小鼠十二指腸胚后發(fā)育的組織形態(tài)學(xué)觀察

劉曉東，彭利蘭，龍征榮，莘海亮

（黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 凱里 556000）

小腸是消化吸收的主要器官，十二指腸和空腸是消化吸收糖類、脂類、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及水、電解質(zhì)等的主要部位[1]。十二指腸與其他管壁一樣，由黏膜、黏膜下層、肌層與外膜（漿膜）組成[2]。黏膜層由上皮、固有層和黏膜肌層構(gòu)成。黏膜表面有許多細(xì)小的突起，稱為腸絨毛，由上皮和固有層共同向腸腔突起而成。絨毛的根部上皮向固有層下陷形成管狀的腸腺，稱作隱窩[3]。小腸絨毛-隱窩軸的增殖與分化，特別是絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度及黏蛋白數(shù)量等參數(shù)是衡量十二指腸功能和生長(zhǎng)發(fā)育的重要形態(tài)學(xué)參數(shù)。本文通過(guò)對(duì)不同日齡小鼠十二指腸的絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度和黏蛋白數(shù)量進(jìn)行測(cè)定及組織學(xué)觀察，來(lái)探討小鼠十二指腸的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律，為十二指腸黏膜結(jié)構(gòu)及功能的基礎(chǔ)性研究提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物取材 分別隨機(jī)選取1、3、5、10、15、20、25、35 日齡健康昆明小鼠各 4 只，雌雄各半。禁食24h，采用脊椎脫位法處死小鼠，取其十二指腸染色，通過(guò)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 主要試劑 中性福爾馬林固定液，1%阿利新蘭醋酸水溶液，過(guò)碘酸溶液，1N鹽酸，偏重亞硫酸鈉，無(wú)色品紅液（Schiff氏液）。

1.3 小腸絨毛及隱窩檢測(cè) 光鏡下觀察，每個(gè)視野測(cè)定8個(gè)小腸絨毛的長(zhǎng)度和隱窩深度，同時(shí)觀察小腸黏膜形態(tài)發(fā)育中的組織學(xué)變化。

1.4 黏液蛋白測(cè)定 新鮮十二指腸組織用阿利新蘭-PAS染色處理，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定黏蛋白數(shù)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 絨毛、隱窩、黏蛋白數(shù)據(jù)用Xˉ+SD表示，應(yīng)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)7.05版本軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果

2.1 小鼠十二指腸黏膜發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察 小鼠十二指腸四層結(jié)構(gòu)分明，低倍鏡下可見(jiàn)皺襞，腸絨毛呈長(zhǎng)指狀，伸向腸腔的絨毛可見(jiàn)分叉、融合及彎曲現(xiàn)象。小鼠小腸絨毛長(zhǎng)度隨著日齡的增加而增長(zhǎng)：5日齡前腸絨毛增長(zhǎng)緩慢，1、3、5日齡間差異不顯著（P＞0.05）；10日齡至 35日齡間，兩兩相比差異極顯著（P＜0.01），見(jiàn)圖1。小鼠小腸隱窩深度隨著日齡的增加亦呈增加趨勢(shì)：1、3日齡間差異不顯著（P＞0.05）；5日齡至 35日齡間，兩兩相比差異極顯著（P＜0.01），且增長(zhǎng)趨勢(shì)逐漸加快（圖1）。絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值在7.50左右波動(dòng)，各日齡間差異不顯著（P＞0.05），詳見(jiàn)表1。

圖1 不同日齡小鼠的小腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度

圖2 不同日齡小鼠的小腸黏膜黏蛋白數(shù)量

表1 十二指腸黏膜發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察

2.2 十二指腸黏膜的黏蛋白數(shù)量 隨著日齡增加，腸絨毛及腸腺內(nèi)的黏蛋白均有增多，但腸腺增加得更明顯，20日齡后黏蛋白主要分布于腸腺。阿利新蘭-PAS染色顯示：十二指腸黏膜早期極少見(jiàn)黏蛋白，隨著日齡增長(zhǎng)，黏蛋白逐漸增加，而在1～35日齡期間，都未曾達(dá)到峰值（見(jiàn)表1、圖 2）。

3 討論

對(duì)不同日齡小鼠腸絨毛進(jìn)行組織學(xué)比較，發(fā)現(xiàn)日齡較大小鼠的絨毛彎曲現(xiàn)象更加明顯，分叉絨毛較少，證明小鼠主要通過(guò)彎曲腸絨毛來(lái)擴(kuò)大吸收面積[4]。腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度以及二者的比值（V/C值）反映了小腸的功能狀況：比值下降，表示腸黏膜受損，消化吸收功能降低，動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育受阻[5]。本試驗(yàn)觀察到絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度隨著日齡的增加而增長(zhǎng)，絨毛寬度也隨日齡增長(zhǎng)而增加。剛出生小鼠的腸絨毛短小，尚未發(fā)育成熟，此時(shí)十二指腸消化吸收能力較弱，隨著日齡增長(zhǎng)絨毛隨之生長(zhǎng)，消化吸收能力逐步增強(qiáng)，以滿足小鼠生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。

小鼠十二指腸腺分泌的黏液，一方面可以起到中和胃酸的作用，減弱胃酸對(duì)腸壁的腐蝕，另一方面為堿性消化酶類提供適宜的消化環(huán)境。有文獻(xiàn)指出，黏蛋白、腸道黏液及腸絨毛內(nèi)淋巴細(xì)胞分泌的抗體共同組成了一道免疫防御屏障[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠十二指腸黏膜分泌的黏蛋白數(shù)量隨日齡增加而不斷增多，在消化道黏膜表面形成了一層黏液膜，不易被胃酸所破壞，并保護(hù)消化道黏膜上皮，防止蛋白酶對(duì)上皮細(xì)胞侵蝕。另外，酸性黏液物質(zhì)具有調(diào)節(jié)小鼠消化道內(nèi)pH值、促進(jìn)排便的功能。小鼠十二指腸黏膜分泌黏蛋白的這種特異性變化可能與發(fā)育過(guò)程中食性的改變有關(guān)，還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。