卵巢癌中TBL1XR1基因的拷貝數擴增及其臨床意義

金蔚，黨勝春

(1.江蘇大學 醫學院，江蘇 鎮江 212013；2.常熟市第二人民醫院 婦產科，江蘇 常熟 215500；3.江蘇大學附屬醫院 普外科，江蘇 鎮江 212001)

卵巢癌是最致命的婦科腫瘤和第二大癌癥死亡原因，早期手術切除是卵巢癌有效的治療方法。然而由于卵巢癌早期癥狀不明顯，多數腫瘤被發現時已經是進展期，臨床治療收效甚微[1- 2]。目前雖然對晚期和轉移性卵巢癌的基因靶向治療取得一些進步，但療效有限，仍迫切需要確定新的、有效的治療靶點，以改善卵巢癌的預后。

轉導素β1X連鎖受體蛋白1(transducin β- like 1 X- linked receptor 1，TBL1XR1)基因產物是大多數組織中普遍存在的核蛋白，影響腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲、進展[3- 4]。TBL1XR1的表達與人類各種癌癥的臨床進展及患者生存相關，在多種惡性腫瘤中TBL1XR1過表達，檢測TBL1XR1有助于預測癌癥預后[5- 6]。

在腫瘤發生中基因拷貝數變異(copy number variations，CNV)對DNA結構變異及基因表達可產生重要影響。目前美國癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)已被廣泛用于腫瘤的基礎與臨床研究。本研究利用TCGA及基因型- 組織表達(genotype- tissue expression，GTEx)等數據庫，研究卵巢癌中轉導素β1X連鎖受體蛋白1(TBL1XR1)的基因拷貝數擴增情況，探討TBL1XR1參與卵巢癌發生發展的可能機制及卵巢癌預后。

1 數據與方法

1.1 數據來源

從cBioPortal(TCGA可視工具http://www.cbioportal.org/)中“Ovarian Serous Cystad enocarcinoma (TCGA，Provisional)”下載603例卵巢癌患者的多項臨床數據，同時使用GTEx等數據庫進行研究。

1.2 數據分析

利用cBioPortal分析TBL1XR1的基因拷貝數擴增與mRNA及蛋白表達水平的相關性。通過比對TCGA數據庫及GTEx數據庫，研究TBL1XR1基因在腫瘤與正常組織中表達之差異，TBL1XR1基因拷貝數擴增與臨床分期、卵巢癌預后的相關性。

1.3 統計學處理

多組TBLIXR1基因表達比較采用單向方差分析(one- way ANOVA)，進一步兩兩比較用SNK法；生存分析采用Kaplan- Meier法繪制生存曲線，并進行組間比較；分別計算Spearman相關系數和Pearson相關系數。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TBL1XR1基因拷貝數擴增患者的臨床病理特征

通過TCGA數據庫，共收集了594例患者603個樣本。579例有CNV數據，其中166例(28.7%)卵巢癌樣本的TBL1XR1基因拷貝數發生擴增。TBL1XR1基因拷貝數擴增患者的年齡為37～87歲，中位年齡為58歲；其中高級別癌占88.02%，晚期癌占0.82%。

2.2 TBL1XR1基因拷貝數擴增與其mRNA及蛋白表達的相關性

樣本的TBL1XR1基因拷貝數擴增與其mRNA表達[r=0.584(Pearson法)，r=0.590(Spearman法)]及蛋白表達[r=0.629(Pearson法)，r=0.599(Spearman法)]均呈正相關，均P<0.01。表明隨著TBL1XR1基因拷貝數擴增程度的增高，其mRNA表達及蛋白表達也隨之升高。

2.3 TBL1XR1基因在腫瘤和正常組織中表達的差異

對TCGA數據庫426例腫瘤樣本與GTEx數據庫88例組織正常樣本比較后發現，TBL1XR1基因在卵巢癌組織中表達顯著高于正常組織(41.63vs. 22.45，P<0.01)。

2.4 TBL1XR1基因表達與臨床分期的關系

對TCGA數據庫579例樣本中基因表達與臨床資料分析發現，卵巢癌不同臨床分期者TBL1XR1基因表達差異有統計學意義(F=5.51，P=0.004)，進一步兩兩比較發現，卵巢癌Ⅱ期與Ⅲ期的TBL1XR1基因表達差異有統計學意義，其他臨床分期之間差異均無統計學意義。

2.5 TBL1XR1基因拷貝數擴增與卵巢癌患者的生存率及生存時間的關系

TBL1XR1基因拷貝數擴增與無擴增者的生存率(OS)及生存時間見圖1A;TBL1XR1基因拷貝數擴增與無擴增者的無病生存率(DFS)與無病生存時間見圖1B。

A.TBL1XR1基因拷貝數擴增與無擴增者的OS與生存時間;B.TBL1XR1基因拷貝數擴增與無擴增者的DFS與無病生存時間

圖1TBL1XR1基因拷貝數擴增對卵巢癌預后的影響

不同TBL1XR1基因拷貝數擴增水平的卵巢癌患者OS差異有統計學意義(P=0.015 0)；不同TBL1XR1基因拷貝數擴增水平的DFS的差異也有統計學意義(P=0.041 2)。TBL1XR1基因拷貝數擴增水平高提示預后不良。

2.6 TBL1XR1基因表達水平與卵巢癌患者生存率的相關性

利用在線生存分析平臺Kaplan- Meier Plotter，結合TCGA及GEO數據庫TBL1XR1基因表達分析發現，不同TBL1XR1基因表達水平者的OS和DFS差異均有統計學意義(分別P=0.002，P=0.024)，與TBL1XR1低表達患者相比，高表達的卵巢癌患者OS和DFS顯著縮短，TBL1XR1基因表達水平升高提示預后較差。

3 討 論

臨床上卵巢癌無特異性癥狀、缺乏有效的篩選方法及可靠的早期診斷方法，因此在發現時常常已轉移到腹膜腔[7]。盡管目前在手術和輔助化療方面取得了進展，患者的結局仍然不能令人滿意，晚期患者的OS低于30%。研究卵巢癌新型生物標志物預測臨床結果，為治療提供新的靶點，可以改善卵巢癌的預后，提高患者的OS。

TBL1XR1是含有F- box/WD40- 重復的蛋白質[8]。人類TBL1XR1基因位于3q26.32，由18個外顯子組成，長度為178 119 bps[9]。TBL1XR1作為轉錄抑制因子或共抑制因子的交換因子，可影響細胞生長、抗凋亡以及調節基因抑制和轉錄[10- 12]。

研究表明，TBL1XR1在多種人類癌癥的mRNA水平或蛋白質水平上表達升高，TBL1XR1的異常表達可能有助于癌變和腫瘤進展[13]。作為癌癥潛在的預測和治療靶點，TBL1XR1蛋白已引起越來越多的關注。TBL1XR1可能在腫瘤發生、轉移和抗藥性中起重要作用，并且可能是各種癌癥中的后生物標志物。

本研究結果顯示，隨著TBL1XR1基因拷貝數擴增程度增高，樣本mRNA表達與蛋白表達水平也隨之升高。TBL1XR1基因在卵巢癌組織中表達顯著高于正常組織，在臨床分期Ⅱ期與Ⅲ期的組織中表達差異有統計學意義。TBL1XR1的基因拷貝數擴增及其基因表達水平升高，使卵巢癌患者總生存率和無病生存率降低，提示其是卵巢癌預后的影響因素。

本研究利用TCGA及GTEx等數據庫，探討TBL1XR1的拷貝數擴增與卵巢癌預后的關系，為研究卵巢癌臨床診治提供了新的分子靶標。