鹽酸嗎啡注射液安全性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)*

魏文芝，孫繼超，朱從會(huì)，張敏娟，王天學(xué)

(1.青海省藥品檢驗(yàn)檢測院，西寧 810016；2.青海省中藏藥現(xiàn)代化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西寧 810016；3.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測中心，北京 100123；4.青海省食品檢驗(yàn)檢測院，西寧 810000)

鹽酸嗎啡屬于阿片類強(qiáng)效鎮(zhèn)痛藥，適用于其他鎮(zhèn)痛藥無效的急性銳痛，如嚴(yán)重創(chuàng)傷、戰(zhàn)傷、燒傷及晚期癌癥患者的三階梯止痛等，是術(shù)后手術(shù)刺激痛、癌痛等中、重度疼痛鎮(zhèn)痛藥首選[1]，鹽酸嗎啡注射液廣泛應(yīng)用于臨床[2-5]，其安全性研究筆者未見報(bào)道。鹽酸嗎啡有輕微的阿托品樣作用，可引起心搏增快，逾量中毒時(shí)可出現(xiàn)呼吸減慢、淺表而不規(guī)則，發(fā)紺和嗜睡現(xiàn)象[6]。筆者參照《化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》《化學(xué)藥物急性毒性實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》及相關(guān)文獻(xiàn)[7-11]，對(duì)鹽酸嗎啡注射液局部刺激性、全身過敏性、體外溶血性進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康、雄性、成年家兔，體質(zhì)量2.0～2.5 kg；健康、雄性、成年豚鼠，體質(zhì)量300～400 g；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購買自北京金牧陽實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2015-0005)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境溫度為18～25 ℃，相對(duì)濕度為40%～70%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(京)2011-0016。

1.2試藥 鹽酸嗎啡注射液(東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，批號(hào)：150302-1，150701-1，150609-2，規(guī)格1 mL：10 mg)，卵白蛋白(Sigma公司，批號(hào)：SLBL7392V)，0.9%氯化鈉溶液(晨欣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1509191703)，10%甲醛溶液(北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司)。

1.3儀器 電子稱(廣東香山衡器集團(tuán)股份有限公司)，賽多利斯BT25S電子天平(德國Sartorius公司，感量：0.1 mg)，HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市華龍實(shí)驗(yàn)儀器廠)，TDC-40B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，奧林巴斯CX31生物顯微鏡(日本)。

1.4血管刺激性實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[12-13]。取家兔4只，每只家兔耳緣靜脈給藥，采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法，左側(cè)給藥，右側(cè)作為對(duì)照。設(shè)置受試物單一劑量組和陰性對(duì)照組，單次給藥劑量為2.8 mg·kg-1，陰性對(duì)照組予溶媒(0.9%氯化鈉溶液)，給藥頻次為每天1次，連續(xù)給藥3 d。給藥后1，5 h，肉眼觀察并記錄給藥血管局部變化，之后每天繼續(xù)觀察動(dòng)物耳給藥部位局部及周圍血管情況，末次給藥48 h后將家兔處死，取組織做病理檢查，離注射點(diǎn)向心端1.0～2.5 cm取材(所取標(biāo)本應(yīng)包含有耳緣靜脈)，陰性對(duì)照組應(yīng)取相應(yīng)部位，用10%甲醛固定，制備石蠟切片并進(jìn)行局部組織病理學(xué)檢查。

1.5肌肉刺激性實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[12-13]。取家兔4只，采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。剪去兩側(cè)股四頭肌部位的兔毛，用碘酊和乙醇消毒后分別在右側(cè)股四頭肌注入鹽酸嗎啡注射液，左側(cè)股四頭肌注入等量0.9%氯化鈉注射液，作為對(duì)照，單次給藥劑量為2.8 mg·kg-1，給藥頻次為每天1次，連續(xù)給藥3 d，給藥后5 h肉眼觀察給藥部位局部反應(yīng)，如充血、紅腫等。末次給藥后48 h處死家兔，觀察注射部位肌肉組織反應(yīng)情況，量取充血范圍，評(píng)價(jià)并計(jì)算反應(yīng)級(jí)數(shù)。解剖并取出股四頭肌，沿肌纖維平行方向切開肌肉，暴露注藥部位，制備石蠟切片并進(jìn)行局部組織病理學(xué)檢查。

1.6全身過敏性實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[12-13]。取豚鼠18只，隨機(jī)分為3組，每組6只，設(shè)置鹽酸嗎啡注射液組、0.9%氯化鈉注射液組、卵白蛋白組。鹽酸嗎啡注射液組給予鹽酸嗎啡注射液，單次給藥劑量為2.8 mg·kg-1，卵白蛋白組給予卵白蛋白，單次給藥劑量為50 mg·kg-1。采用隔日腹腔注射給藥致敏，共給藥3次，分別于末次給藥后第14天，第21天采用一次性快速靜脈注射鹽酸嗎啡注射液進(jìn)行攻擊。致敏期間每日觀察動(dòng)物癥狀，首次給藥、末次致敏、激發(fā)前動(dòng)物稱定質(zhì)量。激發(fā)后即刻觀察動(dòng)物反應(yīng)至30 min，包括癥狀出現(xiàn)及消失時(shí)間，至少觀察3 h，進(jìn)行評(píng)價(jià)分級(jí)。

1.7溶血性實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[12-13]。健康成年家兔，心臟穿刺兔血15 mL，放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10 min，用玻璃棒攪動(dòng)血液，除去纖維蛋白原。加入10倍量0.9%氯化鈉溶液，搖勻，1500 r·min-1離心15 min，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌 2或3次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%混懸液，供實(shí)驗(yàn)用。取潔凈試管7只，進(jìn)行編號(hào)，1～5號(hào)管為供試品管，6號(hào)管為陰性對(duì)照管，7號(hào)管為陽性對(duì)照管。按要求加入2%紅細(xì)胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或純化水，配制各組反應(yīng)體系，混勻后，立即置(37.0±0.5)℃恒溫箱中進(jìn)行溫育，開始每隔15 min觀察1次，之后間隔1 h觀察1次，觀察至3 h，并于24 h后觀察溶血與紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。

2 結(jié)果

2.1血管刺激性實(shí)驗(yàn) 家兔單次耳緣給予供試品鹽酸嗎啡注射液后1，5 h時(shí)觀察，均發(fā)現(xiàn)動(dòng)物活動(dòng)量明顯減少，反應(yīng)靈敏性降低；肉眼觀察藥物注射部位及遠(yuǎn)離注射處血管及組織，均未見出血、淤血、水腫等異常改變，與注射0.9%氯化鈉注射液的對(duì)照側(cè)耳部血管相比無明顯差異，但受試組與陰性對(duì)照組均見靜脈注射部位血管輕微充血，疑與受試物藥效活性有關(guān)。末次給藥后48 h，處死家兔，取兩耳注射部位的血管及周圍組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，受試組與陰性對(duì)照組家兔耳緣靜脈注射部位近端、中端、遠(yuǎn)端處血管內(nèi)均未見血栓，血管內(nèi)皮細(xì)胞未見腫脹、增生、血管外周圍組織均未見出血。見圖1。

2.2肌肉刺激性實(shí)驗(yàn) 給藥后5，24，48 h，肉眼觀察家兔肌肉注射給藥部位局部反應(yīng)，均未見充血、紅腫等異常反應(yīng)。末次給藥后48 h處死家兔，解剖并取出股四頭肌，沿肌纖維平行方向切開肌肉，暴露注藥部位，制備石蠟切片并進(jìn)行局部組織病理學(xué)檢查，受試動(dòng)物未見充血、變性、混合性炎癥細(xì)胞浸潤。1只動(dòng)物(2號(hào))0.9%氯化鈉注射液對(duì)照左后肢股四頭肌局灶性混合性炎性細(xì)胞浸潤，其他3只動(dòng)物左肢肌肉未見類似改變。見圖2。

2.3全身過敏性實(shí)驗(yàn) 豚鼠全身過敏性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，致敏期間各組動(dòng)物飲食、活動(dòng)等狀態(tài)均無異常，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性體征，各組動(dòng)物體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分別給予各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3次致敏后第14天激發(fā)，30 min內(nèi)觀察動(dòng)物反應(yīng)癥狀，0.9%氯化鈉注射液組未見動(dòng)物出現(xiàn)躁動(dòng)、豎毛、搔鼻、流淚、痙攣等變態(tài)反應(yīng)；鹽酸嗎啡注射液組發(fā)現(xiàn)1只動(dòng)物出現(xiàn)躁動(dòng)癥狀(反應(yīng)級(jí)數(shù)為1)，10 min后恢復(fù)正常，其他均未見任何過敏反應(yīng)癥狀；卵白蛋白組激發(fā)后5 min內(nèi)出現(xiàn)明顯的呼吸困難、痙攣、直至死亡，劑量減半后仍然出現(xiàn)上述癥狀，并在10 min內(nèi)死亡。上述結(jié)果表明鹽酸嗎啡注射液不會(huì)引起豚鼠全身過敏性反應(yīng)。

2.4溶血性實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)條件下，鹽酸嗎啡注射液未引起明顯溶血或凝血現(xiàn)象，見表1。

3 討論

在本次肌肉刺激性實(shí)驗(yàn)中，0.9%氯化鈉注射液組1只動(dòng)物右肢股四頭肌發(fā)生的改變，因其發(fā)生率低，且見于對(duì)照股四頭肌，分析與注射操作不當(dāng)有關(guān)，與鹽酸嗎啡注射液本身特性無關(guān)。

A.近端；B.中端；C.遠(yuǎn)端

A.0.9%氯化鈉注射液組左后肢(4號(hào)鼠)；B.鹽酸嗎啡右后肢(4號(hào)鼠)；C.0.9%氯化鈉注射液組左后肢(2號(hào)鼠)

表1 鹽酸嗎啡注射液溶血性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

“+”為溶血，“-”為無溶血，“±+”表示有輕微溶血現(xiàn)象

“+” hemolysis ；“-” no hemolysis； “±+” mild hemolysis

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸嗎啡注射液對(duì)家兔血管和肌肉無明顯的刺激性，豚鼠全身過敏性實(shí)驗(yàn)未見變態(tài)反應(yīng)，對(duì)家兔紅細(xì)胞未見溶血或凝血作用，符合注射液安全用藥要求，為臨床安全用藥提供理論依據(jù)，因其屬于國家特殊管理的麻醉藥品，同時(shí)具有治療作用和依賴性，規(guī)范使用方可有效減少不良反應(yīng)的發(fā)生，達(dá)到治療目的。