油茶根腐病致病菌分離·檢測與防治藥劑的篩選

馬英玲，羅麗蟬

(1.廣西生態工程職業技術學院，廣西柳州 545004；2.廣西高峰林場，廣西南寧 545004)

油茶(Camelliaoleifer)是世界四大木本油料之一，其所產的茶籽油不飽和脂肪酸含量達90%以上，不含對人體有害的芥酸，能降低血清膽固醇含量，可預防高血壓和常見的心血管疾病，具有很好的保健作用，被人們稱為長壽油。2009年10月，廣西區政府出臺了《廣西壯族自治區人民政府辦公廳關于加快油茶產業發展的意見》，提出了廣西油茶產業發展的目標[1]。隨著油茶種植面積的不斷增加，油茶病蟲害發生越來越多[2]。油茶根腐病是近年來危害油茶的一種毀滅性病害。為了有效抑制該病害的發生和蔓延，筆者對油茶根腐病致病菌的分離、檢測與防治藥劑的篩選進行了研究。

1 材料與方法

1.1油茶根腐病病原菌分離

1.1.1試驗材料。油茶根腐病病株采自廣西柳州、南寧的油茶林地。

1.1.2試驗方法。洗凈供試油茶病根，以75%乙醇擦涂表面，并用滅菌解剖刀將油茶組織切成約4 mm2的小方塊(取病健組織)；將小方塊依次放入75%乙醇約50 s、0.1%升汞1 min，無菌水沖洗3次，每次浸泡時間2 min，然后移置于PDA培養基(馬鈴薯)上。將其放置25 ℃恒溫箱中培養5 d，長出菌絲后，挑取尖端菌絲進行純化培養[3]。

1.2油茶根腐病病原菌致病性檢測[4](人工誘發試驗)

1.2.1試驗材料。人工誘發試驗接種用的菌株，均分離自自然感病的病變組織獲得的純菌株，供試寄主為當年油茶嫁接苗。

1.2.2試驗方法。以有傷和無傷2種方法進行人工接種，用菌絲體和病原菌的孢子懸浮液分別對健康供試油茶植株進行刺傷接種和非刺傷接種2種方法[5]。有傷接種是用滅菌的大頭針，在健康油茶植株根莖消過毒的接種處扎幾個小孔，然后取直徑5 mm的菌種反貼于植株表面；或用滅菌的蒸餾水將菌種制成孢子懸浮液，將分生孢子懸浮液接種于植株接種處。無傷接種是在健康油茶植株根莖消過毒的接種處，將直徑5 mm的菌絲塊反貼于表面；或將分生孢子懸浮液接種于植株接種處，接種處表面未被刺傷。2組試驗均分別以不帶菌的培養基和無菌水做對照試驗。定期觀察發病情況，并記錄。

1.3油茶根腐病田間防治試驗

1.3.1試驗材料。供試藥劑：50%完美WP，石家莊市綠豐化工有限公司生產；50%退菌特，天津市興果農藥廠生產；70%白色甲托(甲硫福美雙)WP，陜西湯普森生物科技有限公司生產。

1.3.2試驗方法。試驗地點設在油茶根腐病發生的廣西柳州油茶育苗場。試驗在病害發生初期的5月進行。每種藥劑設3個重復，每個重復處理250株苗木，設12個試驗小區，小區面積約1 m2。在每個小區內，隨機選擇供試藥劑，對油茶嫁接苗淋藥處理，7 d后再淋1次藥，對照用清水處理，重復3次，藥效檢查時間在最后一次噴藥后10 d進行。并根據病級統計病情指數[6]和防治效果。發病分級標準[5]見表1。

表1 油茶根腐病發病分級標準

2 結果與分析

2.1油茶根腐病致病菌分離結果共分離15個樣本，分離到鐮孢屬(Fusarium)真菌純菌株15株，在PDA培養基上培養6 d的菌落見圖1。PDA培養基上長滿氣生菌絲，白色棉絮狀，菌落圓形，菌落底部培養基初期不變色，后期變色。挑取適量菌絲在顯微鏡下鏡檢，其病原菌特征見圖2。菌絲體有格分枝，病原菌產生大小2種孢子，大型孢子長橢圓形或橢圓形，有3～5個隔膜，稍彎曲，向兩端漸細；小型分生孢子橢圓形或臘腸型，少數稍彎曲，1～2個隔膜或無隔膜。

圖1 病原菌在PDA上的菌落形態Fig.1 Colony morphology of pathogens on PDA

圖2 顯微鏡下的病原菌特征Fig.2 Microscopic characteristics of pathogens under microscope

2.2油茶根腐病原菌致病性檢測結果以有傷和無傷2種方法進行人工接種，第3、6、9、12天分別記錄發病情況，結果見表2、圖3～6。

從接種誘發的病苗中，取離接種點有一定距離的病組織分離培養[7]，獲得鐮孢屬(Fusarium)真菌純菌株，在顯微鏡下觀察大小2種孢子，大型孢子長橢圓形或橢圓形，有3～5個隔膜，稍彎曲，向兩端漸細；小型分生孢子橢圓形或臘腸型，少數稍彎曲，1～2個隔膜或無隔膜。鐮孢屬(Fusarium)真菌是油茶根腐病的主要致病菌(圖7)。

表2 油茶根腐病誘發試驗

圖3 接種第3天部分油茶幼苗 Fig.3 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 3 days

圖4 接種第6天部分油茶幼苗Fig.4 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 6 days

圖5 接種第9天部分油茶幼苗Fig.5 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 9 days

圖6 接種第12天部分油茶幼苗Fig.6 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 12 days

圖7 油茶根腐病誘發試驗再分離培養的病原菌Fig.7 Isolation and cultivation of pathogenic bacteria from root rot of Camellia oleifera

2.3油茶根腐病田間防治結果在室內藥劑抑菌試驗[8]中，選取3種對油茶根腐病菌抑菌效果較好的藥劑，進行田間防治試驗，結果表明，70%白色甲托WP防治效果可達79.3%，其次是50%完美WP，防治效果為68.8%，防治效果較差的是50%退菌特WP，其防治效果為56.7%(表3)。

為檢驗不同藥劑田間對油茶根腐病的防治效果差異性，將試驗數據錄入SPSS軟件進行藥劑與防治效果的Spearman相關分析和藥劑對防治效果的單因素方差分析，結果表明，F=55.158，Sig.=0.000<0.01，表明這3種藥劑在田間的防治效果差異極顯著。

表3油茶根腐病田間防治試驗病情指數

Table3DiseaseindexofrootrotofCamelliaoleiferainfieldcontrolexperiment

藥劑Drug施藥前病情指數Disease indexbefore application第3次淋藥10 d后10 days after the third drenching病情指數Disease index平均防治效果Average control effect∥%50%完美800倍液50% Wanmei 800 times liquid25.817.868.870%白色甲托800倍液70% white methyl tobuzin 800 times liquid26.211.979.350%退菌特 800倍液50% bacteri-ostatic 800 times liquid24.724.8 56.7清水對照Water control25.457.3—

3 結論與討論

油茶根腐病在廣西從4月開始發病，7、8月為病發高峰期。感病油茶當年抽出的春梢和秋梢減少，葉片慢慢褪綠、無光澤，后期葉片枯黃并大量脫落，樹冠稀疏，花蕾量減少，7—8 月是重病樹的死亡期。通過病原菌的組織分離和人工誘發試驗，結果表明，油茶根腐病的致病菌為鐮孢屬(Fusarium)真菌，該病菌是土壤習居菌，腐生為主，致病力強[9]。侵入寄主后，潛育期短，短期內病害發生嚴重且傳染速度快。通過用多種殺菌劑對致病菌進行室內毒力抑菌試驗，選擇抑菌效果較好的3種藥劑進行田間防治試驗，結果表明，75%白色甲托的田間防治效果最好，防治效果達79.3%；其次為50%完美WP，防治效果為68.8%；最后是50%退菌特WP，防治效果為56.7%。這些藥劑在市場上易買到，可在生產上推廣應用。