GLP實驗室生化檢測系統的性能驗證

趙映淑,林應學,黎良程,劉 春

(海南省藥品檢驗所/海南省藥物研究重點實驗室，海南海口 570216)

生化檢測體系(系統)由生化分析儀與檢測試劑及其校準品組成，該體系的性能在一定程度上受儀器本身和(或)試劑的影響，在進行常規工作前應該對其性能進行分析評價，以證實其能滿足預期要求[1-2]。除在儀器首次使用前進行安裝驗證、操作驗證和性能驗證外，儀器安裝地點發生改變、有過重大維修、控制系統或檢測方法發生改變也應該視情況對儀器重新進行3Q驗證[3-4]。這也是良好實驗室規范(GLP)對儀器設備驗證的最基本要求[5-7]。醫學實驗室質量和能力認證也要求儀器設備在常規使用中能達到規定的性能指標[8-10]。本實驗室由日立7100型全自動生化分析儀與日本和光試劑及其校準品組成的生化檢測體系在首次使用前已進行3Q驗證，運行穩定良好，但因其運行成本較高，考慮使用國產試劑進行替代，故該體系的有效性必須加以驗證[11]。本研究所述生化指標體系改變后的驗證，是在GLP條件下，以7100型日立全自動生化分析儀為依托，基于檢測試劑改變(更換為國產科華生化檢測試劑)后，選擇血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、γ-谷氨酰基轉肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、血糖(GLU)、三酰甘油(TG)、肌酸激酶(CK)、尿素(Ur)和肌酐(Cr)13項常規生化指標進行精密度、準確性、線性和攜帶污染率等性能的驗證。

1 材料與方法

1.1樣本來源 質控血清Ⅰ(批號：TP738)、質控血清Ⅱ(批號：DP658)購于日本和光純藥株式會社，線性及攜帶污染率實驗采用的血清樣本由海南省腫瘤醫院提供。

1.2儀器與試劑 儀器為日立7100型全自動生化分析儀(日本日立高新技術株式會社)。ALT(批號：20170722)、AST(批號：20170222)、ALP(批號：20170812)、GGT(批號：20170712)、CK(批號：20170712)、TP(批號：20170122)、ALB(批號：20170612)、TBIL(批號：20170722)、TG(批號：20170412)、CHO(批號：20170322)、GLU(批號：20170712)、CERA(批號：20170622)、BUN(批號：20170512)及其校準品均購于上海科華生物工程有限公司。

1.3方法

1.3.1精密度 按照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)EP15-A2[12]文件要求，將高、低水平質控血清復溶后每天重復測定3次，連續測定5 d，記錄每天的測定結果，計算批內變異系數(CV%)及批間CV%，并與美國臨床實驗室修正法規(CLIA′88)比較，若批內CV%<1/4允許總誤差(TEa)，批間CV%<1/3TEa證明其性能良好。

1.3.2準確度 將正常值質控血清連續測定5次，求平均值，與質控血清靶值進行比較采用相對偏差判斷各項的準確度[13]。相對偏差=(檢測值-靶值)/靶值×100%。偏差小于CLIA′88對檢測項目分析質量要求的TEa的1/3則判定測定結果準確、可靠。

1.3.3線性 根據CLSI EP6-P2[14]文件要求進行實驗。將高值(H)、低值(L)血清按一定比例混合(H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、L)，每個混合物重復檢測4次，取均值。以稀釋度為橫軸、每個稀釋度的測量均值為縱軸進行線性回歸，根據線性回歸方程求出每個稀釋度的理論濃度，計算每一稀釋度下實測濃度和理論濃度的差異，即線性偏差。若相關系數(R2)>0.995、線性偏差≤1/2TEa則可判斷測定方法在實驗所涉及的濃度范圍內成線性。

1.3.4攜帶污染率 根據CLSI EP10-A2文件要求[15]，將低水平血清分為3份(分別為L1、L2、L3)和一份高水平血清(H)，按L1、L2、H、L3順序排列進行測定，根據攜帶污染率計算公式[(L3-L2)/H×100%]，計算每項攜帶污染率，<0.5%為合格。

1.4統計學處理 采用Excel2003軟件對數據進行分析。

2 結 果

2.1精密度及準確度實驗 13項生化指標水平Ⅰ和水平Ⅱ的批內CV%和批間CV%分別小于基于生物學變異確定1/4 CLIA′88和1/3 CLIA′88，均符合性能要求，說明該儀器具有較高的精密度。見表1。標準質控血清水平Ⅰ和水平Ⅱ測定值與靶值的相對偏差均小于CLIA′88對檢測項目分析質量要求的總允許誤差的1/3,13項生化指標中有10項相對偏差均在±3%以內，其余3項指標也均符合該儀器的準確度要求。見表2。

2.2線性實驗 13項生化指標的線性決定系數R2值均>0.995，說明該儀器在定值血清的稀釋范圍內呈良好的線性關系。見表3。

表1 精密度檢測結果與性能比較(n=5)

表2 準確度檢測結果與性能比較(n=5)

續表2 準確度檢測結果與性能比較(n=5)

2.3樣品攜帶污染率實驗 13項生化指標檢測的攜帶污染率均<0.5%，說明前一個樣品對下一個樣品測定結果不存在影響，符合該儀器的基本要求。見表4。

表4 攜帶污染率檢測結果

3 討 論

本研究依據CLIA′88對13個常規生化項目檢測的精密度、準確度及線性偏差的結果進行了判定，結果顯示，批內CV%<1/4 CLIA′88TEa，批間CV%<1/3 CLIA′88TEa；準確度相對偏差明顯小于1/3 CLIA′88TEa；線性驗證R2均>0.995，線性偏差均<1/2 CLIA′88 TEa。表明該儀器檢測重復性、準確性和線性良好，也說明國產試劑和校準品與日立7100型全自動生化分析儀構成的新檢測體系符合質量要求，能保證毒理學研究中的臨床檢驗工作。

GLP實驗室的臨檢對象是實驗動物，一般以提供客觀檢測數據為主，不涉及疾病診斷，在檢測方法、儀器選擇和結果解釋方面與臨床存在差異，且實驗動物飼養和樣品采集的標準化也使臨床常見的干擾現象減少。除定期測試精密度、準確度、線性范圍和攜帶污染率外，首次驗證還應該考慮最低檢測限和最大稀釋度。

綜上所述，經GLP條件下的性能驗證，本實驗室日立7100型全自動生化分析儀在更換試劑后各方面性能良好。