淺析生鮮乳中黃曲霉毒素M1

左英芳

（焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心，河南焦作 454003）

1 藥物概述

黃曲霉毒素是黃曲霉菌屬黃曲霉菌、寄生曲霉菌產(chǎn)生的有毒次級代謝物，黃曲霉毒素不僅是一種化合物，也是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物總稱。黃曲霉毒素M1（AFM1）主要由黃曲霉毒素B1（AFB1）代謝產(chǎn)生，其基本結(jié)構(gòu)為一個(gè)二呋喃環(huán)的氧雜萘鄰?fù)?/p>

2 黃曲霉毒素M1理化性質(zhì)

AFM1不溶于正己烷、石油醚和乙醚，易溶于甲醇、和氯仿等。耐熱性強(qiáng)，280℃時(shí)才能發(fā)生裂解，因此一般烹調(diào)加工溫度下破壞很少，但某些化學(xué)試劑如 5%次氯酸鈉和丙酮可使其完全分解，因此在實(shí)驗(yàn)室中用此方法對接觸過的器皿作解毒處理。AFM1在紫外線下不穩(wěn)定，容易分解，故也可采取紫外線照射法使之分解。

AFM1一般在中性溶液中較穩(wěn)定，但易被堿性溶液及強(qiáng)氧化劑分解，在pH9-10的強(qiáng)堿溶液中分解迅速為無毒的鹽，但此反應(yīng)可逆，即在酸性條件下又能恢復(fù)原來結(jié)構(gòu)。其純品為無色結(jié)晶體。

3 黃曲霉毒素M1的主要來源

在黃曲霉毒素的幾種亞型（B1、B2、G1、G2、M1、M2）中，黃曲霉毒素B1（AFB1）最為多見，毒性也最強(qiáng)。哺乳類動(dòng)物通過攝入被AFB1和AFB2污染的飼料或食品后，在體內(nèi)約有l(wèi)%～6%的AFB1通過羥基化作用，轉(zhuǎn)化成AFM1和黃曲霉毒素M2（AFM2），一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動(dòng)物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中AFM1與AFM2主要存在于牛奶中。由于牛乳及其制品是人類、特別是嬰幼兒的主要食品，所以被AFM1污染的牛乳及其制品危害性更大。

4 黃曲霉毒素M1的主要危害

黃曲霉毒素的基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素，AF分子中的二呋喃環(huán)是產(chǎn)生毒性的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，而香豆素可能與致癌作用有關(guān)。

1993年，黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)，其毒性相當(dāng)于砒霜的68倍，氰化鉀的10倍。黃曲霉毒素具有極強(qiáng)的強(qiáng)致突變性、致畸形、致癌性“三致”作用，長期攝入可誘發(fā)肝癌，是目前公認(rèn)的最強(qiáng)致癌性物質(zhì)。故各國對乳及乳制品中的AFM1做了及其嚴(yán)格的限定。目前，世界多數(shù)采取兩種限量，即0.05μg/kg和0.5μg/kg。中國與美國、日本一致，均為0.5μg/kg，歐盟成員國相對嚴(yán)格為0.05μg/kg，而歐盟對嬰幼兒配方食品及配方牛奶則限量0.025μg/kg。

5 黃曲霉毒素M1的檢測方法

生鮮乳中對AFM1的檢測主要是通過膠體金試紙條快速檢測法、酶聯(lián)免疫法、薄層色譜分析法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、和液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）對其進(jìn)行定性定量分析。

5.1 膠體金試紙條快速檢測法

應(yīng)用競爭法膠體金免疫層析技術(shù)，用于乳及乳制品的AFM1快速篩查。樣液中的AFM1與金標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，若AFM1在樣液中濃度低于設(shè)定檢測限，未結(jié)合的金標(biāo)抗體流到T區(qū)時(shí)，形成一條可見的T線。若AFM1濃度高于設(shè)定檢測限，金標(biāo)抗體即與AFM1形成復(fù)合物，不再與T線處抗原結(jié)合，T線不可見。C線為質(zhì)控線，出現(xiàn)則說明該卡有效。此方法方便快捷，成本低，適用于大批量篩查。缺點(diǎn)為：本法僅可做為初步篩查結(jié)果參考，且有假陽性存在，不可用做定性定量手段。

5.2 酶聯(lián)免疫吸附法

原理是樣品中的AFM1與酶標(biāo)板上固定的抗原特異性競爭抗體，在固相載體表面形成抗原抗體復(fù)合物。洗除多余抗體成分，加入酶標(biāo)抗與抗體反應(yīng)，通過酶催化顯色劑顯色，根據(jù)顯色的深來判斷樣品中AFM1的含量。ELISA具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)、成本低等特點(diǎn)，適合于AFM1大批樣品的檢測篩選，可用于現(xiàn)場檢測。缺點(diǎn)為：由于免疫酶的活性不穩(wěn)定，易受操作條件的干擾，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5.3 薄層色譜分析法

該法是通過肉眼進(jìn)行定性和半定量的檢測方法。其原理是經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，AFM1在一定波長的紫外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，依據(jù)在薄層板上的最低檢出量來測定含量。其具有成本低、雜質(zhì)干擾小、易普及等優(yōu)點(diǎn)，曾廣泛應(yīng)用于基層篩查。但操作過程中，檢驗(yàn)員接觸大量的標(biāo)準(zhǔn)品及有毒有害試劑，對實(shí)驗(yàn)人員的危害性極大，且靈敏度較低。

5.4 高效液相色譜法

將試樣經(jīng)過離心、脫脂、過濾后，經(jīng)免疫親和柱層析凈化除去其他雜質(zhì)，再洗脫下AFM1，配以熒光檢測器的HPLC法已經(jīng)成為檢測AFM1的主要測定方法，此法具有特異性高、靈敏度強(qiáng)、定量準(zhǔn)確同時(shí)分離多種黃曲霉素的優(yōu)點(diǎn)，而且不受樣品的沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性和分子量等的限制。缺點(diǎn)為：前處理復(fù)雜，需要專業(yè)的技術(shù)人員，費(fèi)用高。

5.5 液相色譜-質(zhì)譜法

通過將試樣分子裂解為分子離子和母離子等各種離子碎片的集合，按質(zhì)荷比（m/z）大小進(jìn)行分離的分析方法。該法具有更高的選擇性，擁有分子標(biāo)識和同位素內(nèi)標(biāo)等優(yōu)勢，比液相檢測器靈敏度更高，選擇性更強(qiáng)，提供了可靠、精確的相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息，節(jié)省了樣品準(zhǔn)備時(shí)間和分析時(shí)間。缺點(diǎn)同液相法。