非洲豬瘟病毒檢測方法進展

李 芹

（云南省曲靖市動物疫病預防控制中心，云南 曲靖 655000）

非洲豬瘟隱患已經存在多年，由于未對我國造成影響，也一直被人們忽視。這是一種由非洲豬瘟病毒引起的高傳染性的病毒，它起源于非洲，之后蔓延到南美洲、歐洲等地。直至去年8月份傳入中國，這才使得國人高度關注。由于目前尚未研發出有效的疫苗預防非洲豬瘟，因此只能通過撲殺感染非洲豬瘟的豬的方式來防控。這也對國內養豬業造成了巨大損失，這也是豬肉價格上漲的原因之一。所以非洲豬瘟病毒檢測方法的進展迫在眉睫，許多專家也是研究出多種方法，但都以失敗告終，故加強該病預防措施的工作具有重大的現實意義。

1 最古老的檢測法—紅細胞吸附法

早在1960年，Malmquist在觀察病毒感染豬白細胞的培養物后出現了血紅細胞吸附的現象，將其應用于 ASFV上，發現了紅細胞吸附法也就是所謂的HAD法。但是由于當時科技水平的落后，得不到發展。因此過了許多年才被廣泛認可作為ASFV的鑒定方法。ASFV的分離株大部分具有 HAD的活性，但極少數的毒株沒有此活性，稱為NHV（non- haemadsorbing virus）毒株，這類毒株大多數不攜帶病毒。因此在檢測時就存在著許多問題，且紅細胞吸附法的檢測時間一般為3～10d，所以慢慢地被接下來的PCR法所代替。

2 非洲豬瘟PCR方法檢測的進展

PCR是指聚合酶鏈式反應，這種方法在檢測動物是否感染ASFV中起到了重要作用。檢測方法是將病體中病毒 DNA片段通過聚合酶鏈式反應（PCR）進行擴大，直到滿足檢測需求的量，然后進行檢測，這種方法提到了檢測效率和檢測質量。PCR法的有點在于它檢測過程比較簡單，檢測方法也快速并靈敏，這比通常的 ELISA 和 FAT檢測技術相比有了不少的提高；但是它也有致命的缺點，他在檢測時及其容易產生交叉污染的現象，導致檢測失靈，并且其儀器價格也十分昂貴。但是目前PCR檢測技術仍然檢測人員的第一選擇，雖然存在漏洞，但是它可以提供基本的信息，完成基本檢測。

3 熒光抗體實驗法

相比于PCR方法，熒光抗體法即FAT法的出現更加早，早在1969 年，Bool 等人就率先將FAT法應用于ASFV的檢測上，該試驗方法不僅僅用于檢測ASFV，其最為廣發的應用是對病毒抗原的檢測。FAT方法主要有兩個方面的運用，第一，可用于白細胞培養物進行抗原檢測；第二，可將感染豬瘟的淋巴結、腎、肺等組織冰凍后切片，然后進行觀察，若細胞漿熒光則為病毒陽性。在急性傳染性疾病的檢測中，FAT的有點十分明顯，高效、敏感性高、價格低廉。但是對于一些慢性疾病，它所檢測的顯著性、敏感性都大幅度降低，可能是由于抗體與靶抗體形成了復合物，阻斷了與熒光抗體的結合。所以由于非洲豬瘟是急性傳染病，這種方法依舊可以快速高效地使用，未來它的發展也應該朝著慢性、亞急性疾病的而方向發展。

4 探針雜交技術的出現

基于PCR方法的廣泛運用，許多專家將探針雜交技術與PCR法廣泛聯系，出現了一種新型方法。該法將樣品在凝膠上分離，然后通過“影印”的方式轉移到固相支持物上，然后在與帶有放射性標記或其他標記的探針進行雜交，通過放射自顯影或顯色反應，判斷樣品中是否有探針同源的分子。這畫中方法可以有效地排除PCR檢測過程中非特異性結果，操作更加簡單，檢測也更加迅速。但是它存在的問題是建立難度較高，要求人員的操作水平也比較刻苦，過程也十分繁瑣。不過顯然這是PCR方法后有一個改進得不錯的方法，這種改進鉆研的方法值得國內專家學習，早日研制出非洲豬瘟病毒的疫苗。

5 結語

隨著世界經濟的快速增長，貿易全球化也發展十分迅速。一些具有高傳染性的病毒的跨國傳染也接連發生，是國內的養殖業遭到了沉重的打擊，嚴重阻礙了我國養殖業經濟的發展，也對我國出口貿易造成了十分嚴重的影響。非洲豬瘟在去年在中國被發現，對于國內豬的威脅也越來越大，由于此病毒未研發出疫苗，我國專家必須高度警惕，建立快速的ASFV的檢測室，減少病毒的擴散。目前國內檢測ASFV的方法雖然很多，但是未能從根源上防止病毒的產生，因此對為感染ASFV病毒的動物應采取有效的預防措施。伴隨著免疫學和生物技術的發展，ASFV疫苗的研發指日可待，非洲豬瘟病毒的防控也將得到進展。