血液感染非O1群和非O139群霍亂弧菌1例的報告

單勁紅 張雨超 高 艷 尹美玲 黃 穎

2018年6月27日我院感染科收入1例上消化道出血且有2年肝硬化病史，并發敗血癥患者，從患者血液中分離出1株霍亂弧菌疑似菌株，通過細菌鑒定，質譜分析及血清學鑒定，最后被確定為非O1群和非O139群霍亂弧菌（NOVC)。這在目前國內肝硬化患者中較少報道，國外有文獻是從血液中分離出非O1群和非O139群霍亂弧菌[1]?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 患者，男，55歲，有肝硬化病史2年，長期口服中藥。黑便5天，每日1～2次，無特殊處理，因入院前5 h無明顯誘因發熱體溫達40℃，伴惡心嘔吐嘔血，門診擬診：上消化道出血肝硬化失代償，收住感染科。①體征：慢肝面容，肝區壓痛（+），中度黃染，無蜘蛛痣無肝掌無包塊無反跳痛。腹部平軟，肝肋下未及，脾肋下約2 cm，雙肺呼吸清晰無干濕性啰音，無水腫。②入院后實驗室檢查：血常規：白細胞3.95×109/L，血小板10×109/L，谷丙轉氨酶:100 U/L，谷草轉氨酶:196 U/L，γ-谷氨酰轉肽酶:90 U/L，白球比0.74.總膽紅素108.44 μmol/L，直接膽紅素63.90 μmol/L，二氧化碳17 mmol/L，總鈣1.76 mmol/L，乙肝表面抗原定量38.73 IU/mL，乙肝e抗原定量9.84 PEIU/mL，乙肝核心抗體定量112.16 PEIU/mL，凝血項目PT：25.90 S；APTT：72S；FIB:0.97 g/L；D-二聚體：＞4 μg/mL。

1.2 儀器及試劑 O1群和O139群霍亂弧菌診斷血清由鄭州萬泰生物科技有限公司提供，細菌鑒定由法國生物梅里埃ATB-NEW細菌鑒定儀及梅里埃生產的生化反應板條，質譜儀由梅里埃VITEK?MS提供，質控菌株大腸埃希菌（ATCC25922);銅綠假單胞菌（ATCC27853）購自杭州天和微生物試劑公司，K-B法藥敏實驗紙片由英國OXID提供。

1.3 方法 ①細菌分離:患者入院時體溫為40℃，取成人血培養瓶靜脈單瓶雙側各取血5 mL，在患者使用抗生素前，抽取患者雙側單瓶靜脈血注入血培養瓶內將血培養瓶置于梅里埃BacT/ALert120中培養，3 h后雙瓶報陽，取出培養瓶涂片鏡檢，鏡下見G-桿菌并給臨床醫生發布血培養一級報告，并轉種血平板，巧克力平板及麥康凱平板，各放入35℃需氧溫箱和CO2培養箱中，16 h后取單個菌落做鑒定試驗。②質譜分析：用梅里埃VITEK-MS質譜儀檢測該菌株，取單個菌落，用1 μL校準接種環涂靶板，加基質液CHCA1μL干燥形成結晶體，自動獲取質譜。③藥物敏感試驗：根據《臨床微生物實驗室操作規程》所示K-B紙片法進行藥敏試驗，結果判斷依據2015年美國臨床實驗室標準化委員會藥敏試驗標準執行。

2 結 果

2.1 細菌菌落形態及不染色標本檢查 血平板菌落較大濕潤，有β溶血環，且有綠色光澤。轉種4號瓊脂平板長出黑色光滑整齊的菌落，染色鏡下見革蘭陰性細小，微彎，直的桿菌，取單個菌落制成懸滴液鏡下見細菌呈穿梭樣運動，符合霍亂弧菌鏡下形態特點。

2.2 細菌生化和鑒定 取單個菌落配置0.5麥氏濁度的混懸液，使用梅里埃ATB-NEW半自動細菌鑒定分析儀，GN卡鑒定為霍亂弧菌，鑒定編碼為016052鑒定率為97.9% ID值1.0，手工生化實驗該菌株靛基質陰性，氧化酶試驗陽性，該菌株不分解乳糖，發酵葡萄糖蔗糖麥芽糖，動力陽性，在堿性蛋白胨水中生長。符合霍亂弧菌生化特征。梅里埃VITEK-MS質譜儀檢測完整蛋白電離并用TOF檢測，與數據庫比較計算結果并獲得鑒定結果在Myla顯示鑒定結果：Vibrio cholerae 置信度99.9，該菌株質譜峰結果見圖1。

圖1 該菌株的質譜峰

2.3 血清凝集試驗 取該菌株單個菌落，與O1群及O139群霍亂弧菌標準血清做玻片凝集試驗，用生理鹽水做陰性對照，結果均不凝集，確證為非O1群和非O139群霍亂弧菌。

2.4 藥敏結果分析 該菌株對臨床常用抗生素均敏感，見表1。

表1 菌株對臨床常用抗生素的藥敏結果

2.5 治療 根據該患者血培養的藥敏報告，臨床醫生及時調整抗菌藥物，使用頭孢他啶和左氧氟沙星抗感染治療，患者退熱2 d后再做血培養，7 d血培養陰性并報告臨床醫生。該患者是以高熱及上消化道出血和肝硬化失代償入院，沒有取糞便培養，血培養檢出非O1群和非O139群霍亂弧菌后，因臨床醫生用藥及時，后來的糞便培養一直陰性，應是抗感染治療有效的原因。

3 討 論

霍亂弧菌是人類在自然情況下唯一易感者，主要通過污染的水源或食物經口感染，也可以通過腸道外感染如傷口和血流感染，霍亂弧菌包括O1群霍亂弧菌和O139群霍亂弧菌，引起強烈腸道傳染病霍亂，為我國的甲類法定傳染病，不與O1群和O139群霍亂弧菌診斷學清凝集的但生化反應符合霍亂弧菌特性的稱為非O1群和非O139群霍亂弧菌（NOVC），據國內外有關文獻顯示NOVC多引起的敗血癥而非腸道感染，病死率為20%～62%，多見于肝癌,肝硬化患者及其他多種疾病引起的機體免疫力低下者[2～5]，易伴發各種機會性感染。非O1群和非O139群霍亂弧菌多存在于海鮮及海水中，接觸或未經煮熟的海產品容易導致感染，但多數感染者輕度癥狀也有部分患者引起敗血癥,膽囊炎等，這與宿主抵抗力有密切關系。

本次我院檢出的非O1群和非O139群霍亂弧菌菌株引起的菌血癥也應與此有關。該患者患有肝硬化病史2年，且上消化道出血。肝硬化患者肝臟的過濾功能減退腸道菌群失調導致細菌容易進入血流引起感染。非O1群和非O139群霍亂弧菌引起的敗血癥多發生于免疫力低下的患者中（尤其是肝病患者），病死率較高。因此病原菌的及時檢出和給予患者精準的治療顯得極為重要，我們在此將本案做詳細報道，希望引起同道們的關注。