食品中喹諾酮類抗生素多殘留同時(shí)檢測(cè)研究

李嘉慧，劉鳳銀，王宇，黃松，彭心愉，穆洪濤＊

（1.廣東第二師范學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，廣東廣州 510303；2.廣州市食品檢驗(yàn)所，廣東廣州 511400）

喹諾酮類抗生素是一種廣譜性的抗菌劑，能夠通過抑制細(xì)菌的DNA復(fù)制來(lái)快速殺滅細(xì)菌以及一些厭氧菌、支原體、衣原體等[1]。喹諾酮類抗生素具有抗菌效果好、安全性高和價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛運(yùn)用到牲畜的飼養(yǎng)中。

由于喹諾酮類抗生素的濫用，藥物殘留的問題也愈發(fā)嚴(yán)重。喹諾酮藥物不能輕易被人體和動(dòng)物體代謝和吸收，對(duì)人體健康產(chǎn)生不良影響。2005年以來(lái)，美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）已禁止使用恩諾沙星醫(yī)治家禽細(xì)菌感染，因?yàn)榭茖W(xué)證據(jù)表明，用抗菌劑治療的雞和火雞中出現(xiàn)了彎曲桿菌抗性物種[2]，對(duì)生態(tài)平衡造成了一定的破壞。

據(jù)調(diào)查，市場(chǎng)上食品中喹諾酮類殘留現(xiàn)象仍然嚴(yán)重。李彥文等[3]發(fā)現(xiàn)，廣州市面上約96%的蔬菜含有不同水平的氟喹諾酮?dú)埩簦瑵舛葹?.0～1680.1 μg/kg。因此，開展食品中喹諾酮類抗生素準(zhǔn)確、快速、靈敏的多殘留檢測(cè)方法的研究勢(shì)在必行。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜（HPLC）是一種靈敏度高、應(yīng)用范圍廣的儀器分析方法，常用于食品中的喹諾酮類藥物的多殘留檢測(cè)，近幾年也是研究多殘留組分同時(shí)分析的熱點(diǎn)方法[4-5]。劉暢[6]以甲醇和0.1%甲酸水溶液-乙腈為流動(dòng)相，利用正離子電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)器，建立了蔬菜中14種喹諾酮藥物的多殘留檢測(cè)方法，定量限為 0.14～ 0.52 μg/kg。ZhangZ等[7]選用 0.1% 甲酸水溶液和0.1%甲醇乙腈溶液作為流動(dòng)相，用色譜檢測(cè)器對(duì)動(dòng)物組織中四環(huán)素、磺胺和喹諾酮3種不同類型抗生素中38種化合物進(jìn)行有效鑒定和量化，檢出限可達(dá)0.2～4 μg/kg。

2 免疫分析法

2.1 酶聯(lián)免疫分析法

酶聯(lián)免疫法是一種基于抗原抗體和酶催化反應(yīng)而建立的液體中微量物質(zhì)的定量檢測(cè)方法，具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、快速、樣品前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，成為食品殘留檢測(cè)中的熱門方法[8-9]。樊曉博等[10]用恩諾沙星制備恩諾沙星抗體，實(shí)現(xiàn)了多種畜禽產(chǎn)品中12種氟喹諾酮藥物的多殘留統(tǒng)率檢測(cè)，方法的IC50為 2.04 μg/L，線性范圍 0.3 ～ 1.5 μg/L。ChenJ等[11]建立了間接競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫分析法，同時(shí)檢測(cè)食用動(dòng)物可食用組織中24種喹諾酮類藥物，檢測(cè)限范圍為0.45～15.16 ng/mL，低于最大殘留水平。

2.2 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法兼具了酶聯(lián)免疫法高靈敏度和穩(wěn)定性的特點(diǎn)，還具備操作步驟簡(jiǎn)單、耗時(shí)短的優(yōu)點(diǎn)，因此在現(xiàn)場(chǎng)大批量的穩(wěn)定快速檢測(cè)中具有廣泛的應(yīng)用[12-13]。宗婧婧等[14]利用喹諾酮類單克隆抗體制備金標(biāo)抗體，對(duì)水產(chǎn)品中15種喹諾酮類藥物的檢出限在 0.3 ～ 5 μg/kg。

2.3 發(fā)光免疫分析法

發(fā)光免疫分析法可分為生物發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法。生物發(fā)光法僅需依靠生物自身的酶促化學(xué)反應(yīng)，不需要額外引用外光源，因此在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的成本低，在檢測(cè)領(lǐng)域具有一定的作用[15]。于雪芝[16]構(gòu)建了SAs-scFv-Fluc融合蛋白及制備了諾氟沙星抗體，IC50 值為 0.051 μg/L，檢出限為 0.232 μg/L，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中19種氟喹諾酮類藥物的多殘留檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光法是利用化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生的光輻射效應(yīng)的一種檢測(cè)手段，在喹諾酮類藥物的殘留檢測(cè)中具有較廣泛的應(yīng)用[17-18]。Tao X等[19]建立檢測(cè)魚和蝦基質(zhì)中的20種喹諾酮類抗生素的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，其中在魚和蝦中的曲氟沙星、諾氟沙星的檢出限為0.2μg/kg，鹽酸環(huán)丙沙星和恩諾沙星的檢出限均低于0.2μg/kg。

2.4 熒光偏振免疫分析法

熒光偏振是指熒光分子在偏振光激發(fā)后發(fā)射出不對(duì)稱光的一種現(xiàn)象，具有簡(jiǎn)單、可靠、快速和高效的特點(diǎn)，目前已被廣泛應(yīng)用于各種分析、監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域中。MiT等[20]合成了5種喹諾酮類抗生素的熒光標(biāo)記物以及制備5種喹諾酮類抗生素的抗體，在牛奶、雞肉中多種喹諾酮類抗生素的多殘留檢測(cè)中的檢出限在0.46～3.52 ng/mL，能滿足多殘留檢測(cè)的要求。

2.5 可視化蛋白芯片法

蛋白芯片法是一種高通量、快速的免疫檢測(cè)方法，具有樣品用量少、可同時(shí)進(jìn)行多指標(biāo)分析、檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)，在食品中獸藥多殘留的快速檢測(cè)中有很好的發(fā)展前景。鐘文英等[21]利用間接競(jìng)爭(zhēng)法原理，建立了可視化蛋白芯片分析技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)牛乳中磺胺類和喹諾酮類抗生素多殘留的同時(shí)檢測(cè)，結(jié)果說(shuō)明磺胺嘧啶和恩諾沙星線性范圍分別為0.3～7.2 ng/mL和 0.4 ～ 18 ng/mL。

3 微生物抑制法

微生物抑制法是一種最早的抗生素殘留檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)便、儀器投入少、檢測(cè)成本低、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。沈翠香[22]研究選擇了對(duì)3種喹諾酮類抗生素具有特異敏感性的微生物E.coli ATCC8739進(jìn)行培養(yǎng)，利用紅四氮唑顯色原理檢測(cè)恩諾沙星的殘留，結(jié)果顯示，其對(duì)環(huán)丙沙星的檢測(cè)下限由0.04 μg/mL降到 0.015 μg/mL，恩諾沙星由 0.05 μg/mL降低到0.015 μg/mL。但由于微生物抑制法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象，無(wú)法準(zhǔn)確定性定量，因此只適于對(duì)大批量樣品進(jìn)行粗篩。

4 總結(jié)與展望

色譜法具有靈敏度高、重復(fù)性強(qiáng)、準(zhǔn)確性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)檢測(cè)樣品的處理要求較高，對(duì)儀器依賴強(qiáng)，不適于大批樣品的快速篩查；免疫法具有操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、快速靈敏等特點(diǎn)，且樣品前處理方法簡(jiǎn)單，但對(duì)試劑的選擇性較高，多組分同時(shí)檢測(cè)的工作較難進(jìn)行，當(dāng)存在與被分析目標(biāo)物結(jié)構(gòu)類似的化合物時(shí)，會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)；微生物法具有成本低廉、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，但靈敏度低，定性定量準(zhǔn)確度差，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)效率低等，所以在檢測(cè)時(shí)較少使用。

目前，對(duì)多種喹諾酮類抗生素在食品中的殘留的檢測(cè)研究越來(lái)越多，例如簡(jiǎn)化樣品處理步驟、減少有害有機(jī)溶劑的使用、提高靈敏度和準(zhǔn)確性、降低檢測(cè)成本等，都是研究的熱點(diǎn)，減少實(shí)驗(yàn)操作的時(shí)間、重復(fù)性好、滿足檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)大規(guī)模的初篩，是檢測(cè)的發(fā)展需求。