總蛋白測定對鈣測定干擾分析

秦 慶，呂永強

（聯勤保障部隊第967醫院檢驗科，遼寧大連 116021）

0 引言

全自動生化分析儀的普及提高了臨床化學檢查的檢測速度和準確度[1]，但在檢測過程中，前一個檢測項目可能會給后一個項目甚至后幾個項目的檢測結果帶來干擾[2]，而嚴重的干擾會大大影響測定結果的準確性，給臨床診斷帶來困惑[3]。筆者在實際工作中發現，全自動生化分析儀（本院使用的是日立LABOSPECT 008全自動生化分析儀）測定血清中總蛋白（TP）和鈣（Ca2+）時，在測定大量樣品之后，Ca2+測定結果會明顯偏低，這可能是TP測定對Ca2+測定產生了干擾。為此，本研究設計了一系列試驗，對產生干擾的因素進行了分析，并提出了相應的措施。

1 材料與方法

1.1 研究對象

為了避免實驗受到某些疾病人群的干擾，特從日常體檢者中篩選出上百例健康者，再從健康者中隨機抽取40例，抽血離心，將血清充分混勻后備用，作為研究標本。

1.2 儀器與試劑

日立LABOSPECT 008全自動生化分析儀。總蛋白測定試劑盒（雙縮脲法）、鈣測定試劑盒（甲烷基二甲苯酚藍法）與各自的校準品均購自日本和光純藥工業株式會社。

1.3 方法

1.3.1 TP測定對Ca2+測定干擾試驗

1.3.1.1 Ca2+水平參照值的確定試驗

在保證比色杯清洗干凈的前提下，連續測定混合血清標本Ca2+水平8次，測定結果記為R，計算均值、標準差及變異系數，以均值作為Ca2+水平參照值。

1.3.1.2 可能干擾源的確定試驗

觀察日立LABOSPECT 008全自動生化分析儀的分析過程，試劑針和比色杯有可能是對后續分析造成干擾的污染源。鑒于此，設計下述試驗：

（1）測定混合血清標本TP水平一次，使用另外的比色杯測定Ca2+水平一次，測定結果記為T1，按此過程重復測定8次。若T1均值與參照值相差5%及以上，則認為存在試劑針攜帶污染。

（2）測定混合血清標本TP水平一次后不更換比色杯，常規清洗程序后進行Ca2+水平測定一次，結果記為T2，按此過程重復測定8次。若T2均值與參照值相差5%及以上，則認為存在反應杯攜帶污染。

1.3.1.3 多次清洗后可否去除干擾試驗

測定混合血清標本TP水平一次后不更換比色杯，設置清洗程序重復3次，再進行Ca2+水平測定，結果記為T3，按此過程重復測定8次。若T3均值與參照值相差5%及以上，則認為清洗無效。

1.3.2 Ca2+測定對TP測定干擾試驗

1.3.2.1 TP水平參照值的確定試驗

在保證清洗干凈的前提下，連續測定混合血清標本TP水平8次，測定結果記為A，計算均值、標準差及變異系數，以均值作為TP水平參照值。

1.3.2.2 可能干擾源的確定試驗

由于并未發現TP的測定結果出現異常，因此設計如下簡化試驗：測定混合血清標本Ca2+水平一次后不更換試劑針及比色杯，常規清洗程序后進行TP水平測定一次，結果記為B，按此過程重復測定8次。若B均值與參照值相差5%及以上，則認為Ca2+測定對TP測定存在干擾。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0軟件進行數據處理和統計分析。組間比較采用t檢驗，P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

Ca2+水平測定干擾試驗結果見表1，TP水平測定干擾試驗結果見表2。試驗結果中，6組試驗8次測定結果的變異系數都很小，表明儀器的精密度良好、運行穩定，排除了由于儀器運行不穩定帶來的偏差。

表1 Ca2+水平測定干擾試驗結果

表2 TP水平測定干擾試驗結果

2.1 TP測定對Ca2+測定干擾試驗結果

2.1.1 Ca2+水平參照值的確定試驗結果

從表1得到參照值R均值為2.294 mmol/L，標準偏差為0.021 2 mmol/L，變異系數為0.924%。

2.1.2 可能干擾源的確定試驗結果

（1）測定結果T1的均值為2.289 mmol/L，標準偏差為0.018 3 mmol/L，變異系數為0.799%。T1均值與參照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，無明顯偏差。對T1與R進行t檢驗，t值為0.472，P值為 0.644，P＞0.05，差異無統計學意義。此組試驗沒有更換試劑針，僅更換了比色杯，結果說明不存在試劑針攜帶污染。

（2）測定結果T2的均值為1.926 mmol/L，標準偏差為0.031 6 mmol/L，變異系數為1.641%。T2均值與參照值相差16.042%[（2.294-1.926）/2.294×100%]，大于5%，偏差較大。對T2與R進行t檢驗，t值為25.562，P值為 0.000，P＜0.05，差異有統計學意義。此組試驗沒有更換試劑針，也沒有更換比色杯，但對比色杯進行了常規清洗，結果說明存在比色杯攜帶污染。

2.1.3 多次清洗后可否去除干擾試驗結果

測定結果T3的均值為2.289 mmol/L，標準偏差為0.024 7 mmol/L，變異系數為1.079%。T3均值與參照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，無明顯偏差。對T3與R進行t檢驗，t值為0.406，P值為0.691，P＞0.05，差異無統計學意義。試驗結果說明多次清洗后能去除干擾。

2.2 Ca2+測定對TP測定干擾試驗結果

2.2.1 TP水平參照值的確定試驗結果

從表2得到參照值A均值為71.2 g/L，標準偏差為0.627 g/L，變異系數為0.881%。

2.2.2 可能干擾源的確定試驗結果

測定結果B的均值為71.1 g/L，標準偏差為0.634 g/L，變異系數為0.892%。B均值與參照值相差，小于 5%，無明顯偏差。對B與A進行t檢驗，t值為0.278，P值為0.785，P＞0.05，差異無統計學意義。試驗結果說明不存在Ca2+測定對TP測定的干擾。

3 討論

目前，各大醫療機構普遍使用全自動生化分析儀進行生化指標測定，此種方式存在的問題是可能會攜帶污染直接導致檢測結果的重復性和準確性變差。攜帶污染的產生是由于前一測試的試劑、標本或反應產物中的某些成分影響了下一測試項目的反應或相應的反應條件等，從而對后續項目的檢測結果產生正向或負向干擾[4-7]。針對本實驗室出現的TP測定對Ca2+測定的干擾，設計了一系列試驗進行檢測，并分析了產生干擾的原因。目前，該方面的研究鮮見報道[8]。

3.1 干擾來源的確定

在TP測定對Ca2+測定干擾試驗中，幾組試驗結果表明，日常工作程序可忽略試劑針攜帶污染，但存在比色杯攜帶污染。Ca2+測定對TP測定干擾試驗結果表明，不存在Ca2+測定對TP測定的干擾。

3.2 產生干擾的原因分析

在實際工作中，這種干擾往往在樣品量較大的情況下才會發生，根據前述分析，已知是比色杯產生的攜帶污染。進一步分析原因，該儀器比色杯共有406個，其測定過程是取樣針取一次樣到一個比色杯中測定一個項目，之后再取一次樣到下一個比色杯中測定另一個項目。因此，樣品量較少時，比色杯不會重復使用，就不會產生TP測定對Ca2+測定的干擾，而當樣品量較大時，使用的比色杯超過406個，就會重復使用比色杯，而比色杯常規清洗不足以消除TP測定的影響，這時就有可能會發生干擾，使Ca2+測定結果偏低。

本實驗室Ca2+測定使用甲烷基二甲苯酚藍（MXB）作為顯色劑，它和Ca2+在堿性條件下螯合，呈現藍色，反應式為MXB+Ca2+→MXB-Ca2+。TP測定使用的是雙縮脲試劑，即堿性硫酸銅溶液，其中Cu2+與Ca2+同為金屬離子，價態相同，某些性質也相似，因此可以推斷，Cu2+與MXB在堿性條件下也可能發生螯合反應，反應式為MXB+Cu2+→MXB-Cu2+。當做過TP的比色杯沒有徹底清洗時，殘留的Cu2+會螯合部分MXB試劑，導致試劑不足而出現Ca2+測定結果偏低的現象。

既然Cu2+與MXB可能會發生螯合反應，TP測定會影響Ca2+的測定，Ca2+測定為什么卻不會干擾TP測定？進一步分析，發現MXB溶液的濃度為0.29 mmol/L，加入量為 50 μl，而雙縮脲溶液中 Cu2+濃度為8 mmol/L，加入量為180 μl，簡單計算可得Cu2+的加入量約為MXB加入量的100倍。因此，做完TP測定的比色杯經過清洗即使僅殘留1%的Cu2+對于加入的MXB試劑量來說也是很大的，所以TP測定會影響Ca2+的測定，反之則不會。

3.3 干擾的消除

干擾消除試驗在對混合血清標本TP水平測定一次后不更換比色杯，但增加清洗程序至3次后，再進行Ca2+水平測定，結果顯示干擾消除。上述試驗說明多次清洗可有效消除TP測定對Ca2+測定的干擾，但多次清洗必然會降低標本檢測的速度。因此，在實際工作中應根據具體情況，確保TP測定使用的比色杯不再進行Ca2+測定或采取比色杯徹底清洗的辦法，以消除TP測定對Ca2+測定的干擾。

目前，臨床開展的生化項目越來越多，而在開展生化項目之前一定要認真研究測定原理和各試劑組分，先做預試驗，觀察它對其他測定項目的干擾情況[9]。對有干擾的項目可采取調整項目檢測順序或設定有效、適合的特殊清洗程序的方法，以減少測定項目間的相互干擾[10-11]。