肝細胞移植的臨床應用前景

金銀鵬 傅青春

肝細胞移植經過50多年的基礎與動物實驗研究，被證明可有效解決肝移植相關問題，包括器官短缺和術后肝功能異常等?，F階段，臨床上一般采用同種異體肝細胞移植治療遺傳代謝性肝病，但成功率仍較低。該方法受制于細胞移植的局限性以及移植細胞的選擇性增殖，因此難以進行臨床推廣。肝部分切除術、放射治療、增強細胞移植活性并減輕細胞消亡的給藥治療等方法可產生不同的移植效果，進而造成患者預后存在較大差異。動物實驗表明，自體肝細胞選擇性生長可獲得最佳的移植效果，但這還受同種異體肝細胞的影響；由于這些細胞通常從邊際供體的肝臟器官中分離，因此重復細胞移植(偶爾結合部分肝切除術或肝臟放射治療)和免疫抑制的缺陷會造成實際治療效果與實驗結果之間存在較大差異。目前，多能干細胞來源的肝細胞仍無法替代原代肝細胞，且肝細胞移植的臨床適用性仍需進一步研究。

Barahman等[1]研究了局灶性放射結合肝細胞生長刺激療法的治療效果，他們認為該療法可以有效改善肝細胞的移植和再生。 研究采用了載脂蛋白E基因敲除小鼠模型，該模型在早期研究中很少使用，因為其并不能為移植細胞提供選擇優勢。他們還基于治療效果進行了一項組織化學分析，并計算了成功移植細胞的數量比例。結果發現載脂蛋白E水平呈上升趨勢，而血清中膽固醇、低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白水平呈降低趨勢。

在小鼠模型中，通過門靜脈將肝細胞輸注到肝內或脾臟，結果發現移植成功率一般低于2%，且不會顯著改變脂質血清水平。Barahman等還對小鼠肝臟局部高劑量放射治療結合肝細胞生長刺激進行了研究，并分析了該策略對肝細胞移植和移植后肝功能的影響。既往研究表明，放療會抑制肝細胞的增殖，同時受放療影響的細胞會被緩慢清除，因此肝細胞移植能夠維持肝功能。該研究僅以50 Gy劑量對小鼠肝臟中葉和右葉進行放射治療。盡管局灶性放射可能會降低移植細胞的活性和治療效果，但卻能夠降低細胞移植失敗后患者(尤其是兒童)出現肝功能衰竭的風險。

與未事先接受放療的對照組小鼠相比，該方法可顯著增加移植細胞的數量。接受高劑量放療后，宿主肝細胞會緩慢死亡，因此移植肝細胞的數量在很長一段時間內會持續增加。為加速肝臟再生過程，Barahman等采用了生長刺激物，如腺病毒編碼肝細胞生長因子(HGF)或GC1，后者是一種T3甲狀腺激素b受體的選擇性激動劑，可以形成較強的肝有絲分裂原刺激，但不會象甲狀腺激素那樣對心臟功能產生不利影響。植入肝細胞的數量會在移植后4個月急劇增加，且血清膽固醇、低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白水平會降至正常水平。因此作者認為，局灶性放射與肝細胞生長刺激的結合療法可有效改善肝細胞移植效果，并能夠在缺少移植細胞選擇優勢的前提下成功治療遺傳性肝病。該方法并不會導致任何長期安全風險，因此有臨床推廣價值，但該研究并未重點討論該療法的不良反應。

Soltys等[2]針對非人靈長類進行了一項開創性研究，他們在研究中探討了預先進行放射治療對肝細胞移植的影響。他們的研究結果為首次人體試驗提供了基礎。本研究共對3例遺傳性肝病患者在肝細胞移植前進行了局灶性放射治療，結果表明這樣可有效改善肝細胞移植效果，但未報告長期效果以及安全數據。Barahman等研究表明，即使放射治療結合肝細胞生長刺激不存在選擇性優勢，仍可以有效改善肝細胞移植效果，并解決肝臟的先天性缺陷。他們進行的細胞和分子水平分析可進一步支持臨床發展。目前，我們仍無法確定HGF或激動劑GC1對人類來說是否安全有效。現有臨床數據表明，攜帶HGF的腺病毒可能會造成一定的臨床問題，因此建議采用GC1等策略。此外，目前尚沒有數據表明在肝細胞移植前對患者(尤其是兒童)進行放射治療會導致長期安全問題。雖然回顧性研究中并未涉及任何長期后果，但仍需對接受放射治療和肝細胞移植的患者進行強制監測。

有研究證實肝部分切除術可以增加成功移植的肝細胞數量，但2例Crigler-Najjar綜合征患者的治療結果表明，肝部分切除術并未完全治愈該疾病[3]。目前，研究人員正在研究遺傳代謝性肝病的替代治療方法。將腺相關病毒載體(即B型血友病)納入臨床基因治療方案，可以帶來良好的治療效果；同時肝病治療領域也進行了相應的探討。隨著肝臟不斷生長，附加型腺相關病毒載體可能會消失，因此需進一步驗證該基因療法是否能夠成功應用于新生兒和幼兒。近期研究重點探討了基于CRISPR/Cas9的同源性定向修復和堿基編輯方法在治療遺傳性肝臟疾病方面的效果，例如患者誘導多能干細胞相關的高膽固醇血癥,以及小鼠的苯丙酮尿癥[4]。目前，我們仍無法確定哪種療法會成為遺傳代謝性肝病的首選治療方法，但Barahman等[1]已明確表示，肝細胞移植結合局灶性放射和生長刺激將最有可能成為首選療法。