P53基因檢測在原發性胃腸道淋巴瘤患者預后評估中的應用

葉筱穎

江西省上饒市人民醫院 （江西上饒 334000）

原發性胃腸道淋巴瘤（primary gastrointestinal lymphoma，PGIL）屬于結外淋巴瘤，惡性程度差異較大，免疫表型在淋巴瘤惡性程度的判斷中較為常用，但是一些患者雖然具有相同的免疫表型，預后卻不同[1]。研究表明，基因檢測在淋巴瘤發生、發展及預后評價中發揮極為重要的作用[2-5]。本研究探討P53基因檢測在原發性胃腸道淋巴瘤患者預后評估中的應用價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2018年6月江西省上饒市人民醫院收治的原發性胃腸道淋巴瘤患者25例作為試驗組，其中男15例，女10例；年齡6～81歲，平均（46.4±7.5）歲；病程1周至33年，平均（16.3±2.6）年；胃淋巴瘤15例，腸淋巴瘤10例；胃黏膜相關淋巴組織（MALT）淋巴瘤15例，非胃MALT淋巴瘤10例；B細胞淋巴瘤23例，非B細胞淋巴瘤2例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期7例；臨床癥狀，腹痛18例，消化道出血14例，貧血14例，腹部包塊6例，低蛋白血癥10例，腸梗阻2例，非特異性消化道癥狀8例，體重顯著降低7例，發熱2例，腹瀉2例，消化道穿孔1例，便秘1例，吞咽困難1例。25例患者中，行單純手術治療10例，其中5例為胃部分切除術，3例為腸部分切除術，1例為全胃切除術，1例為姑息手術；行手術+化療11例，其中10例為腫瘤切除術+CHOP方案化療，1例為CHOP方案化療+腫瘤切除術；行非手術治療4例，其中2例為單純CHOP方案化療，2例為對癥支持治療。另選取同期江西省上饒市人民醫院收治的淋巴結反應性增生患者30例作為對照組。

納入標準：（1）試驗組均經病理組織學檢查確診為原發性胃腸道淋巴瘤；（2）試驗組均為非霍奇金淋巴瘤；（3）患者均知情同意研究內容，且已簽署知情同意書。

排除標準：（1）缺乏完整病例資料的患者；（2）無法有效配合研究的患者。

1.2 方法

兩組標本均用石蠟包埋起來，連續切片，厚度為3 μm；購買Sigma公司生產的20 mg/ml蛋白酶K儲存液，北京金菩嘉醫療科技有限公司生產的P53基因探針（綠色熒光信號）。

試驗組運用改良熒光標記原位雜交（FISH）技術檢測P53，由于檢測原發性胃腸道淋巴瘤石蠟切片P53的目的細胞為淋巴細胞（淋巴惡性增殖區域，胃腸組織），因此依據組織細胞常規FISH方法對FISH檢測方案進行改良，包括于65℃的溫度下烘烤過夜，室溫下于二甲苯中脫蠟，于梯度乙醇中復水，于沸水中煮切片15～25 min，于37℃蛋白酶K工作液中浸入4～8 min，室溫下漂洗、脫水，在此過程中充分利用2×SSC溶液、梯度乙醇，在丙酮中浸入2 min，于56℃的溫度下進行1 h的烤片。

對照組則對患者的外周血淋巴細胞滴片，建立閾值，在此過程中運用常規滴片血細胞FISH方法。

1.3 臨床評價

依據HE染色的病理組織切片對淋巴瘤細胞分布位置進行判定并詳細記錄，在該區域中分析該組織切片的探針信號，對間期細胞中每種探針的信號進行檢測，確定結果：有2個綠色熒光信號出現在每個細胞中評定為P53正常，有0個或1個綠色熒光信號出現在每個細胞中評定為P53異常[6]。選取具有均勻信號的雜交區域并計數；將陰性對照設定為正常人外周淋巴細胞，將陽性對照設定為既往已知陽性病理切片。

1.4 統計學處理

采用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

試驗組中，P53基因缺失10例（40.0%），生存期8～12個月，平均（10.2±1.7）個月；胃淋巴瘤6例，腸淋巴瘤4例；非MALT淋巴瘤5例，MALT淋巴瘤5例；B細胞淋巴瘤9例，非B細胞淋巴瘤1例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期6例，Ⅲ～Ⅳ期4例。試驗組中，P53基因正常13例（52.0%），生存期30～34個月，平均（32.0±5.6）個月。試驗組P53基因正常患者的生存期長于P53基因缺失患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。對照組中，P53基因缺失2例（6.7%）。試驗組P53基因缺失率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

原發性胃腸道淋巴瘤起源于胃腸壁淋巴組織內，多為非霍奇金淋巴瘤，臨床表現缺乏特異性，基因檢測在淋巴瘤發生、發展及預后評價中發揮極為重要的作用。

研究表明，如果原發性胃腸道淋巴瘤患者P53基因缺失，則其具有較高的惡性程度，與單基因改變或無基因改變患者比較具有較短的平均生存期[7-12]。本研究探討P53基因檢測在原發性胃腸道淋巴瘤患者預后評估中的應用價值，結果顯示，試驗組P53基因正常患者的生存期長于P53基因缺失患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；試驗組P53基因缺失率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

總之，P53基因檢測在原發性胃腸道淋巴瘤預后評估中的應用價值較高。