黑秋耳和玉木耳活性成分及多酚抗氧化活性比較分析

張蕾 宛春雷 郝婧瑋 柴軍紅 孫曉薇 趙楠 劉佳慧

摘要：通過提取2種木耳中的成分，對比分析了2種木耳的外觀、質量、微量元素含量、多酚含量、多糖含量、皂苷含量及黃酮含量的差異以及2種木耳中多酚化合物的抗氧化效果。黑秋耳的質量及Zn、Ca、Mg、Mn、Fe含量高于玉木耳;玉木耳中提取的多酚、多糖、皂苷化合物含量較黑秋耳多，黃酮化合物的提取率較黑秋耳小，紅外多糖表征結果顯示2種木耳中的多糖為β吡喃糖;玉木耳的多酚提取物清除超氧自由基的能力比黑秋耳強，69.07 μg/mL黑秋耳多酚提取物的清除能力達到了52.56%，71.67 μg/mL玉木耳多酚提取液的清除能力達到了 70.43%，并隨著濃度的升高清除能力逐漸提高。

關鍵詞：黑秋耳;玉木耳;微量元素;多糖;黃酮;皂苷;多酚;抗氧化

中圖分類號： S646.601 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2019）23-0243-03

木耳屬（Auricularia Bull.）真菌是我國一種十分重要的食用菌資源。黑秋耳（Auricularia auricula）別稱黑菜，該耳含有人體必需的8種氨基酸和維生素，黑龍江省東寧市是全國重要的黑木耳生產基地，該地區生產的木耳朵大、肉厚細膩、口感滑潤、無污染，味道鮮美，早已是人們餐桌上的佳肴。玉木耳，別稱白玉木耳[Auricularia nigricans （Sw.）][1]，是經吉林農業大學李玉院士團隊雜交改良后選育出的穩定遺傳、優質高產新品種，是毛木耳白色變異的菌種，新鮮的玉木耳外觀呈膠質片狀，晶瑩剔透，表面呈現米黃色，腹面光滑，顏色喜人，手感干燥，無顆粒感，復水后顏色雪白，嘴嘗無異味，營養豐富多樣，且其產量是黑木耳的2倍，被譽為木耳界的“白富美”。黑木耳在提高機體免疫力、降血糖、降血脂、抗腫瘤等方面均有較好的作用，長期食用能夠抗血栓、抗氧化和抗衰老，是世界公認的保健食品[2-7]。玉木耳具有抗疲勞和抗腫瘤的功效[8]。隨著現代人們生活中飲食結構的調整，木耳產品的營養價值越來越受到社會的推崇，因此，深入分析2種木耳成分并研究其作用價值，不僅能夠指導不同人群調整飲食結構，而且能夠為木耳加工產業提供科學依據，有利于促進木耳深加工，同時也為相似食品的開發與研究提供了理論借鑒。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

黑秋耳、玉木耳購自黑龍江省東寧市農貿市場;鋅、鐵、鎂、鈣、錳對照品由綏芬河出入境檢疫檢驗局提供并檢測，苯酚、葡萄糖購于上海國藥集團，沒食子酸購于上海德榜化工有限公司，蕓香苷，購于阿拉丁生物公司等;原子吸收光譜儀（AAS-600）購于美國PE公司，紅外光譜儀（WQF-510）購于德國布魯克公司。

1.2.1 金屬離子檢測方法 依據GB 5009.90—2016《食品安全國家標準 食品中鐵的測定》、GB 5009.241—2017《食品安全國家標準 食品中鎂的測定》、GB 5009.242—2017《食品安全國家標準 食品中錳的測定》、GB 5009.92—2016《食品安全國家標準 食品中鈣的測定》對相關元素進行檢測[9]。

1.2.2 多糖含量測定 多糖含量測定采用硫酸-苯酚法，依據參考文獻方法略有改動，制作標準曲線[10]。將2種干木耳粉碎后首先過篩，準確稱取5 g溶于醇濃度為30%的乙醇中，參考吳小燕等對黑木耳多糖的最佳提取條件[11]，在提取條件60 ℃、料液比1 g ∶ 40 mL、功率80 W振蕩超聲處理 20 min，用80%乙醇沉淀多糖后，4 000 r/min離心7 min后取多糖沉淀，減壓濃縮至浸膏后水浴至干，得粗制多糖。通過標準曲線的方法測定含量

1.2.3 黃酮類化合物含量測定 采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法，將2種干木耳粉碎后首先過篩，分別稱取5 g木耳干粉，加入一定量的乙醇溶液，參考韓秋菊等對黑木耳黃酮類化合物提取工藝研究的最佳提取條件（料液比1 g ∶ 7 mL，乙醇濃度80%，50 ℃水浴加熱浸提6 h），檢測提取液中黃酮類化合物的含量[12]。

1.2.4 多酚化合物含量測定 依據文獻方法建立多酚相關標準曲線[13]，將2種木耳粉碎后首先過篩，分別稱取5 g木耳干粉，加入80%乙醇溶液，提取條件為55 ℃、料液比 1 g ∶ 20 mL、超聲時間26 min、功率180 W，浸提后過濾，經旋轉蒸發濃縮后3 000 r/min離心5 min，取上清液，測定提取液中多酚含量，將上清液進一步經乙酸乙酯萃取后濃縮干燥得粗多酚。

1.2.5 皂苷含量檢測 依據參考文獻方法，制作標準曲線[14]。將2種干木耳粉碎后首先過篩，準確稱取5 g溶于醇濃度為30%的乙醇中，在一定時間、溫度、料液比和超聲波功率下振蕩處理一定時間，用80%乙醇沉淀多糖后，4 000 r/min離心7 min后取上清液，減壓濃縮至浸膏后水浴蒸干，依次用等體積的正丁醇溶液萃取3～5次，減壓濃縮并蒸干處理后得粗品木耳總皂苷。

1.3 抗氧化能力的測定

采用鄰苯三酚自氧化法測定不同濃度的2種木耳多酚提取物的超氧陰離子自由基（ O-2 · ?）清除能力[15]：在室溫下，以pH值為8.2的 Tris-HCl緩沖體系進行自氧化研究，以 10 mmol/L HCl溶液配制空白管為參比，在325 nm下每隔05 min測1次吸光度，自氧化速率（D值）控制在0.060～0065 min，測定 3.5 min 計算結果。樣品測定：加不同濃度待測樣品10 μL，同上操作，搖勻，立即測定，空白同上。

清除率=[（D1-D2）/D1]×100%。

式中：D1為自氧化時吸光度隨時間變化值;D2為加入樣品液后吸光度隨時間變化值。

1.5 試驗數據處理

每組數據平行3次，采用SPSS 10.0計算數據相對標準偏差并進行顯著差異分析。

2 結果與分析

黑龍江省東寧地區屬于長白山脈低丘陵地區，黑木耳呈圓形片狀，50片質量為50.2 g，視覺觀察顏色較深背部呈現白毛狀，卷曲程度較大;白木耳質量為45.9 g，木耳片形較大，背部白毛較多，卷曲程度沒有黑木耳大。

2.1 金屬離子檢測結果

依據“1.2.1”節相關國標檢測方法，對樣品金屬離子進行檢測，其離子標準曲線為鐵標準曲線：y=0.212 5x-0.003 235，r2=0.999 6;錳標準曲線：y=0.387 9x+0.000 15，r2=0.999 7;鈣標準曲線：y=0.043 55x+0.005 325，r2=0.999 6;鎂標準曲線y=0.364 4x+0.001 762，r2=0.999 8;鋅標準曲線：y=0.213 8x+0.002 3，r2=0.999 7。結果表明，東寧地區黑秋耳中鋅元素、鈣元素和鎂元素含量是玉木耳的3倍左右，錳元素含量達到近2倍，2種木耳間差異極顯著（P<0.01）。總之對于人體必需的宏量元素而言，黑木耳中Ca、Mg含量遠較玉木耳豐富;對于人體必需的微量元素而言，黑木耳中Fe、Mn、Zn含量也均明顯高于玉木耳。具體檢測結果見表1。如果僅從這幾種微量元素的含量來看黑秋耳的食用價值比玉木耳高。

2.2 多酚類化合物含量的檢測

依據“1.2.4”節方法建立標準曲線，其回歸方程為y=0.007 9x+0.010 1，r2=0.993 1，蒸干后得到黑秋耳多酚類化合物8 mg，黑秋耳多酚的提取率為0.16%;得到玉木耳多酚類化合物11.5 mg，玉木耳多酚的提取率比黑秋耳高，達到了0.23%。刁小琴等在綏化地區黑木耳多酚的提取中測得黑木耳多酚的提取率為0.92%[13]，本研究提取率較低，可能與木耳的生存環境有關，綏化地區屬于平原地帶，而東寧市屬于低丘陵地區，溫度差別較大。

2.3 多糖含量的檢測

依據“1.2.2”節方法建立標準曲線，多糖對照品在2.3～23 μg/mL 范圍內呈良好線性關系。其回歸方程為y=0.017 5x+0.017 6，r2=0.999 3，蒸干后得到黑秋耳多糖 445 mg，黑秋耳多糖的提取率為8.99%;得到玉木耳多糖487.5 mg，玉木耳多糖的提取率比黑秋耳高，達到了9.75%。吳小燕等利用超聲波頻率為70 kHz、料液比為1 g ∶ 30 mL，70 ℃ 超聲時間15 min，測得黑木耳多糖得率可達6.15%[11]，本研究結果與之相似，且本研究的提取率較高，說明玉木耳中多糖的含量比黑秋耳高。從紅外光譜圖（圖1）中可以看出，在3 300 cm-1附近有一強吸收峰，該吸收峰主要是由羥基及N—H伸縮振動所產生的;在2 920 cm-1附近出現的吸收峰是糖類C—H的伸縮振動吸收峰;在1 077、1 038、667、616、559、534 cm-1出現吡喃糖特征吸收之一，進一步在998～1 100 cm-1 出現2個峰，由此判斷多糖為β-吡喃糖，此外 1 633 cm-1 大吸收峰揭示多糖中存在酰胺基[16]，推測可能多糖為蛋白多糖。

2.4 皂苷含量檢測

配制人參皂苷標準品濃度分別為10、20、30、40、50、60、70 μg/mL，制作的標準曲線方程為y=0.006 3x+0.013 1，r2=0.999 2。蒸干后得到黑秋耳皂苷24.1 mg，黑秋耳皂苷的提取率為0.48%;得到玉木耳皂苷46.5 mg，玉木耳皂苷的提取率比黑秋耳高，達到了0.93%，說明玉木耳中皂苷的含量比黑秋耳高。

2.5 黃酮類化合物含量的檢測

通過配制一系列濃度的蕓香苷溶液測得黃酮類化合物檢測的標準曲線為y=10.495x-0.018 7，r2=0.997 3，試驗中采用超聲的方式提取2種木耳中黃酮類化合物，有助于提高黃酮化合物的提取率[17]，蒸干后得到黑秋耳黃酮化合物 10.5 mg，黑秋耳黃酮化合物的提取率為0.055%;得到玉木耳黃酮化合物4.5 mg，玉木耳黃酮化合物的提取率為 0.071%，說明黑秋耳中黃酮化合物的含量比玉木耳高。但韓秋菊等提取的黑木耳黃酮類化合物的提取率為0.43%[12]，本研究結果與之差距較大，分析可能是與菌袋培養基有關，在菌袋中富集了黃酮類化合物，所以含量較高。

2.6 抗氧化結果

多酚類物質是發揮抗氧化作用的重要成分之一[18-19]，測得2種木耳提取的多酚溶液濃度分別為67.07 μg/mL和 74.67 μg/mL，在鄰苯三酚的自氧化過程中會有 O-2 · ?產生，此自由基既是鄰苯三酚氧化的中間產物，又能加速鄰苯三酚的自氧化進程，因此通過測定待測物質對鄰苯三酚自氧化的抑制作用，可以判定其對 O-2 · ?的清除能力[17]。取一系列多酚提取液測得2種木耳多酚的抗氧化能力，結果顯示：2種木耳的多酚提取物均有一定程度的清除 O-2 · ?的能力，69.07 μg/mL 黑秋耳多酚提取物的清除能力達到了 52.56%，玉木耳的多酚提取物清除 O-2 · ?的能力比黑秋耳強，71.67 μg/mL玉木耳多酚提取液的清除能力達到了70.43%，并隨著濃度的升高清除能力逐漸提高（圖2）。

3 結論

同樣片數的東寧地區黑秋耳的質量、卷曲程度較玉木耳大;對于人體必需的宏量元素而言，黑木耳中Ca、Mg含量遠較玉木耳豐富，對于人體必需的微量元素而言，黑木耳中Fe、Mn、Zn含量也均明顯高于玉木耳;玉木耳中的多酚、多糖和皂苷的含量比黑秋耳大，但黃酮類化合物含量比黑秋耳小，其中紅外表征結果顯示2種木耳中的多糖為β吡喃糖;從多酚的抗氧化效果來看，玉木耳多酚對超氧陰離子自由基的清除能力較黑秋耳強，從結果來看，玉木耳的食用價值較黑秋耳高。

參考文獻：

[1]黃年來. 中國食用菌百科[M]. 北京：農業出版社，1993：164-165.

[2]Wu J，Ding Z，Zhang K. Improvement of exopolysaccharide produc-tion by macro-fungus Auricularia auricula in submerged culture[J]. Enzyme and Microbial Technology，2006，39（4）：743-749.

[3]Murcia M A，Martinez-Tomé M，Jiménez A M，et al. Antioxidant activity of edible fungi（truffles and mushrooms）：losses during industrial processing[J]. Journal of Food Protection，2002，65（10）：1614-1622.

[4]Cheung P. The hypocholesterolemic effect of two edible mushrooms：Auricularia auricula（tree-ear）and Tremella fuciformis（white jelly-leaf）in hypercholesterolemic rats[J]. Nutrition Research，1996，16（10）：1721-1725.

[5]黃濱南，張秀娟，鄒 翔，等. 黑木耳多糖抗腫瘤作用的研究[J]. 哈爾濱商業大學學報（自然科學版），2004，20（6）：648-651.

[6]馮小飛，趙 寧. 不同產地黑木耳總膳食纖維及油脂含量分析[J]. 黑龍江農業科學，2016（2）：122-125.

[7]張 琳. 木耳化學成分及藥理作用研究[D]. 長春：吉林農業大學，2013.

[8]曹玉春，包海鷹，李 曉，等. 玉木耳提取物對H22荷瘤小鼠體內抗腫瘤作用研究[J]. 菌物學報，2017，36（9）：1289-1298.

[9]柴軍紅，何婷婷，鐘讀波，等. 黑加侖果渣活性成分及金屬離子含量變化初步研究[J]. 食品研究與開發，2017，38（6）：133-137.

[10]宋曉勇，劉 強，楊 磊，等. 蒲公英多糖提取工藝及其抗菌活性研究[J]. 中國藥房，2010，21（47）：4453-4455.

[11]吳小燕，蔡為榮，周 迎. 超聲波提取黑木耳多糖及其體外抗凝血活性[J]. 食品與發酵工業，2015，41（12）：219-223.

[12]韓秋菊，李 薇. 黑木耳黃酮類化合物提取工藝研究[J]. 安徽農業科學，2011，39（28）：17237-17238，17267.

[13]刁小琴，關海寧. 超聲輔助提取黑木耳多酚及其抑菌活性研究[J]. 食品工業，2013，34（3）：69-72.

[14]陳 勛，于海寧，唐德松，等. 苦瓜皂苷快速分離純化方法研究[J]. 食品科學，2004，25（2）：114-117.

[15]鄭 義，邵 穎，陳安徽，等. 益智仁總黃酮超聲輔助提取工藝優化及其抗氧化活性[J]. 食品科學，2014，35（6）：44-49.

[16]夏朝紅，戴 奇，房 韋，等. 幾種多糖的紅外光譜研究[J]. 武漢理工大學學報，2007，29（1）：45-47.

[17]孫延芳，李子昂，梁宗鎖，等. 食用菌多糖及其紅外光譜分析[J]. 黑龍江農業科學，2011（10）：99-100.

[18]李芬芳，馬艷弘，趙密珍，等. 草莓多酚的提取工藝優化及其抑菌活性研究[J]. 江蘇農業科學，2017，45（3）：155-158.

[19]李芬芳，馬艷弘，趙密珍，等. 響應面優化提取草莓多酚及其抗氧化活性研究[J]. 江蘇農業科學，2018，46（1）：141-145.

收稿日期：2018-09-26

基金項目：黑龍江省教育廳科研備案項目（編號：1352MSYQN002）;黑龍江省大學生創新創業訓練計劃（編號：201810233045）;黑龍江省牡丹江市科學技術計劃（編號：G2018d2475）。

作者簡介：張 蕾（1984—），女，黑龍江省東寧人，博士，講師，主要從事微生物與生物化學研究。E-mail：swxzlz@126.com。