DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液鑒別診斷中的應用價值

吳紅梅，李飛，張洪福

（廣東省高州市人民醫院 檢驗科，廣東 高州 525200）

正常情況下，人體胸膜腔內有5～15 ml的液體，在呼吸運動時起到潤滑作用，人體腹腔內亦存在200 ml以下的液體以潤滑腸道，而當胸腔或腹腔內的液體超過該限度時，則稱為胸腔積液或腹腔積液，此時說明機體可能處于病理狀態。胸腹腔積液可由心血管疾病、惡性腫瘤、肝硬化及腎臟疾病等多種病因引起，及時診斷并采取正確的治療方法至關重要。以往多采取脫落細胞形態學檢查來確定其良惡性，通常需要多次抽取積液來進行確診，還有少部分患者即使經過反復檢查仍未能獲得確診，可能導致病情貽誤，因此，探索更為簡便而準確的診斷方法是目前國內外學者研究的熱點問題。流式細胞儀脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid, DNA）倍體分析是近十年來應用于診斷早期惡性腫瘤的重要方法之一[1-2]，但是目前國內對于該技術的應用尚未十分成熟。本研究將其與以往常用的脫落細胞學檢查進行對比，以探討DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液鑒別診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月-2018年1月本院臨床科室送檢的胸腹腔積液標本150例，其中男82例，女68例；年齡20～88歲，平均（67.98±10.42） 歲。所有患者均經影像學、實驗室、病理組織學檢查以及臨床表現明確診斷，將惡性胸腹腔積液70例納入惡性組，其中肺癌33例，乳腺癌12例，惡性胸膜間皮瘤1例，肝癌14例，卵巢癌10例，將良性腹腔積液80例納入良性組，其中結核性胸膜炎49例，肺炎5例，心力衰竭4例，肝硬化22例。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準，所有患者均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

每例標本均同時進行脫落細胞學檢查和DNA倍體分析。脫落細胞學檢查方法：行巴氏染色后制片，由病理科醫生進行讀片，診斷結果包括：① 未見到癌細胞；②見到少許異型細胞；③見到重度不典型異型細胞；④可疑癌細胞；⑤見到癌細胞。DNA倍體分析方法：將標本制備成單細胞懸液，碘化吡啶染色，采用流式細胞儀進行DNA定量分析，將不易區分的群體細胞分為G1期、S期和G2期3個亞群，再使用CellQuest軟件獲取DNA數據，ModFit軟件分析DNA倍體和細胞周期，采用DNA指數（DNA index, DI）表示細胞的倍體，二倍體DI=1.0±0.1，異倍體DI＜0.9或＞1.1。計算兩種方法的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和準確度。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%；陽性預測值=真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數）×100%；陰性預測值=真陰性例數/（假陰性例數+真陰性例數） ×100%；準確度=（真陽性例數+真陰性例數）/總例數×100%。靈敏度可反映正確識別患者的能力，特異度可反映正確鑒別實際非患者的能力，陽性預測值反映篩檢陽性者患目標疾病的可能性，陰性預測值可反映篩檢陰性者中真正未患病的可能性，準確度可反映正確診斷患者與非患者的能力。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析。各診斷效能為計數資料，以百分比（%）表示，兩種方法的診斷效能比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者兩種檢測方法分析結果比較

DNA倍體分析結果和脫落細胞學檢查結果如表1所示。

表1 兩組兩種檢測方法分析結果比較 例

2.2 兩種檢測方法診斷效能評價比較

DNA倍體分析的靈敏度顯著高于脫落細胞學檢查，差異有統計學意義（P＜0.05），陰性預測值和準確度高于脫落細胞學檢查，特異度和陽性預測值低于脫落細胞學檢查，但差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 兩種檢測方法的診斷效能評價比較 %

3 討論

一直以來，脫落細胞學檢查在良惡性胸腹腔積液的鑒別診斷中占據著重要地位[3-5]，但該方法既需要良好的臨床檢驗技能，也需要完善的病理學基礎知識和診斷經驗，其結果容易受細胞數量、細胞形態變化是否典型以及病理醫師對讀片結果的主觀偏差等各種因素的影響[6]，因此診斷的靈敏度受到限制，需要探尋一種操作更為簡便，診斷結果更為準確的方法來提高惡性胸腹腔積液的陽性檢出率。

通常情況下，正常組織細胞中染色體數目和DNA含量是固定的，細胞分裂周期中，DI的值是波動的，二倍體DI為0.9～1.0，四倍體DI為1.90～2.10，正常人體內大多數細胞為二倍體，僅有少數為異倍體，但是腫瘤細胞尤其是惡性腫瘤細胞大多會發生染色體數目和結構異常的情況，其DNA含量也會隨之改變[7-8]。DNA倍體分析屬于DNA定量分析技術，可通過檢測組織細胞核內DNA的數量得出相對客觀的結果，能準確識別出所測標本中出現異倍體改變的細胞，從而有助于早期判斷細胞是否發生惡變[9]。有研究證實[10-12]，DNA倍體分析結果中的細胞DI值與異倍體細胞的數量、細胞增殖以及惡變程度均有密切相關性，且在呼吸系統腫瘤、消化系統腫瘤及婦科腫瘤等的早期診斷和預后判斷中發揮重要作用。

本研究將DNA倍體分析與脫落細胞學檢查進行比較，結果顯示，DNA倍體分析的靈敏度為78.57%，顯著高于脫落細胞學檢查的61.43%，說明相對于傳統的脫落細胞學檢查，該方法篩查出真正為惡心胸腹水患者的能力更好，導致惡性胸腹水患者DNA異倍體為陰性的原因可能為腫瘤細胞尚未脫落至漿膜腔、所測標本中腫瘤細胞聚集成團或者二倍體腫瘤高分化等影響讀片結果所致。本研究還顯示，DNA倍體分析的陰性預測值和準確度高于脫落細胞學檢查，特異度和陽性預測值低于脫落細胞學檢查，但差異均無統計學意義，說明該方法在顯著提高診斷靈敏度的同時，并未明顯降低其他診斷效能，而且在準確度方面具有一定優勢。

綜上所述，與脫落細胞學檢查相比，DNA倍體分析在良惡性胸腹腔積液的臨床鑒別診斷中具有更高的靈敏度，且保證了較高的特異度和準確度，其操作簡單、重復性好、人為因素影響小，臨床應用價值更高。在今后的研究中，筆者將進一步擴大樣本量，并采取多中心協作的方法，對DNA異倍體的數量和程度與腫瘤轉移部位、病情程度和預后等的相關性進行深入分析，為惡性腫瘤的早期診斷、治療和預后判斷提供更為科學的依據。