三七藥材的質(zhì)量現(xiàn)狀調(diào)查與評(píng)價(jià)

馬 妮，高明菊，劉云芝，王炳艷，朱 艷，馮光泉

（1.文山學(xué)院 三七研究院，云南 文山 663099，2.云南省三七工程技術(shù)研究中心，云南 文山 663099）

三七為五加科人參屬植物，是中國云南特有的名貴中藥材，對(duì)心腦血管系統(tǒng)疾病具有顯著療效，為文山州最具特色的優(yōu)勢(shì)生物資源[1]。云南文山是三七的原產(chǎn)地和主產(chǎn)區(qū)，也是道地產(chǎn)區(qū)，由于受三七連作障礙的影響，以及三七知名度提高、市場(chǎng)需求不斷擴(kuò)大，三七已擴(kuò)展到除云南省文山州以外的紅河州、昆明市、曲靖市、玉溪市、大理州、楚雄州、臨滄市以及廣西省百色市進(jìn)行種植，但其質(zhì)量狀況不甚清楚，為了解三七質(zhì)量現(xiàn)狀，項(xiàng)目組全面開展了三七質(zhì)量現(xiàn)狀的調(diào)查工作。在同一年度的三七采收期10月至12月，對(duì)三七主要種植區(qū)域的云南省文山州、紅河州、曲靖市、昆明市、玉溪市、大理州、楚雄州、臨滄市以及廣西省百色市等2省9地州36縣（市）76鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）的87個(gè)三年生三七種植園進(jìn)行三七樣品的采集，進(jìn)行三七質(zhì)量現(xiàn)狀調(diào)查與評(píng)價(jià)。皂苷成分是三七的主要成分，主要為人參皂苷 Rb1、Rb2、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1和三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6以及七葉膽皂苷XVII等，其中以Rg1、Rb1含量最高[2-4]，2015版中國藥典中，三七藥材以三七皂苷 R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1為含量評(píng)價(jià)指標(biāo)[5]，曾有文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1、Rd等4個(gè)皂苷成分評(píng)價(jià)三七質(zhì)量[6]，未見同時(shí)以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd等5個(gè)指標(biāo)進(jìn)行三七藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的。為更加全面了解各產(chǎn)區(qū)三七質(zhì)量現(xiàn)狀，項(xiàng)目組對(duì)不同產(chǎn)區(qū)三七進(jìn)行了5個(gè)皂苷成分的測(cè)定，并進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260液相色譜儀（美國安捷倫），Sartorius CPA225D電子分析天平（德國賽多利斯）。

1.2 試藥

三七總皂苷對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所（供含量測(cè)定用，批號(hào)：110870-201302，含量以三七皂苷R16.9%，人參皂苷Rg128.0%，人參皂苷Re 3.8%，人參皂苷Rb129.7%，人參皂苷Rd 7.3%計(jì)）。

1.3 樣品

樣品由項(xiàng)目組于同一采收期內(nèi)采集三年生三七，采挖后進(jìn)行清洗、揀選、去除支根和剪口，干燥，取主根部分粉碎后用于檢測(cè)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長為203 nm；理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000；梯度洗脫條件見表1。

表1 HPLC梯度洗脫條件

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取三七總皂苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R10.1 mg、人參皂苷Rg10.4 mg、人參皂苷Re 0.05 mg、人參皂苷Rb10.4 mg、人參皂苷Rd 0.1 mg的混合溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取三七樣品粉末（過四號(hào)篩）0.6 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，放置過夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL已配制好的對(duì)照品溶液于5 mL容量瓶中，配制得一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別按上述色譜條件測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程，在各自的線性范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Re，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的RSD值分別為0.44%、0.10%、0.35%、0.24%、0.28%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品溶液，放置0、2、4、8、12 h，按上述色譜條件，分別測(cè)定峰面積積分值，三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Re，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的RSD值分別為0.54%、0.11%、0.40%、0.22%、0.34%，結(jié)果表明本供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一地塊的三七樣品粉末6份，按上述方法試驗(yàn)，分別測(cè)定樣品中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Re，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的含量，RSD值分別為0.61%、1.32%、1.93%、1.34%，2.01%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的同一地塊的三七樣品粉末，精密稱取6份，分別精密吸取已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液各1.5 mL加入樣品中，按上述方法實(shí)驗(yàn)，分別測(cè)定樣品中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Re，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的含量，結(jié)果平均回收率分別為102.88%、98.2%、97.56%、101.68%、100.65%，RSD值分別為2.93%、2.39%、2.63%、1.53%、2.12%（n = 6），表明本測(cè)定方法可靠。

2.9 樣品的測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，結(jié)果按干燥品計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 不同地區(qū)87個(gè)三七樣品三七皂苷含量測(cè)定結(jié)果/%

續(xù)表1：

續(xù)表1：

3 結(jié)果分析

項(xiàng)目組將所采集的樣品按不同地州（注：云南省楚雄州、臨滄地區(qū)由于所采集的樣品數(shù)太少，不參與評(píng)價(jià)）進(jìn)行歸類，分別統(tǒng)計(jì)各地州所采集三七樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、R1+ Rg1+ Rb1及R1+Rg1+ Re+Rb1+Rd含量的最大值、最小值，并計(jì)算得其平均值。結(jié)果見表2、3。

表2 各地州三七樣品中5個(gè)單體皂苷含量比較/%

表3 各地州三七樣品中R1+ Rg1+ Rb1和R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd含量比較/%

3.1 各單體皂苷含量比較

以三七皂苷R1含量的平均值進(jìn)行比較，最高的是紅河州為1.3%，最低的是百色市為0.91%。按照由高到低排列，紅河州＞昆明市＞保山市＞玉溪市＞曲靖市＞文山州＞百色市。

以人參皂苷Rg1含量平均值進(jìn)行比較，最高的是文山州為5.03%，最低的是昆明市為4.27%。按照由高到低排列，文山州＞曲靖市＞玉溪市＞百色市＞紅河州＞保山市＞昆明市。

以人參皂苷Rb1含量平均值進(jìn)行比較，最高的是百色市為4.66%，最低的是保山市為3.68%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞玉溪市＞紅河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

以人參皂苷 Re含量平均值進(jìn)行比較，最高的是百色市為0.86%，最低的是昆明市和保山市，同為0.51%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞紅河州＞曲靖市＞玉溪市＞昆明市＞保山市。

以人參皂苷Rd含量平均值進(jìn)行比較，最高的是百色市為1.10%，最低的是保山市為0.89%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞玉溪市＞紅河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

3.2 “R1+ Rg1+ Rb1”3個(gè)單體皂苷含量比較

以“三七皂苷R1+人參皂苷Rg1+人參皂苷Rb1”3個(gè)單體皂苷含量總和的平均值進(jìn)行比較，最高的是文山州為10.66%，最低的是保山市為9.18%。按照由高到低排列，即文山州＞百色市＞玉溪市＞紅河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

3.3 “R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd”5個(gè)單體皂苷含量比較：

以“R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd”5個(gè)單體皂苷含量總和的平均值進(jìn)行比較，最高的是文山州為12.44%，最低的是保山市為10.58%。按照由高到低排列，即文山州＞百色市＞玉溪市＞紅河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

4 小結(jié)

各主產(chǎn)區(qū)三七樣品中，三七皂苷R1含量以云南省紅河州的三七為最高；人參皂苷Rg1含量以云南省文山州的三七為最高；而人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rd等3個(gè)單體皂苷含量以廣西省百色市的三七為最高；3個(gè)單體皂苷（R1+ Rg1+Rb1）和5個(gè)單體皂苷（R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd）含量總和以云南省文山州的三七為最高，說明云南省文山州的三七中總皂苷含量最高，其余依次為：百色市、玉溪市、紅河州、曲靖市、昆明市、保山市等。