凝膠色譜法測定頭孢菌素類藥物中高分子雜質的應用心得

申賀

摘 要：在物質鑒定技術體系當中。凝膠色譜法一直以來都是一種非常常用的技術，尤其在頭孢菌素藥物的高分子雜志測定當中的應用尤其廣泛。和其他成分測定技術相比起來，該技術分離效果出色，同時操作簡單，易于使用，設備操作也并不復雜，所以在長期實踐當中得到了人們的喜愛。本文對于凝膠色譜法測定頭孢菌素類藥物當中高分子雜質的一些應用要點進行了總結和分析，希望可以給相關工作的開展提供一些參考。

關鍵詞：頭孢菌素類藥物；凝膠色譜技術；高分子雜質

由于藥物藥理以及具體的制備工藝的原因，很多抗生素藥物當中有很多高分子雜質的存在，其對于抗生素藥物效果的正常發揮而言起到了很大的影響，在嚴重時，甚至會產生一些副作用，所以不難看出高分子雜質測定的重要性，在其投入市場開始大規模銷售之前，首先需要保證高分子雜質數量符合于相關規定。現在在頭孢菌素類藥物的高分子雜質測定當中，凝膠色譜法的應用較為廣泛，本文針對其中的測定要點進行了分析。

1 儀器準備和實驗準備

對于這種物質分析類的醫學實驗而言，準備工作是非常重要的，頭孢菌素類的藥物高分子雜質測定實驗也是如此。總結起來，作為實驗人員來說，首先需要做好各項準備工作，保證各項參數完全符合說明書的要求，讓實驗可以取得一個更好的結果。

1.1 儀器準備

對于儀器準備而言，實驗人員首先需要將輸液設備、檢測設備以及數據處理設施準備好，對于輸液設備而言，首先需要保證設別在運行過程中輸液流動速度的均勻性，讓其符合相關標準的規范，同時監測設備準備工作也要著重考慮紫外檢測能力，確保該項能力達到飾演的需要。設備準備過程中，工作人員也要及時和色譜工作站的人員取得聯絡，保證數據記錄的準確無誤，同時工作人員也可以將數據發送到積分記錄儀器當中。儀器準備工作最關鍵的一個環節就是設置合理的檢測標準，及時檢測自行配置的儀器設備。實驗人員為了可以保證試驗的重現性，在工作中也要隨時對設備進行復檢。

1.2 凝膠色譜柱的準備

在本實驗當中凝膠色譜柱起到的作用是非常關鍵的，工作人員你首先需要足夠了解儀器設備，尤其是要明確儀器的最大容量，這樣實驗人員才能夠依據藥品的溶解能力來進行實驗，以此保證實驗成功。一般而言，凝膠色譜柱體積不能超過柱床體積，由于此類藥物中存在的高分子雜質比較特殊，尤其是柱床體積更為特別，所以在準備過程中可以直接確定柱床體積在50ml左右，在此基礎上就可以確定凝膠色譜柱體積。

1.3 分段玻璃柱管以及提取凝膠介質

對于玻璃柱管而言，首先需要檢視其外觀，如果出現開口，則應采用玻璃棉和開口橡膠塞來封端，也可以使用可調節玻璃柱管來開展實驗。對抗生素藥物而言，高分子測定過程中需要采用葡聚糖凝膠來充當試驗介質，在實驗開始之前也要加水，保證溶脹度，結合實驗器材的相關需要來進行測算。其中的浸泡介質如果是蒸餾水，則需要首先將其置于4℃的環境中40小時，或者將水煮沸，將氣泡排除到水外，在條件允許時，也可以采用真空脫氣的方法來溶脹，這樣可以起到更好的實驗效果。

1.4 裝柱

將溶脹好的凝膠介質用蒸餾水懸浮靜置后，每次傾去上層液，以去除凝膠碎屑和雜質。按照這種方法進行多次洗滌，直到上層的精置液澄清為止。實踐中可將凝膠介質用水制成懸漿，然后一次性的倒入垂直放置的玻璃柱管中，待凝膠顆粒沉降完畢后即完成裝柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放開柱管下口，保持液流順暢，用滴灌逐管從漏斗中加入凝膠懸漿，讓凝膠顆粒在蒸餾水中緩慢沉降，注意讓漏斗中隨時保持一定的凝膠懸漿。

1.5 維護以及恢復凝膠柱

對于凝膠柱而言，維護要點主要在于保證柱床的平衡性和連續性，如果凝膠出現了收縮問題或者氣泡變形問題，都需要將凝膠導出，重新進行裝柱。如果僅僅柱頭部位出現了污損，則可以直接將該部分去除，之后加水，用玻璃棒攪拌，靜置之后，凝膠顆粒重新沉降，之后將柱頭重新封閉。如果色譜柱出現嚴重的非特異性吸附問題，那么在后續使用當中就很可能改變凝膠色譜柱分離機制，在嚴重時，直接由于堵塞從而升高柱壓，在這種情況下則需要回復凝膠，進行相關處理。

2 系統適用性實驗

系統適用性試驗對溶液的制備更加注重方便性和可操作性，系統適用性試驗用溶液的配制方法為用主成分對照品與雜質對照品混合配制，但還是會使得有些雜質對照品不能得到，如性質不穩定或分離提取技術要求太高等，但這些雜質峰恰恰又是與主成分峰最難分離的色譜峰。系統適用性試驗目前包括很多內容，主要考察對照品測定系統與高分子雜質測定系統中藍色葡聚糖2000溶液峰的保留時間的比值，以及理論板數和拖尾因子，以此來控制對照品測定與高分子雜質測定時儀器狀態的同一性。在以藍色葡聚糖2000的保留時間來表示高分子雜質的保留特征時，對照品色譜峰及高分子雜質色譜峰與藍色葡聚糖2000溶液色譜峰保留時間的比值都應控制在一定的限度內，由此才能實現對色譜柱狀態的正常控制。

3 操作方法上的注意事項

3.1 樣品溶液及對照溶液的制備

具體操作中必須要按規定的標準來配制樣品溶液，由于某些高濃度抗生素溶液具有一定的不穩定性，所以通常對樣品溶液采取即溶即進的形式。對照溶液的制備上，要注意頭孢菌高分子雜質的含量測定，通常以樣品自身在SDS水溶液或純水中的締合物作為對照進行定量。在制備締合物時特別要注意對濃度及水的純度的控制，以此來保證締合完全。

3.2 進樣及進樣方式

由于頭孢菌素高分子雜質的含量測定，需要對照溶液分別在不同流動相狀態下進樣，所以更換流動相后凝膠色譜柱應充分平衡后才能進樣。進樣方式可以采用色譜儀自動進樣，也可以選取手動的方式，但是兩種進樣方式都必須要做到色譜柱端沒有死體積，這樣才能避免樣品的擴散造成峰展寬甚至影響分離。在自動進樣操作時可以參照有關液相色譜操作規程進行，手動進樣方式主要用于開口柱。

4 結束語

經過前文總結，我們已經知道，在臨床當中，頭孢菌素是一種較為常用的抗生素，而高分子雜質含量直覺決定其自身的質量，所以需要我們及時對其中的高分子雜質含量進行測定，讓其可以發揮預期的藥效，避免產生副作用。在長時間貯存的過程當中，頭孢菌素類藥物會導致各種雜質的產生，以聚合物為主，對于該高分子雜質而言，凝膠色譜法有著很好的分離效果，應用較為廣泛，本文針對其使用要點進行簡要分析。

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