采供血機構(gòu)HBSAg金標(biāo)法檢測后再次復(fù)查的必要性探討

虞莉 黎金鳳(通訊作者)

（揚州市中心血站 江蘇 揚州 225012）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起我國肝炎疾病的主要病毒，我國HBV的攜帶者高達6%左右，是一個“乙肝大國”[1]。其通過多種途徑可以傳播，血液傳播也是其中一個方式，因此作為乙型肝炎病毒感染的最主要的檢測指標(biāo)之一的乙肝表面抗原（HBsAg），是采供血機構(gòu)篩查血液的必須檢測的指標(biāo)[2]。其檢測方法主要有金標(biāo)試紙法、ELISA法以及實時熒光聚式酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）等。采供血機構(gòu)將金標(biāo)試紙法作為HBsAg的初篩方法，一旦檢測呈陽性反應(yīng)，就不允許其進行獻血。初篩合格的獻血者獻血后從血袋分別留取三管標(biāo)本，用于兩種不同廠家的ELISA試劑和一次核酸的檢測。不合格初篩標(biāo)本也帶回檢驗科用兩個廠家的ELISA試劑復(fù)檢。現(xiàn)將我站2017年1月—10月收集的197份HBsAg金標(biāo)法弱陽性標(biāo)本和30351份金標(biāo)陰性獻血者的靜脈血標(biāo)本進行ELISA檢測并對其結(jié)果分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

2017年1月—10月收集的HBsAg金標(biāo)法陽性標(biāo)本197份和檢測陰性的30351份外周血標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 儀器 STAR全自動加樣系統(tǒng)(瑞士Hamilton)、FAME全自動酶免分析系統(tǒng)(瑞士Hamilton)、血清學(xué)離心機、加樣槍、一次性加樣吸頭等。

1.2.2 試劑 乙肝金標(biāo)快速試紙條（英科新創(chuàng)），乙肝病毒表面抗原診斷試劑盒（上海科華/珠海麗珠）。

1.3 方法

對30548份標(biāo)本分別采用上海科華和珠海麗珠生產(chǎn)的乙肝病毒表面抗原診斷試劑盒進行檢測。標(biāo)本用STAR全自動加樣系統(tǒng)進行加樣，加樣結(jié)束后采用FAME全自動酶免分析系統(tǒng)進行后處理并得出結(jié)果。

2.結(jié)果

2.1 對30548份獻血者標(biāo)本分別用金標(biāo)法和ELISA法檢測HBsAg，結(jié)果見表1。

從表1中可以看出ELISA法檢測標(biāo)本的HBsAg陽性檢出率要高于金標(biāo)試紙法。

表1 兩種方法對30548個標(biāo)本檢測結(jié)果 [n（%）]

用兩個廠家ELISA法試劑檢測標(biāo)本，任意一家試劑檢測陽性，結(jié)果均判定為陽性。

2.2 應(yīng)用兩個廠家ELISA法試劑分別對HBsAg金標(biāo)法陽性和陰性的標(biāo)本進行檢測對比見表2。

表2 金標(biāo)與ELISA（兩次不同廠家）法試劑檢測結(jié)果對比表 [n（%）]

從表2中可以看出金標(biāo)法檢測出陽性的標(biāo)本，經(jīng)過ELISA檢測后約25.4%最終判定為陰性，說明金標(biāo)法假陽性率仍較高。

3.討論

根據(jù)實驗結(jié)果顯示ELISA試劑的陽性率高于金標(biāo)法。金標(biāo)法檢測的假陰性率為0.25%和假陽性率25.4%。這除了在方法學(xué)上，金標(biāo)法在靈敏度和特異性方面都不如ELISA外，還有其他實際工作中的一系列影響。采供血機構(gòu)對上述檢測結(jié)果的處理辦法如下：（1）對金標(biāo)法陽性和ELISA法雙陽性獻血者進行永久性屏蔽，終身不能獻血；（2）金標(biāo)法陽性、ELISA法雙陰性獻血者，在其他獻血檢測項目都合格的情況下，可以通知其獻血；（3）金標(biāo)法陽性、ELISA法單陽的獻血者進行暫時性屏蔽，并通知其三個月以后進行抽血復(fù)查，若ELISA檢測結(jié)果為雙陰性則允許其獻血者歸隊；（4）金標(biāo)法陰性、ELISA法雙陽的則需保密性棄血，并永久性屏蔽，不得獻血；（5）金標(biāo)法陰性、ELISA法單陽的則需保密性棄血，并對其暫時性屏蔽，通知獻血者三個月以后進行復(fù)查，若ELISA檢測結(jié)果為雙陰性，則允許其歸隊[3]；（6）金標(biāo)法陰性、ELISA法雙陰的，其血液標(biāo)本再次進行核酸檢測。核酸檢測合格后方可以確認HBsAg項目合格。

為了進一步保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止檢測結(jié)果的假陽性過高，采供血機構(gòu)需要制定合理規(guī)范的檢測流程，對檢測結(jié)果應(yīng)慎重分析。具體如下：（1）在采供血機構(gòu)，金標(biāo)法一般用于街頭獻血或者單位團體獻血的初篩實驗。站外采血現(xiàn)場情況復(fù)雜，導(dǎo)致檢測人員未按規(guī)定的時間（10min～15 min）觀察結(jié)果，這雖篩除了很多強陽性標(biāo)本，卻漏檢了弱陽性標(biāo)本[4]。（2）因采血現(xiàn)場實驗條件的簡陋，加樣槍時有被摔，使得加樣量不準(zhǔn)，影響結(jié)果判斷；而這在實驗室是不可能發(fā)生的；（3）個別標(biāo)本可能存在HBSAg的基因突變，抑或產(chǎn)生新的其它亞型，通過金標(biāo)法無法檢出[5]。（4）現(xiàn)場環(huán)境溫濕度達不到要求，過分干燥或潮濕的環(huán)境以及過高或過低的溫度會影響試紙條的靈敏度和特異性；（5）很多外采操作人員一般都是非檢驗專業(yè)，其本身的專業(yè)水平有限，時有操作不規(guī)范，以及對檢測結(jié)果的判讀因缺乏經(jīng)驗而不夠準(zhǔn)確。而檢驗科復(fù)做，除了ELISA方法學(xué)本身的優(yōu)勢外，一般實驗室的溫濕度都能達到實驗要求，整個ELISA實驗的全部過程都是自動化，避免了人員操作的干擾因素。

因此對金標(biāo)法檢測后的標(biāo)本重新檢測就顯得尤為重要。在實際工作中，根據(jù)《血站實驗室質(zhì)量管理辦法》要求采供血機構(gòu)需要對獻血者標(biāo)本應(yīng)用兩個廠家ELISA法試劑和一次核酸檢測。但有很多采供血機構(gòu)不對金標(biāo)法陽性的標(biāo)本進行其他方法學(xué)的復(fù)查，筆者認為這是不可取的。通過ELISA法對金標(biāo)法陽性標(biāo)本的再次檢測，挽回了部分假陽性的獻血者，保護了他們繼續(xù)行使無償獻血的權(quán)利，還可以擴充獻血隊伍；同時消除了這些假陽性獻血者的精神負擔(dān)，創(chuàng)造了一定的社會效益，維護了血站的形象；而金標(biāo)法陰性經(jīng)ELISA檢測陽性的標(biāo)本，我們會用兩種不同的試劑，將標(biāo)本和其相對應(yīng)的血袋上的辮血雙孔復(fù)做，只要有一孔有反應(yīng)性，則將其血液作報廢處理；所有孔都有反應(yīng)性，則屏蔽該獻血員。部分有反應(yīng)的則血液報廢，通知獻血者定期復(fù)查，兩種試劑檢測都是陰性后，重新恢復(fù)獻血者獻血權(quán)利。目前，揚州市中心血站對HBSAg的檢測推行了先采用不同廠家兩種試劑盒的兩次ELISA檢測，結(jié)果雙陰性的標(biāo)本再進行一次核酸檢測。一定程度上節(jié)約了核酸檢測的成本，保障臨床用血的安全[6]。

綜上所述，為了保障臨床用血安全，珍惜寶貴血液資源。采供血機構(gòu)必須提高血液檢測的有效性和可靠性；重視操作人員業(yè)務(wù)技能培訓(xùn)，使其嚴格遵守各項操作規(guī)程以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。