砒霜提取物（三氧化二砷）溶液腹腔熱灌注化療毒性實驗研究

耿 巖 封 靜 曾妃發 陸光生 任寶軍 羅振濤

（1南方醫科大學順德醫院＜佛山市順德區第一人民醫院＞胃腸外科 廣東 佛山 528308)

（2徐聞縣第二人民醫院普外科 廣東 湛江 524100）

近年來，腹腔內臟器的惡性腫瘤頻發。手術治療聯合輔助放、化療或內分泌治療是當前主要治療方案。但一些患者治療后不久即出現腹腔內復發轉移。腹腔熱灌注化療(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy，HIPEC)是新興的腹腔惡性腫瘤的輔助治療手段。目前臨床上常用的HIPEC藥物有順鉑、卡鉑、5-Fu等，但存在腎、耳、神經、胃腸道等不良反應顯著及耐藥等問題。近來三氧化二砷（As2O3）在血液疾病及實體瘤治療取得了滿意療效，并用于腹腔灌注化療，但因其為劇毒藥物，安全性有待研究。因此，本實驗旨在探討As2O3在腹腔熱灌注治療中的安全有效性。

1.材料與方法

1.1 實驗動物

選取SPF級健康成年SD大鼠，由南方醫科大學醫學實驗動物中心提供。實驗前均在實驗室內適應性飼養1周。

1.2 實驗動物模型建立

將凍存的Walker-256腫瘤細胞復蘇后加入含10%新生小牛血清的RMPI-1640細胞培養液培養,將處于對數生長期的Walker-256腫瘤細胞用含0.25%tyrosine和0.02%EDTA的磷酸緩沖液收獲,臺盼藍染色進行活細胞計數,活細胞數＞95%,制成細胞濃度為1×105個/ml的細胞懸液。注射器吸取1ml癌細胞懸液穿刺接種于SD大鼠腹腔內，培養1周后，制成荷瘤大鼠。1周后B超檢查腹腔內癌腫情況及是否產生癌性腹水。

1.3 動物分組

將60只荷瘤大鼠隨機分為6組，每組10只：對照組，As2O3濃度為4.0μmol/L、5.6μmol/L、7.8μmol/L、10.9μmol/L、15.4μmol/L五組。

1.4 三氧化二砷溶液配置

As2O3溶液,即亞砷酸注射液(哈爾濱伊達藥業公司產品,批號20001102)。將As2O3加入RPMll640培養液，配制成4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五個濃度備用，-20℃保存。

1.5 腹腔轉移癌術后大鼠模型建立

將喂養1周的荷瘤大鼠統一于全麻下行剖腹探查，檢查腹腔內轉移癌灶的生長及分布情況，再將不同濃度As2O3溶液加溫至43℃后用注射器分別抽取約20ml行單次腹腔熱灌注治療，時間為10min，隨后吸除處理液，沖洗凈腹腔后關腹。對照組熱灌注同溫度同體積的生理鹽水。對術后大鼠進行7天重點監測。觀察術后大鼠生長情況及傷口變化并予以積極對癥處理。

1.6 數據采集

觀察術后反應如：急性胃腸炎癥狀（惡心、嘔吐、腹瀉，糞便呈血性或米湯樣），神經精神癥狀、休克等不良反應情況,記錄死亡情況。

1.7 數據統計

數據采用SPSS22.0統計軟件進行統計分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 不良反應發生情況

術后7天內大鼠不良反應發生情況如下（表1），10.9和15.4μmol/L濃度組與4.0、5.6、7.8μmol/L濃度組相比不良反應發生率顯著增高，差異具有統計學意義 (P＜0.05)。15.4μmol/L濃度組較10.9μmol/L濃度組不良反應發生率亦顯著增高，差異具有統計學意義 (P＜0.05)。

表1 不良反應記錄表[n(%)]

2.2 死亡情況

各組大鼠死亡情況如下（表2），15.4μmol/L濃度組大鼠共死亡9例，死亡率較其它組顯著增高，差異具有統計學意義 (P＜0.05)。

表 2 死亡結果記錄表

3.討論

腹膜存在“血漿—腹膜屏障”，常規靜脈給藥難以達到有效的腹腔治療藥物濃度。大部分藥物進入其他重要器官產生副作用[1]。隨著腹腔腫瘤治療研究的深入，在腹腔化療的基礎上結合溫熱療法提出了HIPEC。保證化療藥物在腹腔內持續高濃度聚集，并直接且高效的作用于腹膜癌結節及腹腔內脫落的癌細胞[2]，效果得到醫學界的廣泛認可。但化療藥物的選擇卻是個難題，有研究顯示As2O3對腫瘤生長的抑制作用強于常用的HIPEC藥物，而不良反應弱[3]。

As2O3是砒霜的主要成份，近年來As2O3在血液系統尤其是急性早幼粒細胞性白血病的治療取得了滿意療效，并且對胃癌、肝癌、結腸癌等亦具有良好的抗癌效果。不少體外研究表明As2O3對治療實體腫瘤效果與劑量正相關。提高藥物治療濃度可以顯著提高對腫瘤的殺傷作用，但同時亦會產生毒副作用。例如心臟毒效應、肝臟毒性、體液潴留、消化道癥狀、皮疹等，雖然停藥可恢復，但仍嚴重影響患者緩解率[4-6]。此外，部分患者會出現高白細胞血癥、彌漫性血管內凝血、室性心動過速、心源性猝死等重度不良反應[7-8]。

目前針對As2O3經HIPEC方式給藥，對全身或局部組織的毒副作用及As2O3熱灌注的最大安全劑量國內外未見明確報道。本研究分別用4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五個濃度As2O3腹腔熱灌注治療，觀察了大鼠的毒副反應及死亡情況，發現As2O3濃度在7.8μmol/L時未有明顯的不良反應，As2O3濃度在10.9μmol/L時不良反應顯著增高，提示最大安全劑量可能在7.8～10.9μmol/L之間，但由于研究樣本量太少，不足以得出確切結論，仍需大樣本進一步佐證，藥物濃度也需進一步細化。