保心寧膠囊質量標準提升研究

何玉濤1 林凡友* 卞常芝 秦承盟

1.仁和堂藥業有限公司，山東 臨沂 276600；2.翔宇藥業股份有限公司，山東 臨沂 276023

保心寧膠囊是由丹參、當歸和枳殼的干浸膏及三七4味藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛之功效。臨床上用于心絞痛、心律失常，改善冠心病癥狀等[1]。本產品執行標準為衛生部藥品標準中藥成方制劑第十一冊藥品標準，檢驗項目極其簡單，沒有含量檢測等定量控制指標。為了更好地控制該產品的質量，定量定性檢測有效成分，特對質量標準進行提高。研究表明丹參具有較強的藥理作用[2-3]，多以治療心血管系統疾病為主，主要成分為丹參酮IIA、丹參素等，為準確控制藥品質量，用甲醇提取有效成分，高效液相檢測，進行丹參含量測定。三七、枳殼分別增加薄層鑒別檢查項，定性檢測其成分，為控制產品質量提供更有效措施。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀，MS105DU型電子天平。丹參對照藥材(批號120923-201615)；枳殼對照藥材(批號120981-201605)；丹參酮IIA對照品(批號110766-201721)；人參皂苷Rg1對照品(批號110754-201324)；三七皂苷R1對照品(批號110745-201318)對照品均來源于中國食品藥品檢定研究院，甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。保心寧膠囊樣品來源于翔宇藥業股份有限公司提供，批號為150101、150302、150401、150402、150403、150902、160503、161001、161102、170302。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 三七 取本品內容物，研細，稱取1.0g，加甲醇15mL，超聲處理1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水(2∶4∶1∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘。供試品色譜圖中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。

2.1.2 丹參 取本品內容物，研細，稱取4.0g，加甲醇40 mL，加熱回流提取1 h，放冷，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取丹參酮IIA 1.0 g、丹參對照藥材1.0 g，同法制成對照品及對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(95∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，日光下檢視。供試品色譜圖中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。

2.1.3 枳殼 取本品內容物，研細，取約0.5 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取枳殼對照藥材0.2 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105 ℃加熱約5 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，而陰性供試品溶液在相應位置無斑點。見圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 thermo C18柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流動相為甲醇-乙腈-水=(325∶100∶125)，檢測波長270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫為室溫25 ℃，進樣量為10 μL。理論板數按丹參酮IIA峰計不低于3000。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 供試品溶液的制備 取本品內容物適量，研細，稱取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率140 W，頻率42kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2.2 對照品溶液的制備 取丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，加甲醇制成高濃度的對照品儲備液，取對照品儲備液適量再加甲醇稀釋至每1 mL約含15 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.2.2.3 陰性供試品溶液制備 取除丹參外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺丹參的陰性樣品溶液。

2.2.3 專屬性試驗 分別精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀中測定。結果表明理論板數按丹參酮IIA峰計算大于3000，丹參酮IIA和樣品中其它組分峰可基線分離，且與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5；陰性供試品溶液對主峰檢測無干擾，表明該方法專屬性良好。如圖2所示。

2.2.4 線性試驗 精密吸取丹參酮IIA對照品溶液儲備液適量，分別加甲醇稀釋成濃度為3.62 μg·mL-1、7.24 μg·mL-1、14.48 μg·mL-1、18.1 μg·mL-1、21.72 μg·mL-1、28.96 μg·mL-1的溶液，分別精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測定其峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：A=60.395C-20.83，r=0.9998。結果表明丹參酮IIA在3.62～28.96 μg·mL-1范圍內具有良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 取對照品溶液重復進樣6次，測定峰面積。結果表明：丹參酮IIA的峰面積的RSD為0.22%，表明該方法的系統精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 將150402批供試品溶液于室溫條件下放置12h，分別于0、1、2、4、6、8、12h精密量取10μL注入液相色譜儀測定。結果表明，在室溫條件下放置12h內，所得丹參酮IIA的峰面積的RSD為0.29 %，供試品溶液在12h內穩定性良好，保心寧膠囊的丹參酮IIA含量為0.22mg·粒-1。

2.2.7 回收率試驗 取同一批樣品(批號：150402，含量為0.22 mg·粒-1，每粒0.45g)，設計高、中、低3個不同濃度，高、中、低濃度丹參酮IIA對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5∶1、1∶1、0.5∶1，各分別制備3份供試品溶液進行測定。結果見表1，丹參酮IIA的平均回收率為98.81%，RSD為2.55%。

表1 回收率測定結果 (n=9)

2.2.8 耐用性試驗 分別使用正常色譜條件，不同柱溫(25±5)℃、不同波長(270±2)nm、不同流速(1.0±0.1) mL·min-1、不同流動相比例、不同色譜柱thermo C18 (250 mm × 4.6 mm，5 μm)、Agilent C18 (250 mm × 4.6 mm，5 μm)進行測試，分別計算對丹參酮IIA含量進行考察。結果所有丹參酮IIA含量的RSD為1.54%，含量耐用性較好。

2.2.9 樣品含量測定 測定10批保心寧膠囊，依次吸取對照品溶液和供試品溶液10 μL，注入高相液相色譜檢測丹參酮IIA含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

從以上10批保心寧膠囊樣品的含測結果可知，每粒樣品中丹參酮IIA的含量范圍為0.19～0.29 mg，考慮到丹參藥材產地、采收季節、工業大生產中有效成分轉移率、有效成分穩定性等因素對樣品中丹參酮IIA含量的影響，為保證產品在有效期內有效成分含量符合質量標準要求，暫定每粒樣品中含丹參以丹參酮IIA計不得少于0.12 mg。

3 討論

3.1 TLC鑒別 在保心寧膠囊原有標準中，鑒別項僅規定了最大吸收波長及一個顯色鑒別，不能準確控制產品有效成分，經查閱文獻及實驗研究，對保心寧膠囊中的三七、丹參和枳殼都增加了TLC鑒別項。分別查閱不同文獻[4-6]研究不同的展開劑對鑒別的影響，考察高溫高濕等條件對TLC方法進行耐用性驗證，制定最有效的鑒別方法，經考察陰性供試品對樣品的定性鑒別無干擾，該方法的專屬性較強。

3.2 含量檢測 丹參為方中君藥，主要成分為丹參酮IIA、丹參素等，因此將丹參中丹參酮IIA作為本品質量控制的指標成分。本文以甲醇為提取劑，采用高效液相色譜法測定丹參中丹參酮IIA含量。采用紫外分光光度計對丹參酮IIA溶液進行全波長掃描，結果在270nm波長處有最大吸收，故選擇270nm作為本品的測定波長。分別考察甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)、甲醇-水(75∶25)為流動相，結果以甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)為流動相時，丹參酮IIA峰形對稱，分離度大于1.5，理論板數大于3000，故確定甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)為流動相。該方法經方法學驗證，丹參酮IIA在3.62～28.96μg·mL-1范圍內線性關系良好，平均回收率為98.81%，耐用性RSD為1.54%，對10批樣品含量進行檢測結果穩定，說明該方法準確度高，耐用性強，能有效控制保心寧膠囊的質量。

綜上所述，采用高效液相色譜法對保心寧膠囊中丹參酮IIA含量進行檢測，專屬性好，準確度高；并對處方中的三七、丹參和枳殼都增加了鑒別項進行定性控制，能有效控制保心寧膠囊的質量，對保心寧膠囊質量標準的制定有一定提升作用。