不同桑品種的桑葉多酚和黃酮含量的測定

王瑞嫻，楚 渠，禚 蘇，楊松杰

(1.安康學院 現代農業與生物科技學院，陜西 安康 725000；2. 陜西省蠶桑重點實驗室，陜西 安康 725000)

桑(Morus alba L.)是桑科(Moraceae)桑屬(Morus L.)的落葉喬木或灌木，多年生葉用經濟作物。桑樹具有耐貧瘠、耐干旱、適應性強等特點，有較廣的栽培范圍。我國桑樹種植的歷史悠久，但對桑種質的開發利用研究較少，許多桑種質的藥用價值并未完全發掘。

多酚是植物中的酚類次生代謝產物，在植物葉、果、皮、根中廣泛存在，桑樹中約占桑葉干重的1%～3%左右[1]。桑葉多酚具有抗輻射、抗衰老等功能[2～5]，可以應用于非酒精性脂肪性肝病的治療[6]。黃酮類化合物主要包括蘆丁、槲皮素和異槲皮苷等成分，能清除自由基[7]、降血糖[8]、降血壓[9]等作用。安康學院多年來收集和保存了數百份國內外各地不同地域來源的桑樹資源，其中多數品種的綜合利用價值尚未得到基于有效成分的評估。筆者對15個不同桑品種的桑葉多酚和黃酮進行提取及含量測定，為綜合評估桑樹種質資源的利用價值以及深入研究和開發桑資源提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

試驗的供試材料分別為浙農桑、鏡泊桑、羊角桑、日本早生、望天青、GM41、麻桑、扶桑丸、魯9463、鳳尾桑、黃桑、朝桑、紅頭桑、桐鄉青、烏克蘭。取6～15位的新鮮葉片，洗掉泥沙等雜物，用雙蒸水沖洗干凈，自然晾干后于75℃干燥箱中干燥1 h，粉碎過60目篩子，-20℃密封保存。

1.2 試驗方法

1.2.1 沒食子酸和蘆丁標準曲線的繪制 參照沈維治等人[10]的方法繪制沒食子酸標準曲線。參照康璇[11]等人的方法繪制蘆丁標準曲線。

1.2.2 桑葉多酚的提取與測定 分別準確稱取1g桑葉粉，用少許95%乙醇溶解，加入蒸餾水使得固液比為1∶25，于60℃恒溫水浴鍋中浸提90 min，取出后冷卻，5 000 r·min-1離心15 min，轉移上清液于50 mL容量瓶中定容。

分別吸取1.0 mL提取液，加入5.0 mL水、1.0 mL福林試劑和3.0 mL 10%碳酸鈉溶液，混勻，靜置2 h，顯色，在765 nm波長下測定試樣溶液的吸光度。

1.2.3 桑葉黃酮的提取及測定 準確稱取5 g桑葉粉，用60%的乙醇在80℃的水浴鍋中浸提3 h。用4層紗布過濾浸提液，將濾液濃縮至50 mL，待用。取濃縮液15 mL，5 000 r·min-1離心30 min，取上清，使用60%乙醇定容至100 mL，供試。

取桑葉黃酮供試液5 mL于25 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1三氯化鋁乙醇溶液定容至25 mL，混勻，靜置10 min，以三氯化鋁乙醇溶液為空白，測定桑葉黃酮供試液400 nm波長處吸光值，根據測定的標準曲線計算桑葉中的黃酮總含量。

1.3 數據處理

采用EXCEL2010和SPSS19.0軟件對實驗數據進行分析。

2 結果與分析

2.1 多酚和黃酮的標準曲線

分別在765 nm和400 nm波長處，測得沒食子酸和蘆丁標準溶液的吸光值，以吸光度為縱坐標(圖1)，得沒食子酸標準曲線的回歸方程為y=0.0032x+0.0290，R2=0.9952；獲得蘆丁回歸方程為y=17.215x-0.0005，回歸系數R2=0.9962。表明沒食子酸和蘆丁在一定的范圍內濃度與吸光值之間有較好的線性關系，相關系數R2均大于0.99，說明實驗的準確性高，分析結果穩定。

圖1 標準曲線

2.2 桑葉多酚和黃酮總含量測定

分別對15份桑品種桑葉中的多酚和黃酮含量進行測定(表1)。

表1 桑葉多酚和黃酮的含量

分析發現15份桑樹種質中桑葉多酚含量介于0.358～4.256 mg·g-1之間，紅頭桑的含量最低，其值為0.358 mg·g-1，浙農桑的多酚含量最高，達到4.256 mg·g-1，紅頭桑的11.89倍，這體現了浙農桑在桑葉多酚的開發利用領域所蘊含的潛在價值。

桑葉黃酮的含量在14.389-32.200 mg·g-1之間，其中望天青品種的桑葉中含有的黃酮含量最低，每克桑葉中僅含有14.389 mg的黃酮，鳳尾桑的桑葉中黃酮含量最高，每克桑葉中含有32.200 mg的黃酮，黃桑次之，每克桑葉中含有31.294 mg的黃酮。說明鳳尾桑和黃桑在黃酮利用領域具有較大的價值。

2.3 供試桑品種中多酚和黃酮的相關性分析

對同一桑種質桑葉中多酚和黃酮含量進行相關系數矩陣分析(表2)。桑葉多酚與黃酮含量的相關系數為-0.168，且觀測到的顯著性水平為0.548，遠大于0.05，因此在同一桑品種桑葉中多酚和黃酮含量之間沒有相關關系。

表2 桑葉中多酚和黃酮含量的相關性

3 討論

不同品種的桑葉中黃酮類化合物含量的差異一般是由外部因素和內部因素影響的，外部因素主要包括生長環境、桑葉位置等影響。內部因素主要是品種的差異，其中，品種的差異是不同桑品種桑葉中黃酮含量不同的主要原因。劉利等人的研究顯示，桑樹中黃酮類化合物的含量與桑樹的抗逆性有關，抗逆性強的桑品種，其桑葉中的黃酮含量明顯較高[12]。研究中鳳尾桑的桑葉中黃酮含量最高，望天青的含量最低，經查閱資料發現，鳳尾桑和望天青同屬于魯桑，前者抗萎縮病能力較強，而后者抗細菌病、萎縮病較弱，體現出抗逆性較高的鳳尾桑黃酮含量較高，與前人的研究結果相一致。研究為提高桑樹種質資源的開發利用價值提供了一定的理論基礎。