDA。

表4 6種不同母種培養基中T-1菌株生長的情況

圖3 L-1菌株出菇情況

圖4 羊肚菌T-1菌株栽培結果

2.2 原種培養基篩選結果

L-1菌株在供試原種培養基上的生長情況詳見表5。L-1菌株在培養基①上的生長速度最快，為（2.52±0.15）cm/d，且菌絲體濃密，顯著高于在其他培養基上的生長速度（P＜0.05）；在培養基⑥上的長勢最差，菌絲稀疏呈黃白色絨毛狀。故培養基①為L-1菌株的最適原種培養基。

表5 L-1菌株在不同原種培養基上的生長情況

T-1菌株在不同原種培養基上的生長情況見表6。由表6可以看出，T-1菌株在培養基③上長勢最好，菌絲濃密呈白色細絨狀，生長速度達（2.47±0.24）cm/d，長勢最好，菌絲濃；在培養基⑥上長勢最差，生長速度只有0.18 cm/d；培養基④上的菌絲體生長速度與培養基③相比無顯著性差異（P＜0.05），菌絲較密呈黃白色。故T-1菌株的最適原種培養基為培養基③，其次為培養基④。

表6 不同原種培養基上T-1菌株的生長情況

2.3 栽培試驗結果

根據原種培養基的配方，配制栽培料栽培T-1菌株和L-1菌株。結果L-1菌株只在溝播覆膜栽培料上長出子實體，T-1菌株只在壟播不覆膜栽培料上長出子實體，在其他栽培料上均未形成子實體。具體的栽培試驗結果見表7、表8和圖3、圖4。

可以看出，溝播覆膜時，L-1菌株的原基產生時間為128 d，產量為0.54 kg/m2，顯著高于其他栽培方式（P＜0.05）。除此之外，溝播的產量都顯著高于壟播，溝播不覆膜的產量是壟播不覆膜的2.6倍；覆膜之后的產量都顯著高于不覆膜產量，溝播覆膜的產量是溝播不覆膜的1.38倍。

溝播覆膜時，T-1菌株的原基產生時間為138 d，產量為0.43 kg/m2，顯著高于其他栽培方式（P＜0.05）。同L-1菌株一樣，T-1菌株溝播的產量要優于壟播，覆膜后的產量要優于不覆膜。

比較2個羊肚菌菌株在同種栽培方式的原基產生時間、產量，發現L-1菌株的原基產生時間要早于T-1菌株，產量也顯著高于T-1菌株。溝播覆膜栽培，L-1菌株的產量是T-1菌株的1.25倍。

表7 羊肚菌L-1菌株栽培試驗結果

表8 T-1菌株栽培試驗結果

3 小結與討論

當前我國羊肚菌大田栽培主要包括以下6個環節：菌種制備、整地播種、外源營養袋處理（補料技術）、保育催菇、出菇管理和采收干制[14]。張亞等[13]基于多年的栽培實踐經驗，在現有的大田栽培技術體系下，開發出一種新的羊肚菌覆膜栽培技術，具有保濕、防澇、避光、抑制雜草、加快積溫、促進出菇、控制“菌霜”（無性孢子）的過度生長、定向出菇、節約成本、增強栽培的靈活性等優點。試驗結果表明覆膜栽培可以有效提高L-1菌株和T-1菌株的產量，大大縮短了生產周期。黑色羊肚菌具有低溫耐受性、喜陰、喜濕、抗逆性差[15]特點，因而溝播相比壟播更有利于羊肚菌的出菇和生長，究其原因為壟溝相比于壟背水分更充足。王偉偉[16]對粗腿羊肚菌、羊肚菌和尖頂羊肚菌的菌絲體和菌核的研究發現在加土的培養基中才能在土層的瓶壁上產生較大的菌核，說明土壤的團粒結構及貧瘠條件對產生大量菌核有重要影響。在進行母種培養基的篩選試驗時發現加土培養基和加富加土培養基同樣有大量菌核產生。菌核是羊肚菌子實體產生的重要階段，因此，有必要對菌核的形成與發育進行進一步的研究。此外在碳氮基礎培養基上供試兩個羊肚菌菌株始終未現菌核，但菌絲始終潔白健壯，是否所用氮源（尿素）對延緩其菌絲衰老有影響，仍需進一步研究。