家蠶5齡幼蟲體腔注射維生素C對相關代謝的影響

徐 欣 劉中文 卜黎明 宋 松 張英華 王嘉禎 朱緒偉

(河南省蠶業科學研究院，河南鄭州 450008)

維生素C(vitamin C，VC)，又稱為抗壞血酸(ascorbic acid，AsA)，其與脫氫抗壞血酸(dehydroascorbate，DHA)在酶的作用下形成一個氧化還原系統[1]，具有抗氧化作用，并參與許多生物代謝[2]。在家蠶體內，VC是重要的必需營養物質[3-5]，能夠刺激家蠶攝食[6]，因此在生產上是一些桑葉添加營養劑的重要組成部分，也是家蠶人工飼料中的重要添加物[7]。為進一步了解外界添加VC對家蠶幼蟲生長發育的影響，我們通過體腔注射不同劑量的VC溶液，觀察家蠶生長、化蛹、結繭等生理變化，并結合注射后家蠶體內VC含量的變化，確定家蠶可承受的添加劑量；同時，根據楊洋等[8]研究中的家蠶VC合成代謝關鍵酶——L-古洛糖酸-γ-內酯氧化酶(L-gulono-γ-lactoneoxidase，GULO)的基因序列(BmGULO-like1和BmGULO-like2)進行表達量的半定量RT-PCR分析，以了解注射VC后家蠶體內VC含量和生長發育變化的分子機理，闡述相關代謝變化的原因，為研究家蠶添食VC提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 家蠶品種 菁松×皓月，由河南省蠶業科學研究院繁育提供。

1.1.2 飼養桑葉 采自河南省蠶業科學研究院桑園，5年生湖桑32號夏伐前的桑葉，桑園土質為黃棕壤，桑樹種植行距為1.2 m，株距為0.8 m。

1.1.3 主要試劑 VC，粉劑，純度99%，Sigma公司產品；苯基硫脲，粉劑，純度97%，上海源葉生物科技有限公司產品；抗壞血酸測定試劑盒，總蛋白定量測定試劑盒，均為南京建成生物工程研究所產品；動物組織總RNA提取試劑盒(離心柱型)、FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒(去基因組)、2×Taq PCR MasterMix、瓊脂糖、GeneGreen核酸染料，均為天根生化科技(北京)有限公司產品。……