玉米苞葉中蘆丁的含量測定

1.廣西壯族自治區人民醫院，廣西 南寧 530021；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001；3.廣西衛生職業技術學院，廣西 南寧 530023

玉米苞葉(corn husks)，是禾本科玉蜀黍屬植物玉米(Zea mays L)[1]果穗外部的包被部分。玉米苞葉含有大量的纖維素、一定量的淀粉、總黃酮及單糖多糖等活性成分。2017年我國玉米產量為21 589萬噸，其中玉米副產物產量達到百萬噸級，大多數的玉米苞葉被丟棄或當燃料使用，造成資源浪費與環境污染，近年來對玉米苞葉的研究表明其具有降低血脂[2-5]、抗動脈粥樣硬化[6-7]、抗氧化[8]、抑制α-糖苷酶活性而降糖等藥理作用[9]。玉米苞葉可食可藥，渴望能開發成為防治心血管疾病的保健品或藥品。

目前還沒有關于玉米苞葉的質量標準研究，為此，筆者建立HPLC法測定玉米苞葉中蘆丁含量的方法，為玉米苞葉質量標準提供依據，為玉米苞葉的進一步開發提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗藥材 玉米苞葉采自廣西各地，經廣西一心藥業馬利飛副主任藥師鑒定均為禾本科玉蜀黍屬植物玉米(Zeamays L)的苞葉，來源見表1。

表1 10批不同產地的玉米藥材

1.2 實驗儀器、試劑 超聲波清洗器(昆山市超聲儀有限公司)；電子天平分析天平(瑞士梅特勒AJ150)；恒溫水浴鍋B-220(上海亞榮生化儀器廠)；高效液相色譜儀(Alliance e2695,美國沃特世)；蘆丁(批號：0787-200102，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；甲醇(廣東省化學試劑工程技術研究開發中心，分析純)；超純水。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：phenomenon C18 (5μm，250 mm×4.6 mm)；檢測波長：280 nm；流動相：乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)；流速：0.8 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品適量,置50 mL容量瓶中, 用甲醇溶解, 并至刻度, 搖勻, 得0.11 mg/mL的蘆丁對照溶液，用0.22 μm微孔濾膜濾過，濾液備用。

1.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取經干燥粉碎后的玉米苞葉粉末約0.5g(過100目篩)，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL,稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足重量，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

2 方法學考察

2.1 線性關系考察 分別取上述標準溶液2、5、10、15、20 μL注入高效液相色譜儀, 按上述色譜條件測定其峰面積。以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。并計算回歸方程：y=17559x+3478.8,r2=0.9996。表明蘆丁在0.1947～2.0047 μg·mL-1內呈良好的線性關系。進樣量、峰面積見表2，標準曲線見圖1，對照品圖見圖2、樣品圖見圖3。

表2 蘆丁線性關系

圖1 標準曲線

圖2 蘆丁對照品

圖3 玉米苞葉樣品

2.2 精密度實驗 精密吸取蘆丁對照品溶液10 μL，按上述色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖。結果蘆丁峰面積的相對標準偏差RSD為0.11%，結果表明儀器精密度良好，見表3。

表3 蘆丁精密度實驗結果

2.3 重復性實驗 同一玉米6份,每份約0.5 g，精密稱定, 按1.3.3項下供試品溶液制備方法制備, 進樣量10 μL，RSD為1.01%(n=6)，結果表明樣品重復性良好，結果見表4。

2.4 穩定性實驗 取同一份供試品溶液, 在相同色譜條件下分別在 0、2、4、6、8、12 h進樣10 μL，采用HPLC測定蘆丁的峰面積。在12 h內蘆丁的RSD為1.41% (n=6)。結果表明供試品溶液在12 h內穩定，結果見表5。

2.5 加樣回收實驗 取同一批已測含量的供試品6份, 每份約0.5 g,精密稱定, 置具塞錐形瓶中, 分別精密加入適量的對照品，再加入甲醇20 mL,按上述供試品溶液的提取方法制備, 進樣10 μL依法測定, 計算平均加樣回收率為97.7%，RSD為1.46%(n=6), 結果表明該方法可靠, 準確度高，結果見表6。

表4 玉米苞葉的重復性試驗

表5 玉米穩定性實驗結果

表6 玉米苞葉加樣回收實驗結果

3 玉米苞葉中蘆丁的含量測定

分別稱取10個產地玉米苞葉藥材粗粉, 按1.3.3項下供試品制備方法制備,精密吸取供試品溶液10 μL進樣, 按1.3.1項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖,以外標一點法計算各樣品中蘆丁的百分含量，結果見表7，結果表明廣西10個產地玉米苞葉的蘆丁含量相差不大。

表7 蘆丁的含量測定

4 小結

4.1 色譜條件的選擇 本實驗分別考察了ThermoC18(5 μm，250 mm×4.6 mm)色譜柱，Agilent Wonda SilC18-WR(5 μm，250 mm×4.6 mm)色譜柱和phenomenon C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)色譜柱。結果顯示phenomenonC18(5 μm，250 mm×4.6 nm)色譜柱分離效果比較好。

本實驗分別考察了甲醇-水系統，甲醇-0.1%冰乙酸系統，乙腈-水系統，乙腈-0.1%冰醋酸系統，結果顯示乙腈-0.1%冰醋酸系統作為流動相條件下峰形整體比較好，經過幾種比例的考察，選用(20∶80)的比例最佳，所以選用乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)為流動相。

本實驗使用了二極管陣列檢測器(DAD檢測器)，對樣品進行190～400 nm全波長掃描，綜合考慮對照品的出峰情況及分離度，最終確定280 nm為本實驗的檢測波長。

本實驗分別考察了20 ℃、25 ℃和30 ℃ 3個不同柱溫的色譜圖，結果顯示25 ℃峰形整體比較好，所以選擇25 ℃為檢測溫度。

本實驗分別考察0.5 mL/min流速、0.8 mL/min和1.0 mL/min的色譜圖，結果顯示0.8 mL/min流速色譜圖分離效果最佳，所以選擇流速為0.8 mL/min。

4.2 結果 試驗建立HPLC測定玉米苞葉中蘆丁含量的方法，以甲醇為提取溶劑，超聲輔助提取玉米苞葉，提取液過0.22 μm微孔濾膜，利用HPLC測定。以色譜柱：phenomenonC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流速：0.8 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；流動相：乙腈-0.1%冰醋酸(20∶80)的條件分離較好。蘆丁進樣量在0.19470～2.0047 μg·mL-1(r=0.9996)范圍內與峰面積呈良好的線性關系，平均加樣回收率為97.7%，RSD為0.93%(n=6)。該方法簡便、快捷，重現性好，為玉米苞葉的質量評價提供依據。