液相色譜-串聯質譜法測定嬰幼兒配方乳粉中六種消毒劑殘留

王浩，陳江龍，張杉，趙麗，張旭

（國家食品質量安全監督檢驗中心，北京 100094）

0 引 言

嬰幼兒配方乳粉是通過添加營養成分，使其組成在數量上和質量上無限接近母乳的營養元素為目標的的調制乳粉。嬰幼兒配方乳粉消費比例逐年增加，所以其安全問題備受廣泛關注。苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨都是常用的消毒劑，乳粉生產企業在生產環節及原料乳中有時會存在殘留，從而造成嬰幼兒營養乳粉中存在上述消毒劑污染；目前，國家還沒有嬰兒配方奶粉中消毒劑殘留的限量標準，為了保護廣大嬰幼兒的健康和利益，對嬰幼兒配方乳粉中消毒劑殘留進行監控有著重要的現實意義。

目前，測定苯扎氯銨等六種消毒劑的方法有示差分光光度法[1]、毛細管電泳法[2]、液相色譜法[3-7]、液相色譜串聯質譜[8]等。液相色譜-質譜聯用技術是近年來新興的檢測技術,由于其對痕量殘留物質強大的定性定量能力,符合目前食品安全檢測所追求的快速高效定性定量測定要求,目前還未見對嬰兒配方奶粉中苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨等六種消毒劑殘留同時定性定量檢測的研究報道。本文采用水超聲溶解，乙腈除蛋白，基質外標法定量，采用高效液相色譜串聯質譜儀進行檢測,前處理簡單，靈敏度高，能夠為嬰兒配方奶粉中多種消毒劑殘留的監管提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑與試劑

1.2 主要儀器與設備

液相色譜-串聯三重四極桿質譜儀，美國Agilent公司；渦旋混合器，海門市其林貝爾公司；超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；離心機，上海安亭科學儀器廠；去離子水發生器，瑞士Millipore公司。

1.3 標準溶液的配制

1.3.1 標準儲備液

分別稱取適量的苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨標準品，分別用甲醇配成0.1 mg/mL的標準儲備液，該溶液在-18℃保存，有效期一年。

1.3.2 中間濃度標準溶液

用甲醇將標準儲備液稀釋成1.0μg/mL，該溶液在2～8℃保存，有效期三個月。

1.3.3 標準工作溶液

用甲醇將中間濃度標準溶液配制成苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨濃度均為50 ng/mL的標準工作液，該溶液在2～8℃保存，有效期一周。

3)在加木墊板后，錨桿支護預應力場壓應力區峰值和壓應力擴散范圍都出現明顯降低。應力峰值降低38%，-0.10、-0.08、-0.02 MPa等各應力等值面面積平均降低27%。

1.3.4 基質標準工作液

稱取約1.0 g陰性樣品,精確至0.01 g，置于10 mL玻璃離心管中，分別加入標準工作液：10μL、20μL、40μL、100μL、200μL，余下操作同1.3。

1.4 樣品處理

稱取1.0 g樣品,精確至0.01 g，置于10 mL具塞比色管中，加入2 mL 60℃～70℃熱水，渦旋30 s后，再加入3 mL乙腈，具塞振搖使蛋白質沉淀，超聲提取10 min，吸取1 mL上清液4℃條件下15 000 r/min離心5 min，液相色譜-串聯質譜測定。

1.5 儀器參數

1.5.1 色譜參數

色譜柱：Hypersil GOLD C18柱，4.6 mm×50 mm,1.9μm；流速：0.35 mL/min；柱溫25℃，進樣量3μL，流動相：20 mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）+甲醇=10:90，V/V。

1.5.2 質譜參數

離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應檢測；干燥氣：N2；霧化氣壓力310 kPa；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速：10 L/min。

表1 六種消毒劑的質譜參數

2 結果與討論

2.1 樣品前處理條件優化

乳粉基質復雜，富含脂肪和蛋白質，所以本方法在樣品中先加入2 mL水，渦旋1 min，使樣品中目標化合物充分溶解，再加入3 mL乙腈，去除樣品中蛋白質。此外，因為消毒劑殘留可能存在環境污染，所以不易做除油和過膜處理，最終采用4℃條件下15 000 r/min后直接進樣。這種前處理的方法簡便快速，既能充分提取樣品中苯扎溴胺等六種消毒劑殘留，又能除去樣品中的蛋白質，定量限均為0.5μg/kg，平均加標回收率＞85%，可以完全滿足實際檢測要求。

2.2 儀器條件

2.2.1 色譜柱的優化

為了有利于色譜峰的分離及鋒形的改善，本方法分別采用資生堂MGⅢ-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm)、Hypersil GOLD C18色譜柱(50 mm×4.6 mm,1.9μm)和Agilent Extend-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,5μm)進行分離試驗，發現Hypersil GOLD C18色譜柱(50 mm×4.6 mm,1.9μm))峰形及出峰時間較為合適。

2.2.2 流動相

苯扎溴胺等六種消毒劑極性相差很大，首先考慮用梯度洗脫的方式實現目標化合物的有效分離，但是隨后的實驗發現C16-苯扎氯銨會出現假陽性情況，因此確定等度洗脫的流動相。分別比較了20 mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）-乙腈、10 mmolL乙酸銨水溶液-乙腈、水-乙腈等三種體系，發現后兩種體系C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨會出現不同程度的峰形展寬，靈敏性降低。所以本實驗選擇20mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）-乙腈=10:90，V/V。

2.3 方法學結論

2.3.1 基質工作曲線、檢出限、定量限

乳粉富含油脂蛋白質，為了消除測定液中存在的基質效應，本方法首先在前處理過程中采取除油和除蛋白處理，同時采用空白樣品加標法配制的基質工作曲線，極大程度消除測定中的基質效應，同時又明顯提高了定量的準確性。用基質標準工作液分別進樣3μL，測定結果經線性回歸（y為峰面積，Counts；x為濃度，μg/L），同時用空白樣品進行加標實驗，在信噪比均大于3的條件下能檢出，將此添加量定為檢出限，在信噪比均大于,10的條件下能檢出，將此添加量定為定量限。結果見表2。

表2 六種消毒劑的線性方程、線性關系、相關系數及檢出限

2.3.2 方法的回收率和精密度

選取空白樣品進行回收率和精密度試驗。每組分別定量加入苯扎溴胺等六種消毒劑標準品，添加水平分別為0.5μg/kg、1.0μg/kg、5.0μg/kg，按供試品溶液制備方法制備后進行測定,結果見表3。按供試品溶液制備方法制備后進行測定,結果見表3。從表3中可看出，不同濃度平均加標回收率87.3%～104.6%，平均相對標準偏差為2.96%～9.87%（n=6）。圖1為加標樣品中MRM色譜圖。

表3 加標樣品回收率與相對標準偏差（n=6）

圖1 苯扎溴胺等六種消毒劑的加標MRM色譜圖

2.4 實際樣品檢測

利用本方法對市場銷售的50種嬰幼兒營養乳粉進行檢測，其中32個樣品檢出C12-苯扎氯銨（濃度范圍為0.63μg/kg-50.7μg/kg，檢出率64.0%），6個樣品檢出C14-苯扎氯銨（濃度范圍為0.56μg/kg-2.39μg/kg，檢出率12.0%），2個樣品檢出四丁基硫酸氫銨（濃度分別為0.56μg/kg和2.30μg/kg，檢出率4.0%），1個樣品檢出二癸基二甲基氯化銨（濃度為22.6μg/kg，檢出率2.0%），苯扎溴銨和C14-苯扎氯銨未檢出。上述結果表明，嬰幼兒營養乳粉中確實存在消毒劑殘留，其對嬰幼兒健康存在的風險應當引起國家監管部門及嬰配生產企業重視。

3 結論

建立了嬰幼兒配方乳粉中苯扎溴胺等六種消毒劑的液相色譜-串聯質譜測定方法。該法樣品加標回收率87.3%～104.6%，平均相對標準偏差為2.96%～9.87%（n=6），定量限及精密度均能滿足殘留檢測要求，能為我國嬰幼兒配方乳粉中消毒劑殘留的監管與監督提供技術支撐。