茶枝屑代料栽培靈芝配方優(yōu)選

賀望興，石旭平，胡 佳，黎小萍，張賤根，胡桂萍，尹志亮，魏云輝*

(1.江西省蠶桑茶葉研究所，江西南昌 330203；2.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物研究所，江西南昌 330200)

靈芝(Ganodermalucidum)古稱瑞草，是我國醫(yī)藥學(xué)寶庫中一種寶貴的藥用真菌[1]。傳統(tǒng)的靈芝人工栽培方式主要是椴木栽培[2]，但在食用菌產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的過程中，由于忽略了對林木資源合理采伐的管理，造成我國闊葉樹資源過快過量的消耗，森林生態(tài)平衡問題日益突顯。茶枝屑是指茶園修剪下來的茶枝經(jīng)過粉碎得到的顆粒狀木屑，其主要成分包括纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，也含少量的茶多酚、茶多糖和咖啡堿等。研究發(fā)現(xiàn)，茶枝屑可用于栽培靈芝、茶樹菇、花菇以及黑木耳等食用菌[3]，同時(shí)發(fā)現(xiàn)茶枝屑是一種理想的靈芝栽培原料[4]。利用茶產(chǎn)業(yè)鏈廢棄的茶枝栽培靈芝將有效緩

解“菌林沖突”現(xiàn)狀，降低靈芝生產(chǎn)成本，減少環(huán)境污染[5]。雖然目前對茶枝屑栽培靈芝進(jìn)行了初步可行性研究[6-8]，但對配方優(yōu)選研究尚較少，因此，筆者對茶枝屑代料栽培靈芝配方進(jìn)行優(yōu)選試驗(yàn)，以期為推廣茶枝屑代料栽培靈芝模式提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1中華靈芝。中華靈芝由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院應(yīng)用微生物研究所提供。

1.1.2培養(yǎng)料。培養(yǎng)料及其比例見表1。

表1 培養(yǎng)料配方

1.1.3茶枝屑。茶枝屑均來自江西省蠶桑茶葉研究所內(nèi)，選用新鮮、干燥、無霉變、無蟲蛀的茶枝，粉碎后過3目標(biāo)準(zhǔn)篩備用。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1菌袋制作。采用17 cm×38 cm×0.05 cm規(guī)格的常壓聚乙烯塑料菌袋，按常規(guī)方法拌料、裝袋(每袋干料約 600 g)、滅菌、接種。每個(gè)配方各制150袋，設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50袋。

1.2.2菌袋培養(yǎng)。菌袋接種完后按合適密度疊放置于室內(nèi)培養(yǎng)室避光培養(yǎng)，室溫控制在22～28 ℃，空氣相對濕度為60%～70%。

1.2.3出菇管理。采用室內(nèi)立體栽培、兩頭出菇的方式出菇，控制出菇室室內(nèi)溫度26～28 ℃，空氣相對濕度保持在85%～95%，保持室內(nèi)通風(fēng)良好，盡量采用散射光照射菌蕾等條件促進(jìn)靈芝子實(shí)體的生長，當(dāng)靈芝菌蓋邊緣白色生長圈消失、菌蓋不再增大、靈芝孢子大量噴出時(shí)，開始采收靈芝。

1.3測定項(xiàng)目與方法

1.3.1菌絲生長狀況。觀察菌絲的生長情況(長勢)，測定菌絲生長速度。每個(gè)配方下的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取5袋正常生長的菌袋，每隔3 d測量一次菌絲生長長度，測量時(shí)間至菌絲長滿袋為止。

1.3.2靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率。采收后的靈芝立即置于60 ℃恒溫烘箱內(nèi)烘干至恒重測產(chǎn)，生物轉(zhuǎn)化率以兩潮的靈芝產(chǎn)量計(jì)算，每個(gè)配方下的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取10袋子實(shí)體，對產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率進(jìn)行測定。

生物轉(zhuǎn)化率=(靈芝產(chǎn)量干重/培養(yǎng)料干重)×100%

1.3.3靈芝商品品質(zhì)。靈芝菌蓋直徑以菌柄基部至菌蓋最長距離為指標(biāo)測量，菌蓋厚度以菌蓋厚度最大的區(qū)域縱切面長度為指標(biāo)測量。

靈芝多糖的測定采用國標(biāo)食用菌中粗多糖含量測定方法：NY/T 1676—2008。

采用HPLC法測定靈芝酸含量，其條件：HPLC色譜柱為C18柱，流動相A為水，流動相B為甲醇/乙酸=100∶0.5(V/V)；梯度洗脫時(shí)間20 min，甲醇濃度從80%上升至100%，流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長254 nm ；進(jìn)樣量20 μL。

茶多酚的測定采用國標(biāo)茶多酚測定方法：GB/T 8313—2008。

1.3.4質(zhì)量安全性評價(jià)。將靈芝樣品寄往蘇州歐陸分析技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行靈芝農(nóng)藥殘留測定。

2 結(jié)果與分析

2.1菌絲生長狀況由表2可知，5個(gè)配方下靈芝菌絲生長狀況均正常。與對照組靈芝配方相比，茶枝屑代料栽培靈芝菌絲的萌發(fā)時(shí)間以及生長速率均慢，菌絲長滿袋時(shí)間平均長2～6 d；但試驗(yàn)組菌袋染菌率均比對照組少，可能是由于對照組菌袋營養(yǎng)條件太豐富，導(dǎo)致染菌概率增加。在4個(gè)試驗(yàn)組配方中，隨著代料栽培配方中茶枝屑含量的增加，靈芝菌絲初期生長速度隨之下降，但在靈芝菌絲生長中、后期，菌絲生長速度加快，其中3號配方(45%的茶枝屑)靈芝菌絲生長速度最快，平均生長速率為1.04 cm/d，達(dá)到對照組菌絲生長速度的87%，茶枝屑配方量繼續(xù)增加，菌絲生長速度開始下降，推測與茶枝屑中多酚、醛類等抑菌成分有關(guān)，茶枝屑含量越多的配方對菌絲的抑制作用越強(qiáng)，但當(dāng)菌絲在生長中、后期適應(yīng)了茶枝屑代料栽培培養(yǎng)基中的多酚、醛類等抑菌成分后，菌絲開始正常生長[9]。

表 2 菌絲生長狀況

2.2靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率茶枝屑代料栽培的靈芝均能正常生長,芝形基本為扇形,外觀形態(tài)正常,色澤均勻一致,均能產(chǎn)生孢子,孢子形態(tài)特征正常。由表3可知，第一茬靈芝平均干重均比第二茬高；在4個(gè)試驗(yàn)組配方中，隨著代料栽培配方中茶枝屑含量的增加，靈芝產(chǎn)量及生物轉(zhuǎn)化率先增加后降低，在3號配方下最高，其中除4號配方比對照低外，其余配方均高于對照組，產(chǎn)量分別提高了10.7%、12.5%、30.3%。由此可知，茶枝屑配方量應(yīng)控制在45%左右為宜。

表3 靈芝產(chǎn)量和生物轉(zhuǎn)化率

2.3靈芝菌蓋直徑茶枝屑代料栽培的靈芝子實(shí)體商品特征與對照組栽培的靈芝一致。由圖1可知，在茶枝屑含量一定范圍內(nèi)，隨著茶枝屑含量的增加靈芝菌蓋直徑隨之增加，3號栽培配方下靈芝菌蓋直徑最長，平均菌蓋直徑達(dá)7.85 cm，但超過45%的茶枝屑栽培配方后，靈芝菌蓋的生長受到抑制。與對照組靈芝菌蓋直徑相比，3號配方靈芝菌蓋平均直徑長7.1%；除4號配方與對照組菌蓋直徑差異顯著外，其他配方均差異不顯著。表明45%茶枝屑配方促進(jìn)靈芝子實(shí)體菌蓋的生長。

圖1 不同茶枝屑配方靈芝子實(shí)體菌蓋直徑Fig. 1 Cap diameter of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.4靈芝菌蓋厚度由圖2可知，在茶枝屑含量一定范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝菌蓋厚度也隨之增厚，當(dāng)茶枝屑含量超過45%時(shí)，靈芝菌蓋厚度開始降低。與對照組靈芝菌蓋厚度相比，2、3號配方靈芝菌蓋略厚，分別比對照組提高了2.7%、5.8%。這說明30%～45%的茶枝屑添加量有利于提高靈芝菌蓋厚度，提高靈芝商品品質(zhì)。

圖2 不同茶枝屑配方靈芝子實(shí)體菌蓋厚度Fig.2 Cap thickness of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.5靈芝多糖含量由圖3可知，在茶枝屑含量一定的范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝子實(shí)體多糖含量也隨之增加，茶枝屑代料栽培的靈芝子實(shí)體多糖含量均比對照組高，其中除1號配方靈芝子實(shí)體多糖含量與對照組差異不顯著外，其他配方與對照組差異顯著。檢測結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝子實(shí)體多糖含量比對照組分別提高了6.2%、20.8%、30.5%、32.1%。推測原因可能與茶枝和茶葉中營養(yǎng)成分豐富，含有茶多糖、維生素、微量元素等特殊誘導(dǎo)因子有關(guān)，這些誘導(dǎo)因子具有促進(jìn)靈芝胞外多糖的合成功能[10]。多糖是靈芝的主要藥用活性成分，表明茶枝屑代料栽培模式提高了靈芝的藥用價(jià)值。

圖3 不同茶枝屑配方靈芝多糖含量Fig.3 Polysaccharide content of Ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.6靈芝酸含量由圖4可知，在茶枝屑含量一定的范圍內(nèi)，隨著栽培配方中茶枝屑含量的增加靈芝酸含量也隨之增加，當(dāng)茶枝屑含量超過45%時(shí)，靈芝酸含量開始降低。檢測結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝酸含量均比對照組高， 3號配方靈芝酸含量最高，比對照組提高了 19.1%。由此可知，茶枝屑代料栽培靈芝能有效地提高靈芝酸含量，提高靈芝的商品品質(zhì)。

圖4 不同茶枝屑配方靈芝酸含量Fig.4 Triterpenes content of ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.7茶多酚含量由圖5可知，茶枝屑代料栽培的靈芝子實(shí)體中均檢測到茶多酚含量，對照組中未檢測到茶多酚含量，茶多酚含量隨著栽培配方中茶枝屑量的增加而增加，最高達(dá)0.61%。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝中含有茶葉所特有的茶多酚含量，這大大提高了靈芝的商品品質(zhì)，具體機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

圖5 不同茶枝屑配方下茶多酚含量Fig.5 Tea polyphenols content of ganoderma lucidum cultured with tea-branches dust in different application

2.8質(zhì)量安全性評價(jià)靈芝樣品檢測結(jié)果表明，各配方靈芝子實(shí)體中300種常見農(nóng)藥殘留濃度均小于定量限。表明利用茶枝屑代料栽培靈芝解決了利用棉籽殼等其他農(nóng)作物廢棄物代料栽培靈芝帶來的農(nóng)藥殘留超標(biāo)的問題，茶枝屑代料栽培靈芝能有效地提高靈芝的食用安全性。

3 結(jié)論與討論

研究表明，靈芝菌絲不僅能在以茶枝屑為主的代料配方上正常生長，而且均能正常出芝，產(chǎn)生孢子，子實(shí)體和孢子形態(tài)特征也與雜木屑代料栽培的靈芝基本一致，因此，茶枝可以作為靈芝栽培新的代料。

綜合比較各配方靈芝菌絲生長狀況、子實(shí)體產(chǎn)量、生物轉(zhuǎn)化率以及靈芝商品品質(zhì)等指標(biāo)，篩選出3號配方為茶枝屑代料栽培靈芝的優(yōu)選配方，該配方下靈芝菌絲生長速度快，菌袋染菌低，生物轉(zhuǎn)化率高，子實(shí)體菌蓋直徑長，厚度最厚，靈芝多糖、靈芝酸含量高，有效地提高了靈芝的藥用價(jià)值以及商品品質(zhì)。

靈芝質(zhì)量安全分析試驗(yàn)結(jié)果表明，茶枝屑代料栽培的靈芝子實(shí)體農(nóng)藥殘留量低于國家農(nóng)藥殘留限定值，靈芝子實(shí)體檢測出茶多酚含量，表明茶葉中的營養(yǎng)成分可能隨著靈芝菌絲的生長轉(zhuǎn)移到靈芝中，提高了靈芝的商品價(jià)值。因此，茶枝屑代料栽培靈芝是一種很好的原料，它有效地提高了靈芝的產(chǎn)量和質(zhì)量，具有廣闊的發(fā)展前景。