豬繁殖與呼吸綜合征病毒診斷與防控

陳錦嬋 （福建省福州市長樂區動物疫病預防控制中心 350200）

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)又名藍耳病，是1987 年首先在美國發現的一種臨床癥狀為種豬繁殖障礙、仔豬斷奶后肺炎以及豬群生產性能和存活率下降為的豬傳染病，因不能確定病因當時被人們稱為“神秘病”。該病于1991年傳入歐洲，后被美國和荷蘭的研究者確定。

在國內，PRRS病于1995年在中國北京地區開始流行，呈地方性流行性，是危害養豬行業發展的主要傳染病之一。郭寶清在1996年首次從流產胎兒中分離出藍耳病毒毒株，命名為CH-1a[1]。隨后報道楊漢春分離的BJ-4與美國RespPRRSV和VR2332同源性高，推測為美國引入。我國經歷了3次大的疫情：1995-2004年以表現為母豬繁殖障礙的PRRS為主，2005-2014年以“三高”(高發病率、高死亡率和高熱)臨床特征的高致病性PRRS為主，2015-2018年多毒株并存，并且NADC30株流行日益波及著我國東北、東南、中東等十幾個省份，臨床癥狀變化多樣性，帶來的損失和危害不可估計。本文從PRRS的診斷方法和防控兩方面進行綜述，以期對今后的防控工作提供一定的指導。

1 PRRSV的病原學特征

（1）PRRS的病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。其為尼多病毒目，動脈炎病毒科，動脈炎病毒屬的成員。PRRSV是由雙層脂質膜包圍，是直徑為50～74nm的球形RNA病毒[2]，其基因組全長約為14.9～15.5kb。按照病毒基因組的序列差異以及抗原性，將其分為歐洲型和美洲型，目前我國流行的PRRSV主要為美洲型。（2）PRRSV對高溫和PH值敏感，在環境潮濕的環境有利于該病毒存活。PRRSV不耐熱，低溫中具有穩定感染性。此外，其可存活的PH范圍很小，在6～7.5pH范圍內保持高度穩定性。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷 PRRS主要特征為各階段豬都可發病，病豬表現為發熱、嗜睡、皮膚發紺、母豬表現繁殖障礙等現象；1月齡內小豬存在明顯的呼吸道癥狀，且伴瘦弱仔豬增多、有腹瀉、雙耳發紅等；一些小豬皮膚出現呈青紫色或藍色斑塊。同時存在其他病原感染的情況，病原包括鏈球菌，副豬嗜血桿菌，圓環病毒2型，沙門氏菌，巴氏桿菌，放線桿菌，流感等。

2.2 病毒的分離與鑒定 病毒的分離鑒定是病毒病最真實的一種診斷方法。PRRSV常從病豬血液、腸道、腹水、肺、糞便中分離。該法是通過采集病豬的病料培養于MA-104，CL-2621，Marc-145、PAMS等，使細胞引起細胞病變，再進行鑒別確診。其中，分離PRRSV歐洲株只能用PAM細胞。進行病毒分離，成本較高，操作也較繁瑣，分離周期較長，且因種種條件的限制，結果的判定也存在很大困難，不適于田間大量樣品的快速診斷。

2.3 酶聯免疫吸附試驗(ELISA法) 血清學方法是應用最廣泛的的病毒檢測方法。目前商品化的PRRS的ELISA檢測試劑盒用于包被的抗原有兩種，一種是純化的全病毒，另一種是如核衣殼蛋白(N蛋白)和膜蛋白(M、GP2-5)。不同毒株間核衣殼蛋白(N蛋白)保守性很高，N蛋白所建立的ELISA應用于豬群初篩與檢查。

2.4 免疫熒光技術 免疫熒光技術將熒光標記技術與免疫學方法相結合的一種方法。由于熒光顯微鏡可觀察到熒光素的熒光，從而能對抗原進行定位。該技術用于檢測單個發病樣品的特異性最好(99.5%)，在檢測感染2-3個月的特異性抗體有較高的可信度。此外，在高致病性豬藍耳病診斷中有相關的的應用。

2.5 免疫過氧化酶單層細胞試驗(IPMA) IPMA方法建立與1991年，在歐洲國家至今還是常用的檢測PRRSV的方法。IPMA可以在PRRSV感染后7～15d內檢測到抗體，檢測感染后2～3個月內的特異性抗體可信度較高。該法敏感性和特異性都較好，但是在結果判定存在主觀性影響，可能會造成結果無差別，使其不能被廣泛應用于臨床檢測。

2.6 分子生物學診斷 RT-PCR技術是一種非常實用的檢測方法，此法可直接對分離培養物、臨床樣品中的基因組進行檢測而不需要經過細胞培養等繁瑣的操作，從樣品中擴增出預期的片斷。仇華吉等人根據歐洲型與美基因型分離株的基因組序列設計的引物，用所構建的法初步證實我國分離株CH-1a株為北美洲型PRRSV[3]。同時，PCR方法在豬場PRRS群體監測上可以發揮重要作用，例如用于后備母豬的選留和持續性感染豬的確診以及豬群的凈化工作，并且在未來具有越來越廣泛的應用前景。

3 綜合防控

（1）PRRS目前該病尚無有效的治療措施，因此，做好生物安全、提高豬場管理、提高豬群抵抗力、加強免疫和檢疫成為防控該病的關鍵。科學的飼養管理是防止和控制疾病的發生和流行的前提條件，這樣才可以減少動物疫病的發生，保證豬群健康生長，有效提高豬群對疫病的抵抗力。（2）豬場需堅持自繁自養原則，制定科學免疫程序，定時對豬群開展健康評估和抗體檢測，對引種實行疫病監測，這對防控 PRRS起到重要的作用。（3）PRRS病不像豬瘟和口蹄疫一樣有可靠保護力的疫苗，所以，生物安全顯得尤為重要。若引種時須引入PRRS陰性的豬群，嚴格實行生物安全措施，切斷帶空氣、糞污、污染物、病豬只、精液、人員、物資、車輛等多個途徑入侵豬群。隔離舍離生產區至少120m，后備豬經過隔離60d以后經過免疫并且檢驗合格后方可入群。減少外來人員與車輛來訪，對外來人員嚴格按照制度沐浴、更衣、換鞋，并隔離一夜間后再進生產區。對外來訪車輛在場外嚴格清洗消毒干燥，干燥后24h再經過場內消毒區消毒才可進入。此外還要防止鼠類、貓犬、禽及鳥類與豬的直接接觸。（4）豬群在接觸PRRSV活毒后能產生保護性免疫抗體從而建立免疫力。建立群體免疫力的方法：一是本場的PRRSV野毒接觸，隔離馴化讓豬同期感染本場流行的PRRSV，在并群前產生針對性的免疫抗體保護力。二是接種PRRS疫苗。目前商品化PRRS疫苗主要是滅活苗和弱毒苗兩種，有研究表明，在誘導保護免疫方面，必須使用PRRS活病毒，如滅活PRRSV、亞單位蛋白等無活PRRSV的疫苗均不能誘導有效的免疫力。但是商品化PRRSV疫苗免疫的目的是只能降低PRRSV感染后的損失，不能阻止病毒感染。（5）育種的方法是一個防控PRRS的很好的思路，研究者發現，豬的CD163是PRRSV進入細胞的受體，將該基因敲除后，豬只對經典株和高致病株具有抵抗作用[4]。