烯丙孕素對(duì)小鼠的經(jīng)口急性毒性LD50試驗(yàn)

馮言言 鄭 莉 孟 芳 林 紅 李龍飛 田振平 孔 梅* 吳連勇*

（①齊魯動(dòng)物保健品有限公司 山東 濟(jì)南 250100 ②齊魯晟華制藥有限公司 山東 德州）

烯丙孕素，為人工合成的甾類孕激素，屬于19-去-甲睪酮系列，化學(xué)名為17α-烯丙基-17-羥基雌甾-4，9，11-三烯-3-酮。烯丙孕素外觀呈白色結(jié)晶性粉末，具有脂溶性，能夠滲入靶細(xì)胞，與特定的受體結(jié)合。烯丙孕素最初由英特威公司開發(fā)成溶液，可用于控制后備母豬同期發(fā)情 [1～3]。

烯丙孕素的作用機(jī)制同天然孕激素，具有擬孕酮和抗促性腺激素作用，同時(shí)也具有較弱的雌激素作用、促合成作用和雄性激素作用，但是無腎上腺皮質(zhì)激素和抗炎作用[4]?？诜┍兴睾竽軌蛞种苿?dòng)物正常的性周期，降低血漿中內(nèi)源性促性腺激素促黃體素和卵泡刺激素的濃度，繼而使大卵泡退化，導(dǎo)致在治療期間動(dòng)物不會(huì)出現(xiàn)發(fā)情和排卵。一旦停止治療，促黃體素的濃度便會(huì)穩(wěn)步正常的升高，允許卵泡生長(zhǎng)及成熟，動(dòng)物便達(dá)到同期發(fā)情[5，6]。為考察烯丙孕素原料的急性毒性，特進(jìn)行了烯丙孕素對(duì)小鼠經(jīng)口染毒的急性毒性試驗(yàn)，以期為烯丙孕素制劑產(chǎn)品的開發(fā)以及臨床應(yīng)用提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康ICR小鼠36只，體重18～22g，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2012-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2012-0004。小鼠自由采食和飲水，飲用水為符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)的自來水。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)飼養(yǎng)3d。鼠飼糧的主要營(yíng)養(yǎng)含量：水分(%)≤10，粗蛋白(%)≥18，粗脂肪(%)≥4，粗纖維(%)≥5，粗灰分(%)≤8，鈣(%)1.0～1.8，磷(%)0.6～1.2。

1.1.2 試驗(yàn)器材 電子天平(感量0.1g)、無菌注射器(1ml)、灌胃器、剪刀、鼠籠、手套、口罩等。

1.1.3 受試物及配置 烯丙孕素原料，含量99.8%，批號(hào)：50031601001。根據(jù)烯丙孕素的預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，染毒前準(zhǔn)備稱取一定量的烯丙孕素后用適量二甲基亞砜溶解，配成500mg/ml的溶液，備用。

1.2 方法[7， 8]

（1）預(yù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)1000、2500、5000和8000mg/kg體重4個(gè)染毒劑量，每組4只小鼠(雌、雄各半)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，測(cè)定4/4致死劑量和0/4致死劑量。結(jié)果表明，烯丙孕素在上述染毒劑量下均未引起小鼠死亡。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，正式試驗(yàn)是采用最大給藥劑量法測(cè)定烯丙孕素對(duì)ICR小鼠經(jīng)口的半數(shù)致死量(LD50)。（2）正式試驗(yàn)時(shí)選用20只ICR小鼠，雌雄各半，禁食12h后分別稱重。根據(jù)每只小鼠體重，計(jì)算給予受試物的體積。采用等體積灌服給藥，小鼠經(jīng)口灌服受試物體積為0.1ml/10g體重。當(dāng)染毒劑量達(dá)到5000mg/kg體重后以上時(shí)，不再繼續(xù)染毒。（3）受試物在染毒結(jié)束后持續(xù)觀察30min，2h后再觀察一次，之后觀察1次/d，仔細(xì)記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和特點(diǎn)，毒性反應(yīng)出現(xiàn)和小時(shí)的時(shí)間以及死亡時(shí)間。試驗(yàn)連續(xù)觀察14d，觀察期內(nèi)動(dòng)物自由采食和飲水。觀察結(jié)束后將所有存活小鼠處死，進(jìn)行眼觀病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果

小鼠經(jīng)口染毒后，觀察期內(nèi)所有小鼠臨床表現(xiàn)正常，無明顯神經(jīng)癥狀，皮膚和被毛無異常，至觀察期結(jié)束時(shí)20只小鼠均存活。試驗(yàn)結(jié)束后剖檢存活小鼠，包括胃、十二指腸在內(nèi)的內(nèi)臟器官以及生殖器官均未發(fā)現(xiàn)明顯眼觀病變。結(jié)果見表1。結(jié)果表明，烯丙孕素對(duì)小鼠的經(jīng)口LD50大于5000mg/kg體重。

表1 烯丙孕素對(duì)小鼠經(jīng)口染毒試驗(yàn)結(jié)果

4 討論及結(jié)論

（1）目前國(guó)內(nèi)外有較少的關(guān)于烯丙孕素的急性毒性資料報(bào)道。EMA(European Medicines Agency，歐洲藥品管理局)報(bào)道[9]，大鼠和小鼠腹腔注射烯丙孕素的半數(shù)致死量(LD50)分別為176mg/kg體重和233mg/kg體重，犬口服烯丙孕素劑量達(dá) 400mg/kg也能夠很好地耐受，可以看出，烯丙孕素毒性較低。（2）本研究中烯丙孕素原料對(duì)小鼠經(jīng)口染毒LD50大于5000mg/kg體重，根據(jù)外源性化學(xué)物毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，可以確定烯丙孕素屬于實(shí)際無毒化合物，可開發(fā)為臨床使用制劑，用于控制后備母豬同期發(fā)情，便于規(guī)?；i場(chǎng)的統(tǒng)一管理。