綠猴尾部末端壞死組織的病原菌分離及治療

李同義,王 凱,王建堂,陸瑤瑤,黃亞強(qiáng),陳 陸,牛雪萍,楊玉榮,裴春圃

(1.鄭州市動(dòng)物園,河南 鄭州 450008;2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,河南 鄭州 450002)

綠猴(Chlorocebus sabaeus)為綠猴屬、猴科、靈長(zhǎng)目動(dòng)物,生活在靠近河流的熱帶草原地區(qū),喜群居,全身都覆蓋有厚厚的金黃綠色的皮毛,臉頰無(wú)毛,周圍覆蓋有白毛,顯出深藍(lán)色皮膚的輪廓。壽命約18歲,體重3.5～8 kg,受CITES附錄II級(jí)保護(hù)[1],全世界均有分布。但關(guān)于綠猴尾部壞死的疾病及相關(guān)治療的研究未見(jiàn)報(bào)道,本試驗(yàn)對(duì)綠猴尾部壞死組織分離細(xì)菌、染色,并接種于小鼠,觀察臨床癥狀,同時(shí)探討其治療方法,為綠猴及其他動(dòng)物相似病癥的病因探究及治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 來(lái)源及臨床癥狀 2016年11月河南鄭州市動(dòng)物園引入一批綠猴,后逐漸發(fā)現(xiàn)尾巴末端有萎縮、壞死、形成黑色厚的痂皮等現(xiàn)象,痂皮黏性高、顏色呈褐色或黑色,猴自已易啃咬病患部,有的痂皮脫落、可見(jiàn)新鮮創(chuàng)面,不易愈合,未見(jiàn)全身性反應(yīng),精神、食欲佳,發(fā)病率達(dá)100%(見(jiàn)中插彩版圖1A、1B、1C)。

1.2 病料處理及方法

1.2.1 從綠猴尾部壞死與新鮮交界處采集病料涂片,進(jìn)行革蘭染色,顯微鏡下觀察。

1.2.2 從綠猴尾部壞死與新鮮交界處分離細(xì)菌,對(duì)分離出的細(xì)菌分別進(jìn)行純化培養(yǎng),用PBS溶液溶解細(xì)菌,100倍稀釋后并分別及混合后注射于小鼠尾部和背部皮下,尾部注射0.1 mL,背部皮下注射0.2 mL,陰性對(duì)照組注射相同量的PBS溶液,試驗(yàn)期為10 d,觀察、記錄小鼠臨床癥狀。

1.2.3 從綠猴尾部末端采集新鮮病料真菌培養(yǎng),使用止血鉗鑷選取病灶邊緣處的少量毛發(fā)和皮屑,小心開啟培養(yǎng)瓶蓋,注意不要產(chǎn)生污染;將樣品放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基中,輕柔晃動(dòng)培養(yǎng)基瓶身,使樣品與培養(yǎng)基均勻混合;擰上培養(yǎng)瓶蓋(不完全擰緊、留有縫隙)后將其靜置于恒溫培養(yǎng)箱,30℃環(huán)境中,培養(yǎng)48 h即可對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行判讀。若培養(yǎng)基內(nèi)有絮狀物形成,即可確診。超過(guò)5 d無(wú)明顯絮狀物產(chǎn)生則為陰性。

1.2.4 將上述真菌培養(yǎng)所得絮狀物至載玻片進(jìn)行涂片,滴加瑞士姬姆薩A液0.8 mL于涂片上,染色1 min后滴加瑞士姬姆薩B液2 mL,使用洗耳球輕微吹液面混勻染色液,染色8 min后進(jìn)行水洗、干燥、鏡下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 綠猴尾部患區(qū)涂片,革蘭染色可見(jiàn)大量革蘭陽(yáng)性球桿菌和陰性球菌。(見(jiàn)中插彩版圖1E)

2.2 綠猴尾部細(xì)菌分離試驗(yàn)中,分離出來(lái)一種溶血性陽(yáng)性球菌,一種溶血性梭菌。分別及混合菌液后注射于小鼠,可見(jiàn)陰性對(duì)照組小鼠尾巴、身體被毛、皮膚均正常;溶血性陽(yáng)性球菌注射小鼠后尾巴正常,頭頸部以及背部大面積皮膚裸露,被毛稀疏;溶血性梭菌注射后小鼠尾巴正常,頭頸部有部分被毛脫落,輕微皮膚裸露;混合菌液注射小鼠后可見(jiàn)尾巴有紅斑,身體被毛無(wú)明顯脫落現(xiàn)象(見(jiàn)中插彩版圖2)。

2.3 從綠猴尾部末端采集新鮮病料真菌培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)中插彩版圖3顯示：進(jìn)行真菌培養(yǎng)48 h后的4個(gè)樣品均出現(xiàn)了絮狀物,表明綠猴尾部末端壞死組織的病原菌為真菌。

2.4 真菌培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行涂片染色觀察結(jié)果見(jiàn)中插彩版圖4顯示：A、B、C、D共4組真菌培養(yǎng)產(chǎn)物均有明顯小孢子,且形態(tài)特征相似,說(shuō)明進(jìn)行真菌培養(yǎng)的4組樣品均為小孢子感染,也進(jìn)一步驗(yàn)證了真菌培養(yǎng)結(jié)果。

3 治療

3.1 原則 控制感染,止癢,促進(jìn)傷口愈合。先用伊維菌素注射液1.5 mg/只,皮下注射,1次/3 d,用3次后效果不好,說(shuō)明體外寄生蟲感染的可能性小。后采用以下方法治療。

頭孢噻呋10 mg/次·只,1次/3 d,肌肉注射。地塞米松0.5 mg/次,1次/d,用1 w。

鹽酸特比萘芬片30 mg/只·d,口服,連用2 w。

3.2 傷口處理 先用高錳酸鉀水浸泡尾巴,后分組用以下外用藥物涂抹：鹽酸特比萘芬乳膏外用,局部涂抹,2次/d。碘甘油,局部涂抹,2次/d。紫藥水局部涂抹,2次/d。

3.3 手術(shù)斷尾2 w后效果由強(qiáng)到弱為：手術(shù)斷尾＞紫藥水＞碘甘油＞鹽酸特比萘芬乳膏。

4 討論

關(guān)于動(dòng)物尾部壞死病癥的報(bào)道很有限,對(duì)病因探求及治療的研究也很少。Korn A K等[2]發(fā)現(xiàn)麥角生物堿可以引起兔子的尾巴壞死;辜良斌等[3]發(fā)現(xiàn)革蘭陰性短桿菌可引起豹紋鰓棘鱸魚體發(fā)白,尾部潰爛;柳家玉等[4]飼養(yǎng)大鼠發(fā)現(xiàn)有尾部紅腫、潰爛,甚至尾巴斷裂的現(xiàn)象,細(xì)菌分離發(fā)現(xiàn)有變形桿菌及金黃色葡萄球菌。此次綠猴尾部壞死的病因初步確定為混合感染,含有革蘭染色陽(yáng)性梭菌和球菌,其發(fā)病原因可能是長(zhǎng)途運(yùn)輸,機(jī)體產(chǎn)生一定的應(yīng)激,免疫力低下,導(dǎo)致感染和病癥的發(fā)生。

發(fā)病后,對(duì)綠猴皮下注射伊維菌素1.5 mg,次/3 d,共3次,發(fā)現(xiàn)壞死部位未見(jiàn)好轉(zhuǎn),整體效果不明顯;后對(duì)病猴患部逐只用高錳酸鉀浸泡、清洗,涂抹碘甘油及抗真菌膏劑,可以減緩壞死區(qū)域的發(fā)展,有一定療效;同時(shí),對(duì)患病猴只手術(shù)斷尾,外科縫合,發(fā)現(xiàn)效果較好,創(chuàng)面可以很快愈合,并長(zhǎng)出新的被毛(見(jiàn)中插彩版圖1D),未見(jiàn)有新創(chuàng)口出現(xiàn)及啃咬顯現(xiàn)發(fā)生。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)動(dòng)物園綠猴尾部壞死的原因及治療方法的探究,初步確定病因?yàn)檎婢⑺缶扒蚓鸬幕旌细腥?使用廣譜抗生素、抗真菌藥、激素以及外用藥物治療有較好的效果,手術(shù)斷尾可以根本解決尾部壞死問(wèn)題,但尾部毛發(fā)中會(huì)有大量病菌,用高錳酸鉀水清洗、浸泡尾巴后再外用藥物效果更好。本試驗(yàn)為綠猴及其他動(dòng)物有相似病癥的病因探尋及治療提供參考依據(jù)。