烯酰嗎啉和唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的殘留消解動態(tài)研究

劉 磊 ，李 娜 ，李 輝 ，邵 輝 ，李晉津 ，郭永澤 ，陳秋生 ，張玉婷

（1.天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，天津300381；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（天津），天津 300381）

烯酰嗎啉·唑嘧菌胺懸浮劑是一種由烯酰嗎啉和唑嘧菌胺混合配制的殺菌劑。其中，烯酰嗎啉（dimethomorph），又稱霜安、安克、伏霜等，是一種新型內(nèi)吸性殺菌劑，主要用于防治水果和蔬菜疫（霉）病、霜霉病、晚疫病和霜疫霉病等卵菌綱病原菌引起的病害[1]；唑嘧菌胺（ametoctradin），別稱辛唑嘧菌胺，是一種三唑嘧啶/嘧啶胺類殺菌劑，主要用于防治葡萄、蔬菜、馬鈴薯等作物上的晚疫病及霜霉病[2-4]。

烯酰嗎啉在作物上的殘留消解動態(tài)已有較多研究，如黃瓜[5-8]、葡萄[9]、馬鈴薯[10]、花椰菜[11]、辣椒[12-13]、大蔥[14]、三七[15]和人參[16]等，涉及蔬菜水果和中藥材等多種作物。唑嘧菌胺在作物上的殘留消解動態(tài)規(guī)律，國內(nèi)未見相關(guān)報告。本研究建立了同時檢測辣椒中烯酰嗎啉和唑嘧菌胺的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[17]，可以用于辣椒等作物中烯酰嗎啉和唑嘧菌胺混劑的定性、定量分析。在此基礎(chǔ)上，于天津市武清區(qū)、云南省楚雄州和江蘇省南京市進(jìn)行兩年三地田間試驗，研究了47%烯?！み蜞拙鷳腋┰诶苯泛屯寥乐械南鈩討B(tài)，并測定了最終殘留量，為烯酰嗎啉·唑嘧菌胺混劑在相關(guān)作物上的安全使用提供依據(jù)，為相關(guān)研究提供技術(shù)數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗于2013—2014年分別在天津、江蘇和云南進(jìn)行，供試農(nóng)藥為47%烯?！み蜞拙鷳腋?。供試作物為辣椒，天津品種為小米辣，江蘇品種為新蘇椒5號，云南品種為線椒。

1.2 供試藥劑和主要儀器設(shè)備

97.6 %烯酰嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品，99.0%唑嘧菌胺標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇：色譜純；47%烯?！み蜞拙鷳腋灰译?、無水硫酸鈉、氯化鈉等均為市售分析純；2mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液。

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLC/xevo TQ-S，美國waters）；Milli-Q 超純水儀（美國 Millipore公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Laborota 4000 efficient，德國 Heidolph）；高速勻漿機(jī)（德國IKA）；旋渦混合器（QL-901）；空氣浴振蕩器（HZQ-C）等。

1.3 試驗方法

1.3.1 消解動態(tài)試驗 （1）辣椒。于果實生長到成熟個體一半大小時施藥，試驗小區(qū)內(nèi)所有辣椒均勻著藥。施藥劑量為 945 g·hm-2（有效成分），即制劑量 1 800 mL·hm-2，在施藥后 0，1，2，3，7，10，14，21，28 d采樣，每個處理重復(fù) 3次，處理間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)，另設(shè)置清水空白對照小區(qū)。

辣椒樣本的采集：按上述采樣時間要求，在試驗小區(qū)內(nèi)用隨機(jī)的方法選取至少10個采樣點，采集不少于2kg的無病害、生長正常、成熟的辣椒果實，裝入樣品袋中包扎妥當(dāng)，粘好標(biāo)簽，于-20℃冰柜中保存。

（2）土壤。選一塊10m2的地塊，單獨施藥，施藥濃度為 945g·hm-2（有效成分），即 1800mL·hm-2。施藥后0，1，2，3，7，10，14，21，28 d 采樣，另設(shè)清水空白對照。

土壤樣本的采集：隨機(jī)取點5～10個，用土鉆采集0～10 cm的土壤1～2 kg，除去土壤中的碎石、雜草和植物根莖等雜物，混勻后采用四分法留樣500 g，裝入樣本容器中，粘好標(biāo)簽，于-20℃冰柜中保存。

1.3.2 最終殘留試驗 設(shè)2個施藥劑量：低劑量和高劑量。低劑量為 630 g·hm-2（有效成分），即1 200 mL·hm-2，高劑量為 945 g·hm-2（有效成分），即1 800mL·hm-2。每個劑量分別設(shè)置3次施藥和4次施藥兩個處理，每個處理3次重復(fù)，試驗小區(qū)面積30 m2，處理間增加保護(hù)帶區(qū)域，同時以清水代替藥劑設(shè)置1個空白對照區(qū)。相同時間進(jìn)行第一次施藥與消解試驗，控制7 d施藥間隔，在最后一次施藥后7，10 d采樣。

辣椒樣本的采集：用隨機(jī)的方法在試驗小區(qū)內(nèi)10個以上的采樣點采集不少于2 kg生長正常、無病害、成熟的辣椒果實，裝入樣品袋中包扎妥當(dāng)，粘好標(biāo)簽，于-20℃冰柜中保存。

土壤樣本的采集：隨機(jī)取點8個以上，每個點的采集方法同1.3.1中土壤樣本的采集。

1.4 分析方法

1.4.1 樣品提取及凈化 稱取樣品20.0 g置于三角瓶中，分別加入20 mL蒸餾水、30 mL乙腈，混勻后，在空氣浴振蕩器上振蕩提取30 min，漏斗中常壓過濾，20 mL乙腈洗滌濾渣后與濾液合并，轉(zhuǎn)移至500 mL分液漏斗中。加入5 mL 2 mol·L-1的磷酸鹽緩沖液，加入8.0g氯化鈉，振蕩混勻3min后靜置。收集上層有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸餾至干，甲醇定容至2mL，0.22μm有機(jī)濾膜過濾，待測。

1.4.2 儀器條件 液相色譜條件 （WatersUPLC）：色譜柱：AcquityBEH（2.1mm×50mm，1.7μm）；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：1 μL；流動相：乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脫；0～1min，60%乙腈-70%乙腈；1～2min，80%乙腈；2～4 min，90%乙腈；4～5min，60%乙腈；流速：0.3 mL·min-1。

質(zhì)譜條件（WatersxevoTQ-S）：離子源：ESI（+）；毛細(xì)管電壓：1.0kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：450℃；錐孔反吹氣流量：150 L·h-1；脫溶劑氣流量：900L·h-1；檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式（MRM），見表1。

表1 離子選擇參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 分析方法結(jié)果

通過在辣椒和土壤中進(jìn)行添加試驗，經(jīng)過3個水平的添加回收試驗，所建立方法的平均回收率在85.5%～97.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.5%～2.2%，n=5。烯酰嗎啉在辣椒和土壤中的最低檢出濃度分別為 0.04 mg·kg-1和 0.01 mg·kg-1。唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的最低檢出濃度均為0.01 mg·kg-1。

2.2 烯酰嗎啉和唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的消解動態(tài)

烯酰嗎啉和唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的消解過程符合一級動力學(xué)方程，烯酰嗎啉在辣椒和土壤中半衰期分別為 1.8～4.6 d、6.6～12.8 d；唑嘧菌胺在辣椒和土壤中半衰期分別為7.4～23.3 d、3.6～7.0 d（表2～表5）。

2.3 烯酰嗎啉和唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的最終殘留量

辣椒中烯酰嗎啉的最終殘留量＜0.04～0.58mg·kg-1，土壤中的最終殘留量為＜0.01～0.98 mg·kg-1。辣椒中唑嘧菌胺的最終殘留量0.06～0.27 mg·kg-1，土壤中的最終殘留量為 0.01～0.18 mg·kg-1。

表2 烯酰嗎啉在辣椒中的消解參數(shù)

表3 烯酰嗎啉在土壤中的消解參數(shù)

表4 唑嘧菌胺在辣椒中的消解參數(shù)

表5 唑嘧菌胺在土壤中的消解參數(shù)

3 結(jié) 論

對烯酰嗎啉和唑嘧菌胺的消解動態(tài)和最終殘留結(jié)果進(jìn)行分析，對于烯酰嗎啉，其在辣椒和土壤中半衰期分別為1.8～4.6 d和6.6～12.8 d，最終殘留量分別為＜0.04～0.58 mg·kg-1、＜0.01～0.98 mg·kg-1；唑嘧菌胺在辣椒和土壤中半衰期分別為7.4～23.3 d和3.6～7.0 d，最終殘留量分別為 0.06～0.27 mg·kg-1和0.01～0.18 mg·kg-1。國家強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn) GB 2763-2016中規(guī)定烯酰嗎啉在辣椒中的最高殘留限量（maximum residue limit，MRL） 為 3 mg·kg-1。國際食品法典委員會（Codex Alimentarius Commission，CAC）規(guī)定唑嘧菌胺在果菜類蔬菜中的MRL值為3 mg·kg-1。參考中國和CAC的MRL值，烯酰嗎啉和唑嘧菌胺在辣椒中的最終殘留量結(jié)果均符合上述規(guī)定。