農產品質量安全檢測機構農藥殘留檢測能力驗證的方法與技巧

◎ 帥 云，萬宏偉，王 娟，覃事玉

（湖南省常德市農產品質量安全檢驗檢測中心，湖南 常德 415000）

定期對檢驗檢測機構開展能力驗證是資質認定、機構考核等主管農產品檢驗檢測機構的特定要求[1]。量值溯源尚難實現或無法實現時，可以利用能力驗證來檢測測量結果的可信性[2]。

2014—2018年，常德市農產品質量安全檢驗檢測中心參加了湖南省農委組織的農產品質檢機構檢測能力驗證，均一次通過。通過對2018年能力驗證進行分析總結，現對檢驗檢測機構參加農產品農藥殘留檢測能力驗證提出方法與技巧，以供參考。

1 材料與方法

1.1 考核樣品

此次能力驗證分為必考項目（34項）和選考項目（37項），常德市農產品質量安全檢驗檢測中心均報名參加，必考項目和選考項目有3項相同，共68種農藥。本次能力驗證發放的樣品為已破碎芹菜樣品，由湖南省農產品質量檢驗檢測中心統一制備，實驗室發放的樣品在4個100 mL離心管中，其中1個空白樣品、3個平行樣品，每個樣品均為50 g。

1.2 主要儀器和試劑

氣相色譜儀Agilent 7890A ECD檢測器，氣相色譜儀Agilent 7890B FPD檢測器，液相色譜串聯質譜儀（LC/MS/MS）UPLC-XEVO TQD（美國waters公司）。

乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、正己烷（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲苯（色譜純）、蒸餾水（屈臣氏）。

1.3 檢測方法

采用NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定-液相色譜-串聯質譜法》進行檢測。

1.4 檢測項目

（1）必考項目。甲胺磷、氧樂果、甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、甲基異柳磷、水胺硫磷、樂果、敵敵畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、殺螟硫磷、二嗪磷、馬拉硫磷、亞胺硫磷、伏殺硫磷、六六六、百菌清、三唑酮、異菌脲、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氟氰戊菊酯、聯苯菊酯和氟胺氰菊酯，共34種農藥。

（2）選考項目。辛硫磷、涕滅威（涕滅威砜、涕滅威亞砜）、克百威（三羥基克百威）、滅多威、甲萘威、三氯殺螨醇、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、多菌靈、吡蟲啉、氟蟲腈、啶蟲脒、噠螨靈、苯醚甲環唑、嘧霉胺、烯酰嗎啉、蟲螨腈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、咪鮮胺、嘧菌酯、二甲戊樂靈、噻蟲嗪、氟啶脲、滅幼脲、阿維菌素、除蟲脲、滅蠅胺、甲霜靈、霜霉威、多效唑、氯吡脲、氯蟲苯甲酰胺、氯菊酯、醚菊酯、蟲酰肼和吡唑醚菌酯，共37種農藥。

2 能力驗證結果

2018年農產品質量檢測技術能力驗證結果見表1，回收率在70%～130%為合格。由表1可知，所有檢測結果均為合格。

表1 2018年芹菜中農藥殘留定性定量檢測結果表

3 能力驗證的具體方法與技巧

3.1 儀器狀態與條件

儀器在能力驗證之前，需要進行常規性的維護，使儀器的靈敏度、重復性和精密度符合要求，確保儀器能正常運行[3-4]。然后把所有考核項目中的農藥上機進行檢測，確定農藥在儀器上的保留時間和響應值，并通過不斷的調整儀器參數，選擇合適的儀器條件，讓結果更加準確，確保以最好的狀態迎接能力驗證[5]。

3.2 量具、試劑及標準物質

在標準物質溶液配制及樣品前處理過程中，所使用的量具會對結果的準確性造成影響，所以都需要進檢定或校準，包括微量移液器、瓶口分液器、大肚移液管、容量瓶，以確保移取溶液和定容體積的準確性[6]。移液器和大肚移液管的使用要遵守使用規范，否則會使檢測結果有誤差。

所用的試劑如乙腈、正己烷、丙酮、甲醇、甲苯要使用色譜純，最好是使用同一廠家生產的試劑，方便排查儀器出現雜質峰的問題。

農藥標準物質溶液要使用有證標準物質溶液，使用時注意有效期，最好在能力驗證前再打開安瓿瓶進行配制，現配現用，確保標準物質溶液的濃度準確性。

3.3 樣品前處理

樣品前處理依據NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》進行，為了提高實驗得到的數據的準確性，可以按以下方法進行。

NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》整個前處理過程主要是由稱取樣品，根據樣品質量添加提取試劑乙腈，勻漿，加入7 g氯化鈉，振蕩，靜置30 min，再分別移取10 mL到2個25 mL燒杯中，水浴蒸發近干。

一個燒杯做有機磷類前處理，用1～2 mL丙酮淋洗25 mL燒杯2～3次，轉移到5 mL容量瓶，丙酮定容，用0.22 μm有機濾膜過濾至樣品瓶中，待測。

另一個燒杯做有機氯和氨基甲酸酯類前處理，先在燒杯中加入2 mL正己烷，然后將弗羅里硅柱用10 mL丙酮+正己烷（10+90）預淋洗，當溶劑液面到達佛羅里硅柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用25 mL燒杯接收洗脫液，用丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗佛羅里硅柱，少量多次，接收的洗脫液約15 mL左右。再將接收洗脫液的25 mL燒杯放在水浴恒溫振蕩器上加熱，蒸發至5 mL以下，最好到2～3 mL，然后轉移至5 mL容量瓶中，用1～2 mL正己烷淋洗小燒杯轉移至容量瓶中，最后用正己烷定容至5 mL，取1～2 mL移入到2 mL進樣瓶中，待測。

GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》整個前處理過程主要是由稱取試樣，加入提取試劑乙腈，勻漿提取，加入氯化鈉，再勻漿提取1 min，振蕩，靜置30 min。然后將氨基柱放入固定架上，加樣前先用4 mL乙腈-甲苯（3+1）預洗Sep-Pak氨基柱，用雞心瓶接取濾液，當液面到達氨基柱填充物頂部時，用移液器加入2 mL提取液，再每次用2 mL乙腈-甲苯（3+1）洗滌氨基柱3次。收集所有濾液，然后在旋轉蒸發儀上，40 ℃水浴旋轉濃縮近干，加入2 mL甲醇定容，用PTFE濾膜過濾至15 mL離心管中，然后用移液器移取0.2 mL樣品溶液于進樣瓶中，再加入0.8 mL蒸餾水，混勻，用于液相色譜串聯質譜（LC/MS/MS）的測定[7]。

整個前處理過程由一個經驗豐富的實驗人員完成，另外一人進行輔助，最大限度的減少隨機誤差。其中有幾個細節需要注意：①在吸取液體或定容時，盡量用同一方法進行保證準確，如移取10 mL提取液時，統一都用大肚移液管或者微量移液器，不要一個樣品用大肚移液管，另外一個又用微量移液器。②進行有機氯測定前處理和液質前處理時，淋洗活化固相萃取柱盡可能保證淋洗液的體積一致。③液相色譜-串聯質譜法的前處理，在旋轉蒸發時，雞心瓶中的濾液保留一滴不干，用雞心瓶的余熱蒸干，避免出現農藥損失，影響回收率[8-9]。

3.4 定性定量方法

能力驗證要求領樣后3 d之內做出結果并上報，時間比較緊張，為保證能力驗證順利通過，采取以下幾個措施。

（1）樣品完成前處理之后，先將空白樣品和1號樣品上機檢測，確定農藥種類和大致濃度，再用空白基質提取溶液配成基質混合標準工作溶液，添加濃度與能力驗證樣品濃度盡量接近，提高準確度[10]。

（2）液質進行定量計算時，是用標準物質溶液校準曲線進行計算，樣品上機濃度需要落在校準曲線范圍內，提高數據的準確度。

（3）由于此次樣品為50 g，提取溶劑為50 mL，計算結果時，需要用原始計算公式進行計算，不能用簡化公式，防止出現計算錯誤。湖南省農產品質量檢驗檢測中心在此次能力驗證中規定計算結果保留3位有效數字。

式（1）中，ρ-標準溶液中農藥的質量濃度，單位為mg·L-1；A-樣品溶液中被測農藥峰面積；As-農藥標準溶液中被測農藥的峰面積；V1-提取溶劑總體積，單位為mL；V2-吸取出用于檢測的提取溶液的體積，單位為mL；V3-樣品溶液定容體積，單位為mL；m-試樣的質量，單位為g。

（4）在條件允許的情況下，可以進行添加回收率實驗和重復性實驗，進一步提高數據和結果的準確性。

（5）數據處理時，處理方法要保持一致，比如積分時，同一農藥品種采用同樣的積分方法，提高結果準確性[11]。避免因為處理方法不一致，對結果產生影響。

4 小結

只有熟悉整個能力驗證流程，把控好整個實驗過程，精益求精，才能順利通過能力驗證。