血必凈注射液對膿毒癥患者血清miR- 223及高遷移率族蛋白B1 表達的影響

閆春江，黎永琳，李燕，王津，奚小土

膿毒癥是臨床常見的危重癥，由嚴重外傷、大面積燒傷、重癥感染等引起，具有病情變化快、預后差的特點。細菌在病理狀態下易位進入血液循環并大量繁殖是膿毒癥發生發展的基本病理環節，血液循環內細菌的大量繁殖可進一步引起全身炎性反應的激活。微小RNA-223(miR-223)/高遷移率族蛋白1(HMGB1)途徑是體內調控炎性反應瀑布式激活的重要途徑，miR-223能夠靶向抑制核因子κB抑制因子(IκB)并削弱IκB對核因子κB(NF-κB)的抑制作用，進而使NF-κB發生活化、啟動HMGB1的表達并介導炎性反應的劑量放大激活[1-2]。血必凈注射液是近年來發展起來的具有抗菌、抗毒素作用的中藥注射液，在膿毒癥的治療中展現出積極價值。已有動物實驗表明，血必凈注射液能夠使膿毒癥大鼠體內HMGB1的生成減少[3]，由此提示血必凈可能通過調節HMGB1來發揮膿毒癥治療作用。為了明確血必凈是否通過miR-223/HMGB1途徑在膿毒癥的治療中發揮作用，本研究具體分析了血必凈注射液治療后膿毒癥患者外周血中miR-223及HMGB1的變化及其與病情轉歸、全身炎性反應的相關性，旨在探明血必凈發揮膿毒癥治療作用的分子途徑。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年4月—2018年9月廣東省中醫院急診科收治的膿毒癥患者60例作為研究對象，納入標準：(1)符合膿毒癥的臨床診斷標準[4]；(2)預計生存期超過3 d；(3)APACHEⅡ評分大于12分；排除標準：(1)合并腫瘤、急性腦卒中、風濕免疫系統疾病及精神病患者；(2)入組前接受過抗感染治療的患者。采用隨機數字表法分為2組，每組30例。觀察組：男17例，女13例，年齡32～64(44.57±6.83)歲；肺部感染21例，腹腔感染4例，燒傷5例；合并糖尿病8例，高血壓12例。對照組：男17例，女13例，年齡32～64(44.57±6.83)歲；肺部感染22例，腹腔感染4例，燒傷4例；合并糖尿病7例，高血壓13例。2組一般資料比較無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 治療方法 2組患者均進行膿毒癥的常規治療，包括抗感染、維持水電解質平衡、營養支持，根據病程中出現的情況對癥進行護肝、營養心肌等藥物治療；觀察組在常規治療的基礎上加用血必凈注射液100 ml加入0.9%氯化鈉注射液100 ml靜脈滴注,每天2次，連續治療3 d。

1.3 觀察指標與方法 治療前及治療后3 d時，采集患者肘靜脈血10 ml分離血清待測。(1)血清miR-223、HMGB1：采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定HMGB1(試劑盒購自美國DSL公司)，采用日本Takara公司的mirVanamiRNA試劑盒提取細胞中RNA并純化，使用PrimeScript RT reagent Kit 進行逆轉錄并測定miR-223的表達量；(2)炎性因子：采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)、內毒素(內毒素)的含量(試劑盒購自美國DSL公司)；(3)病情嚴重程度：采用急性生理學和慢性健康狀況評分系統Ⅱ(APACHEⅡ)評分、感染相關臟器功能衰竭評估(SOFA)評分評價。APACHEⅡ評分由急性生理學評分、年齡評分、慢性健康狀況評分3部分組成；SOFA評分包括呼吸、凝血、肝臟、循環、神經、腎臟6個方面；APACHEⅡ評分總分值0～71分、SOFA評分總分0～24分，得分越高，病情越重。

2 結 果

2.1 APACAEⅡ評份、SOFA評份、WBC計數變化比較 治療前2組APACHEⅡ評分、SOFA評分、WBC計數比較，差異無統計學意義(P>0.05)，治療后3 d 2組均明顯降低(P<0.01)，且觀察組降低較對照組更明顯(P<0.01)，見表1。

2.2 血清miR-223表達量、HMGB1含量比較 治療前2組血清miR-223表達量、HMGB1含量比較，差異無統計學意義(P>0.05) ，治療后3 d 2組均明顯降低(P<0.01)，且觀察組較對照組降低更明顯(P<0.05)，見表2。

2.3 血清炎性介質比較 治療前2組血清CRP、PCT、內毒素含量比較，差異無統計學意義(P>0.05)， 治療后3 d 2組均明顯降低(P<0.01)，且觀察組降低較對照組更明顯(P<0.01)，見表3。

表2 2組血清miR-223表達量、HMGB1含量比較

表3 2組血清炎性介質比較

2.4 相關性分析 血清miR-223表達量、HMGB1含量與CRP、PCT、內毒素、APACHEⅡ評分、SOFA評分、WBC計數呈正相關，見表4。

表4 血清miR-223、HMGB1與各指標間相關性

3 討 論

膿毒癥是一類嚴重的感染性疾病，重癥感染、大面積燒傷、重大外科手術后菌群移位發生菌血癥是疾病發生的基礎，進一步引起全身炎性反應的激活進展為膿毒癥[5-6]。血必凈注射液是近年來被用于膿毒癥治療的中藥注射液，已有國內研究報道，血必凈注射液治療膿毒癥能夠取得積極療效[7-9]，本研究的結果顯示：2組治療后的APACHEⅡ評分、SOFA評分、WBC計數均明顯降低，且觀察組治療后的APACHEⅡ評分、SOFA評分、WBC計數明顯低于對照組。血必凈注射液以血府逐瘀湯為基礎，配合以紅花、丹參、當歸等藥物，主要起到清熱解毒、活血化瘀的作用，結合本研究對APACHEⅡ評分、SOFA評分、WBC計數的分析結果提示：在常規治療的基礎上加用血必凈注射液能夠改善病情、取得更為理想的療效。

全身炎性反應的放大激活是膿毒癥病情發展變化的核心環節，多種炎性信號通路在該環節內發生活化并介導了炎性細胞的激活、炎性因子的釋放。miR-223/HMGB1是近年來新發現的在炎性反應激活過程中發揮重要作用的途徑，本研究的分析顯示：2組治療后的外周血miR-223表達量及血清HMGB1含量明顯降低，且觀察組明顯低于對照組。根據現有研究，miR-223能夠靶向抑制IκB、削弱IκB對NF-κB的抑制作用，進而使NF-κB激活、進入細胞核并啟動HMGB1的表達[10-11]；而HMGB1具有促炎活性，能夠促進多種炎性細胞的激活以及炎性介質的釋放[12]。已有動物實驗報道，膿毒癥大鼠中miR-223呈高表達的趨勢并且能夠使NF-κB的活性增強，進而介導大鼠體內炎性反應的激活[13]。結合本研究對miR-223及HMGB1含量的分析結果表明，常規治療能夠使膿毒癥患者體內miR-223/HMGB1途徑受到抑制，在常規治療的基礎上加用血必凈注射液能夠增強miR-223/HMGB1途徑受抑制的程度，進而也提示血必凈通過miR-223/HMGB1途徑來發揮治療膿毒癥的作用。

miR-223/HMGB1在炎性反應的級聯激活過程中發揮了重要作用，miR-223高表達所引起的HMGB1表達增多能夠在膿毒癥病程中介導炎性介質的級聯釋放。CRP是炎性反應過程中肝細胞在促炎因子刺激下合成和分泌的急性時相蛋白，能夠反映炎性反應的程度[14-16]；PCT是降鈣素的無活性前體，生理條件下極少釋放進入血液循環，細菌感染后能夠刺激全身多個實質臟器的細胞分泌PCT[17]；內毒素是革蘭陰性桿菌的細胞壁成分，在細菌裂解過程中大量釋放并具有極強的促炎活性[18-20]。本研究通過分析治療前后上述炎性介質的變化可知：2組治療后的血清CRP、PCT、內毒素含量明顯降低，且觀察組明顯低于對照組，提示血必凈治療能夠顯著減少膿毒癥患者體內炎性介質的釋放，有利于減輕炎性反應的激活程度，這一結果與miR-223/HMGB1的變化相一致。進一步分析miR-223/HMGB1與炎性介質的相關性可知：血清中miR-223表達量、HMGB1含量與CRP、PCT、內毒素的含量呈正相關。由此進一步提示膿毒癥病程中miR-223/HMGB1途徑的改變與炎性介質釋放的變化有關，血必凈能夠通過抑制miR-223/HMGB1途徑來減少膿毒癥患者體內炎性介質的釋放、抑制炎性反應的級聯放大。

綜上所述，在常規治療的基礎上加用血必凈注射液治療膿毒癥能夠改善病情、減輕炎性反應；抑制miR-223/HMGB1可能是血必凈發揮治療作用的機制。

利益沖突：無

作者貢獻聲明

閆春江：設計及實施研究方案，數據收集，撰寫論文；黎永琳、李燕：輔助數據分析整理；王津：研究方案指導及修訂論文；奚小土：論文審核