吡唑醚菌酯在水稻中的最終殘留研究

韓 凱，徐煒楓，刁春友

（江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心，南京 210036）

吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，由德國巴斯夫公司發(fā)現(xiàn)，2002年在歐洲首先上市。2016年其全球銷售額為7.65億美元。吡唑醚菌酯為線粒體呼吸抑制劑，通過抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長而致效。其具有保護、治療、鏟除、葉片滲透作用，在小麥、大麥、大豆、蔬菜等眾多作物上均有廣泛應(yīng)用[1-2]。我國尚未制定吡唑醚菌酯在水稻和小麥上的最大殘留限量（MRL），其在CAC小麥上的MRL值為0.2 mg/kg。

目前，文獻報道的吡唑醚菌酯殘留檢測方法主要有氣相色譜法[3-4]、高效液相色譜法（HPLC）[5]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[6]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）[6-7]等，涉及的作物有谷物[3]、咖啡[4]、蔬菜[3，7-8]、水果[5-6，9]等。吡唑醚菌酯在水稻中的殘留測定方法鮮有報道，本試驗采用乙腈提取水稻中吡唑醚菌酯，經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測，考察吡唑醚菌酯在水稻中的最終殘留量。

1 材料與方法

1.1 田間試驗

試驗農(nóng)藥為25%稻瘟靈·吡唑醚菌酯水乳劑（21%稻瘟靈＋4%吡唑醚菌酯），由江蘇龍燈化學(xué)有限公司提供。

按《農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》要求設(shè)計試驗。2015—2016年分別在江蘇省句容市華陽鎮(zhèn)、湖南省寧鄉(xiāng)縣歷經(jīng)鋪鄉(xiāng)、黑龍江省肇東市五站鎮(zhèn)進行田間試驗。試驗設(shè)低有效成分用量處理（300 g/hm2）、高有效成分用量處理（450 g/hm2）、空白對照。小區(qū)面積30 m2，每處理重復(fù)3次，隨機區(qū)組排列，小區(qū)間設(shè)保護帶。施藥2～3次，施藥間隔10 d。末次施藥后5、15、25 d采集水稻樣品進行殘留測定。供試水稻品種為秀水123（江蘇）、湘晚秈17號（湖南）、吉粳301（黑龍江）。

1.2 檢測方法

1.2.1 儀器和試劑

Agilent 1200-6460液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國安捷倫科技（中國）有限公司；PL602E電子天平，梅特勒-托利多公司；3-30K高速冷凍離心機，德國Sigma公司；T-25高速勻漿機，德國IKA公司。

甲酸（色譜純），德國Sigma公司；乙腈（色譜純），德國默克公司；氯化鈉、乙酸銨（分析純），國藥集團化學(xué)試劑有限公司；吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000mg/L），農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所。

1.2.2 樣品前處理

稱取5.0 g粉碎糙米于50 mL聚丙烯離心管中，加入5 mL去離子水浸泡2 h。先加入10 mL乙腈，勻漿機高速勻漿，再加入6 g氯化鈉劇烈振蕩，冷凍離心機7 000 r/min離心3 min，移取上清液過0.22 μm有機濾膜，待測。

稱取10.0 g粉碎稻殼于250 mL具塞三角瓶中，加入10 mL去離子水浸泡30 min，再加入20 mL乙腈浸泡過夜。超聲提取30 min，過濾，濾液轉(zhuǎn)入裝有6 g氯化鈉的離心管中，劇烈振蕩，冷凍離心機7000r/min離心3 min，移取上清液過0.22 μm有機濾膜，待測。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent poroshell 120 C18柱（50 mm×2.1mm，2.7 μm）；流動相：乙腈＋水（0.01%甲酸、5 mmol/L乙酸銨）溶液；進樣量：1.0 μL；流速：0.30 mL/min。

梯度洗脫：0～0.5min，V（乙腈）∶V（水）=25∶75；2.0～3.0min，V（乙腈）∶V（水）=75∶25；4.0～5.0min，V（乙腈）∶V（水）=25∶75。

1.2.4 質(zhì)譜條件

正離子電離（ESI+），采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測；毛細(xì)管溫度：325℃；氣體流量：10 L/min；電噴霧壓力：241 kPa；鞘氣溫度：350℃；鞘氣流量：12 L/min；毛細(xì)管電壓：4 kV。MRM條件見表1。

表1 吡唑醚菌酯的MRM條件

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性關(guān)系

吸取0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于25 mL容量瓶，用乙腈定容，配制質(zhì)量濃度為32 mg/L標(biāo)樣儲備液。使用時用乙腈稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.50 mg/L、2.00 mg/L的標(biāo)樣工作溶液。以進樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

在質(zhì)量濃度為0.01～2.00 mg/L時，吡唑醚菌酯的質(zhì)量濃度與對應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為y=55 130 x＋2 952，R2=0.999。

2.2 方法的準(zhǔn)確度、精密度和檢出限

分別向糙米和稻殼樣品中添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01、1.00、2.00 mg/kg，進行方法準(zhǔn)確度和精密度測定，結(jié)果見表2。吡唑醚菌酯在糙米、稻殼中的平均回收率為90.3%～112.8%，變異系數(shù)為5.9%～9.6%。方法的最低檢測質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.010 mg/kg。

表2 添加回收率與精密度試驗結(jié)果（n=5）

2.3 吡唑醚菌酯在水稻中的最終殘留測定結(jié)果

吡唑醚菌酯在糙米和稻殼中的最終殘留量見表3。

最后1次施藥后5、15、25 d，糙米中吡唑醚菌酯的殘留量分別為未檢出至0.110 mg/kg、未檢出至0.039 mg/kg、未檢出至0.028 mg/kg；稻殼中吡唑醚菌酯的殘留量分別為0.100～0.830 mg/kg、0.050～0.240 mg/kg、未檢出至0.070 mg/kg。且隨著采收時間的延長，糙米和稻殼中吡唑醚菌酯的殘留量逐漸降低。參照CAC制定的小麥中吡唑醚菌酯最大殘留限量0.2 mg/kg，當(dāng)安全間隔期為5 d時，糙米中吡唑醚菌酯的殘留量均低于0.2 mg/kg。

表3 糙米和稻殼中吡唑醚菌酯的最終殘留量

3 結(jié)論

本文建立了吡唑醚菌酯在糙米和稻殼中的殘留檢測方法。該方法準(zhǔn)確度、精密度高，符合農(nóng)藥殘留檢測要求。

根據(jù)試驗結(jié)果，糙米中吡唑醚菌酯的殘留最大值為0.110 mg/kg，稻殼中吡唑醚菌酯的殘留最大值為0.830 mg/kg，糙米中吡唑醚菌酯的殘留量低于稻殼中的殘留量。本試驗確定的殘留中值、殘留量最大值為長期膳食風(fēng)險、急性膳食風(fēng)險評估數(shù)據(jù)的完善，為我國制定吡唑醚菌酯最大殘留限量提供了必要的數(shù)據(jù)支持。同時，目前尚未見稻殼飼料中吡唑醚菌酯的最大殘留限量，稻殼中吡唑醚菌酯殘留數(shù)據(jù)也為制定稻殼飼料中吡唑醚菌酯的最大殘留限量提供了數(shù)據(jù)支持。