重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）對蛋雞免疫效果抗體監測以及安全性試驗評估

楊起賀，楊 浩，高 鵬，榮富龍，李叔偉

（哈藥集團生物疫苗有限公司，哈爾濱 150000）

1 材料與方法

1.1 供試材料

哈藥集團生物疫苗有限公司重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）滅活疫苗。

抗體監測試劑：禽流感H5N1 Re-11株和Re-12以及H7N9Re-2株抗原及陽性血清，由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所提供，1%紅細胞懸液由哈藥集團生物疫苗有限公司質量管理部提供的SPF級公雞紅細胞。

1.2 試驗雞群

黑龍江省哈爾濱市某蛋雞養殖場，飼養量蛋雞1 500只，正常免疫雞群900只，300只不免疫重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗，300只做應激實驗。

1.3 免疫劑量及方法

首免：15日齡，免疫劑量0.3 mL·羽-1，頸部皮下注射。二免：45日齡，免疫劑量0.5 mL·羽-1，肌肉注射。三免：75日齡，免疫劑量0.5 mL·羽-1，肌肉注射。四免：100日齡，免疫劑量0.5 mL·羽-1，肌肉注射。

1.4 血樣采集

15日齡免疫前先測定基礎抗體，然后于29日齡（首免后2周）、36日齡（首免后3周）、43日齡（首免后4周）、52日齡（二免后1周）、59日齡（二免后2周）、66日齡（二免后3周）、73日齡（二免后4周）、82日齡（三免后1周）、89日齡（三免后2周）、 97日齡（三免后3周）、104日齡（三免后4周）、111日齡（三免后5周）、117日齡（四免后1周），每次分別每組采集10份血樣，離心制備血清并按照國家標準進行紅細胞血凝抑制實驗（HI）檢測抗體。

1.5 檢測試劑和檢測方法

試驗均用國家標準紅細胞血凝抑制實驗（HI）進行抗體檢測，待檢血清HI抗體滴度≥4log2時為抗體合格。

1.6 安全實驗

首次免疫15日齡接種H5+H7亞型三價滅活疫苗后，每天測定雞的體重。免疫接種后連續觀察20 d，記錄疫苗接種部位和全身反應。

1.7 應激實驗

將300只雞分為5組，每組60只，A組15日齡接種0.3 mL，B組15日齡接種0.5 mL，C組75日齡接種0.5 mL，D組75日齡接種0.8 mL，F組75日齡接種1 mL。接種后通過吸收時間，精神狀態，采食量觀察不同劑量H5+H7亞型三價滅活疫苗對雞群的應激情況。

2 試驗結果

2.1 免疫后各毒株抗體效長規律

免疫后各毒株抗體效長規律見表1。

表1 免疫后各毒株抗體效長規律

結果表明，蛋雞開產前選擇H5+H7亞型三價滅活疫苗進行3次免疫，首免15日齡，二免45日齡，三免75日齡，選擇在不同日齡對雞群進行抗體監測，首次免疫14 d后抗體滴度＞5 log2，59日齡也就是二免14日齡后，H5N1 Re-11、H5N1 Re-12、H7N9Re-2抗體滴度均＞8 log2，對雞群有很好的保護作用。

2.2 接種疫苗后雞體重變化

接種疫苗后雞體重變化見表2。

結果表明，免疫組與對照組的體重基本保持一致，差異不顯著（P＞0.05），疫苗的接種并不影響雞的體重的增長。注射疫苗后疫苗接種組和沒有接種疫苗組雞群的精神狀態無顯著差異（P＞0.05），免疫雞精神食欲良好，無不良反映，證明本疫苗是安全的。

2.3 應激實驗

應激實驗見表3。

結果表明，不同日齡的雞群接種不同劑量的重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗（H5 N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2），從完全吸收時間、精神狀態、采食量方面來評價接種疫苗后對雞群應激狀況，接種最大劑量1 mL時，疫苗對雞群應激影響是一過性的，2～3日齡可以恢復。由于是臨床上飼養的雞群，飼養管理、溫度、濕度等都會對雞群造成一定的影響，疫苗回溫也會對應激產生影響，建議疫苗回溫時間1.5～2 h。

表2 接種疫苗后雞體重變化

表3 應激實驗

3 討論

3.1 抗體滴度消長規律

對于蛋雞，本試驗選擇15、45、75日齡進行3次免疫，首次免疫后14日齡H5 Re-11、H5 Re-12、H7Re-2抗體滴度＞4log2，對雞群有保護力，二次免疫后14日齡H5 Re-11、H5 Re-12、H7Re-2抗體滴度＞8log2，說明對蛋雞有較好的保護力。

2019年高致病性禽流感發生率較高，死亡率低，這反而給養殖戶帶來的損失要大一些，原因是由于死亡率低，養殖戶對高致病性禽流感重視程度不夠[1]。由于時間和條件所限，本試驗沒有在開產前進行第4次免疫，實際在現地預防禽流感時，建議開產前免疫4次高致病性禽流感疫苗，這樣對開產前和產蛋高峰期的蛋雞都會有較好的保護力，來預防高致病性禽流感的發生。

3.2 疫苗安全性

養殖戶往往對禽流感疫苗的應激反應有所顧忌，尤其是在蛋雞開產后擔心加強接種高致病性禽流感疫苗會影響蛋雞的產蛋率[2]。本試驗通過安全性試驗和疫苗接種的應激反應觀察，沒有明顯異常，說明重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗對雞群沒有應激作用，安全性高。