植物源性食品中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留的LC-MS/MS檢測方法研究

司文帥，張 穎，張其才，韓奕奕，楊曉君，白 冰，宋衛國*

(1上海市農業科學院農產品質量標準與檢測技術研究所，上海 201403；2上海健康醫學院，上海 201318；3上海市農產品質量安全檢測中心，上海 201708)

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰均為近幾年國內外農藥企業推出的高效、低毒新型農藥，也是上海市農業部門推薦使用的農藥品種，被廣泛應用于水果、蔬菜和糧食等作物。但是，目前在相關國家標準、行業標準中無對應的檢測方法，不利于上海地產農產品中農藥殘留的監測控制，所以十分有必要開展以上3種農藥殘留快速、準確的檢測方法研究。

目前，關于水果、蔬菜和糧食中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的殘留檢測方法主要有氣相色譜法[1]、液相色譜法[2-4]、液相色譜-串聯質譜法[5-6]和氣相色譜-串聯質譜法[7-8]，前處理多采用固相萃取小柱和分散固相萃取凈化。本研究建立的分散固相萃取方法具有快速、簡單、高效的特點，結合液相色譜-串聯質譜的靈敏度高、抗干擾能力強特點，可以提高氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留檢測的準確度和精密度。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

液相色譜-串聯質譜儀(電噴霧離子源，美國Waters公司)、BEH C18 色譜柱(1.7 μm，2.1 mm×100 mm，美國Waters公司)、MX-F渦動混合器(中國DRAGONLAB公司)、5415D離心機(美國eppendorf公司)、無水MgSO4、C18和PSA凈化劑、0.22 μm有機濾膜(中國安譜公司)。

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標準品(純度≥98%，德國Dr.Ehrenstorfer公司)，乙腈和甲醇(色譜純，美國默克公司)；甲酸和乙酸銨(色譜純，美國默克公司)；實驗室用水為一級水。

1.2 標準儲備液配置

準確稱取氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標準品，用乙腈溶解配制成質量濃度為1 000 mg/L的標準儲備液。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

流動相A為甲醇，B為10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液；流速：0.4 mL/min；梯度洗脫程序：0 min，5%A；0—1.0min，95%A；1.0—3.0min，95%A；3.0—3.6min，5%A；3.6—4.0min，5%A。柱溫：45℃；進樣量：5 μL。

1.3.2 質譜條件

電噴霧離子源(ESI)正離子模式；毛細管電壓：2.5 kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：450℃，霧化氣(氮氣)流速：1 000 L/h；錐孔氣(氮氣)流速：150 L/h；碰撞氣(氬氣)流速：0.11 L/h。

1.3.3 樣品處理

準確稱取樣品10 g(精確到0.01 g)于50 mL離心管中，加入乙腈20 mL，高速渦旋混勻20 min，然后加入氯化鈉約5 g，立即渦旋混勻約30 s，于8 000 r/min離心5 min，上清液備用。

吸取提取液約1.5 mL于加有無水硫酸鎂150 mg、C1850 mg和PSA 50 mg的2 mL塑料離心管中，渦流混勻30 s后于8 000 r/min離心5 min。取上清液0.5 mL，加一級水0.5 mL，混勻，過0.22 μm濾膜后LC-MS/MS測定。

2 結果與分析

2.1 樣品提取與凈化

在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜5種樣品中添加氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺標準溶液(添加水平20 μg/kg)，對比水、乙腈和0.2%甲酸乙腈3種溶劑的提取效果。結果表明：水溶液中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺回收率分別為7%、6%、4%；而乙腈和0.2%甲酸乙腈溶液中3種農藥的平均提取回收率分別約為95%、96%，無明顯差異，因此確定用20 mL乙腈為提取溶液。

稱取加標樣品10g(添加水平20 μg/kg)，按照1.3.3所述方法處理，比較幾種凈化材料對樣品的凈化效果(表1)。綜合考慮回收率和凈化效果，本試驗選擇150 mg無水MgSO4、50 mg C18和50 mg PSA對樣品進行凈化。

2.2 質譜和液相條件的優化

在全掃描采集模式下，對比正、負離子模式下氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的響應，結果表明：正離子模式下，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的響應高于負離子模式時的響應，因此選取電噴霧正離子模式作為電離模式。在MS/MS模式下，以[M+H]+離子為母離子得到二級碎片離子的全掃描質譜圖，選擇豐度相對高和相對分子質量較大的碎片離子，優化碰撞能量，以化合物的特征碎片離子的靈敏度達到最大時的碰撞能量為最佳碰撞能量，最終質譜參數見表2。

表1 凈化材料比較

表2 氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺MS參數

分別以甲醇-10mmol/L乙酸銨水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、甲醇-10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液和甲醇-水溶液作為流動相，考慮不同流動相對待測化合物測定的影響。當流動相為甲醇-10 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液時，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的峰型最好,儀器響應最佳。

表3 線性范圍、標準曲線、相關系數、檢出限及定量限

2.3 線性范圍

表3結果表明，在2—100 μg/L范圍內，氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺的濃度與儀器響應呈良好線性，r2>0.998，方法檢出限為2 μg/kg，定量限為5 μg/kg。

2.4 方法的準確度和精確度測定

在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺添加濃度分別為10 μg/kg、20 μg/kg和40 μg/kg時，測定計算結果顯示，方法的回收率為88.2%—107.6%，相對標準偏差為1.2%—8.2%(表4—6)。試驗回收率和相對標準偏差均可以滿足分析方法要求。

表4 氟吡菌胺的加標回收試驗結果

表6 氯蟲苯甲酰胺的加標回收試驗結果

3 結論

氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留可以用LC-MS/MS方法進行分析，樣品經乙腈渦旋提取20 min，采用無水MgSO4、PSA和C18分散固相萃取凈化，采用液相色譜-串聯質譜外標法定量。在水稻、西瓜、青菜、番茄和黃瓜中該方法的3個濃度添加回收率為88.2%—107.6%，相對標準偏差為1.2%—8.2%，能滿足植物源性食品中氟吡菌胺、烯肟菌胺、氯蟲苯甲酰胺殘留分析的要求，可以用于市場監測和風險評估，保障消費者食品安全。