冠心病患者循環內皮祖細胞與血管內皮細胞生長因子的變化及其相互間的關系

俞章平，余晗俏，李俊，李超

冠心病是血管病變，其形成機制中，內皮損傷與功能障礙是主要的環節之一。內皮祖細胞主要是一種骨髓衍生或來源于其他組織，在循環中逐漸遷移和增殖及分化，并最終形成成熟的內皮細胞類型[1]。研究發現，內皮祖細胞不但參與人類胚胎血管的形成，同時還參與人類出生后成長過程中血管新生與內皮受損后的修復過程[2]。血管內皮細胞生長因子是促進人類血管生成的重要因素，其不但可促進內皮祖細胞增殖，同時還具有趨化作用，對人體血管內膜修復等具有一定作用。本研究探討循環內皮祖細胞與血管內皮生長因子在冠心病中的作用，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省金華市人民醫院2016年1月至2018年1月收治的冠心病患者70例作為觀察組，均符合《缺血性心臟病病名及診斷標準》[3]，且自愿參與研究且簽署知情同意書；排除感染、惡性腫瘤、高血壓控制不理想、肺心病、急性心肌炎、風濕性心臟病等其他心臟疾病，急性肺感染，中度以上貧血或白血病，類風濕關節炎，嚴重肝腎功能障礙，糖尿病，自身免疫性疾病及心肌病等。其中男40例，女30例；年齡45～72歲，平均（62.3±3.5）歲；急性心肌梗死20例，不穩定型心絞痛24例，穩定型心絞痛26例。另選21例正常健康人群作為對照組，其中男12例，女9例；年齡44～70歲，平均（61.9±3.4）歲。兩組性別和年齡差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 于清晨空腹下采集肘靜脈血液4 ml，然后貯存于4℃冰箱中待測，于4 h內完成檢測。內皮祖細胞：分別在試驗管和對照管中加入全血100l，并加入抗體和同型對照，然后輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min。溶血素LysingSolution采用去離子水以1∶10進行稀釋，分別在試驗管和對照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。將溶血后的試管1 500 r/min離心5 min，去除上清液，并加入2 ml PBS緩沖液，然后再離心處理，去除上清液，洗滌后加入500lPBS，輕輕震蕩，等待流式檢測。循環內皮細胞檢測：分別在試驗管和對照管中加入100ml全血，然后加入抗體和同型對照，輕輕搖勻，放置于冰上避光孵育30 min，溶血素Lysing Solution采用去離子水以1∶10稀釋，分別在試驗管和對照管中加入稀釋好的溶液2 ml，于常溫下避光孵育10 min。溶血后離心處理，棄除上清液，加入2 ml PBS，離心，洗滌，棄除上清液，洗滌后加入500l PBS，輕輕震蕩以使細胞重懸，等待流式檢測。采用酶聯免疫吸附法檢測血管內皮生長因子水平。

1.3 觀察指標 鑒定血管內皮祖細胞，并觀察不同患者外周血血管內皮祖細胞數量變化和黏附能力、遷移能力、生長因子水平變化。

1.4 統計方法 采用SPSS22.0統計軟件進行處理，計量資料以均數標±準差表示，多組比較采用方差檢驗；相關性采用直線相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血管內皮祖細胞鑒定情況 血管內皮祖細胞存在內皮祖細胞特性，培養7d后形成梭形內皮細胞。

2.2 各組血管內皮祖細胞情況 各組血管內皮祖細胞克隆形成數差異有統計學意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內皮祖細胞克隆形成數高于不穩定型心絞痛患者、穩定型心絞痛、對照組，且不穩定型心絞痛患者高于對照組，穩定型心絞痛患者低于對照組。見表1。

2.3 各組內皮祖細胞黏附能力比較 冠心病各組間貼壁細胞數量差異有統計學意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者貼壁細胞數量與不穩定型心絞痛患者相近，穩定型心絞痛患者低于不穩定型心絞痛和急性心肌梗死患者。見表2。

2.4 各組血管內皮祖細胞遷移情況比較 各組血管內皮祖細胞遷移數量差異有統計學意義（P＜0.05）。急性心肌梗死患者血管內皮祖細胞遷移數量高于不穩定型心絞痛、穩定型心絞痛、對照組，不穩定型心絞痛患者高于對照組，而穩定型心絞痛患者低于對照組。見表3。

2.5 各組血管內皮生長因子水平比較 各組血管內皮生長因子水平差異有統計學意義（P＜0.05）。穩定型心絞痛患者血管內皮生長因子水平與對照組相近；而急性心肌梗死患者、不穩定型心絞痛患者高于對照組，且急性心肌梗死患者高于不穩定型心絞痛。見表4。血管內皮生長因子水平與循環血管內皮祖細胞黏附能力無相關性（=0.28，＞ 0.05），而與循環血管內皮祖細胞數量、遷移能力呈正相關性（=0.84、0.72，均＜ 0.05）。

表1 4組血管內皮祖細胞情況 CFU/106

表2 3組內皮祖細胞黏附能力比較 個/視野

表3 4組血管內皮祖細胞遷移情況比較 個/視野

3 討論

早期內皮細胞增殖和分化能力較差，其通過旁分泌方式來促進血管與微血管形成；而晚期內皮祖細胞具有較強的增殖和遷移及分化能力，可直接進入受損組織以修復小管內皮，并形成新的毛細血管[4]。正常健康人群外周血液中內皮祖細胞成為穩定狀態，當出現急性心力衰竭等事件時，內皮祖細胞會出現短暫升高。有文獻報道，內皮功能不良是成人發生心血管疾病的基礎[5]。單層內皮細胞可分泌重要調節因子，為血小板與粒細胞提供光滑管壁結構，當患者發生高血壓等疾病時，其可削弱患者血管內皮功能，增加縮血管誤診等產生，從而增加患者細胞黏附力，促進中層平滑肌細胞增殖而形成血栓[6]。部分生理變化也會致人體內皮祖細胞數量發生變化，如雌激素等可增加人體內內皮祖細胞數量，而慢性心力衰竭患者，其內皮祖細胞數量在心功能I～II級時增加，在心功能III～IV時下降[7]。本研究發現，急性心肌梗死患者內皮祖細胞數高于對照組，且遷移能力明顯高于其他患者，但黏附能力與不穩定型心絞痛患者無明顯差異；不穩定型心絞痛患者內皮祖細胞和遷移能力明顯高于穩定型心絞痛與對照組；穩定型心絞痛患者內皮祖細胞數量和遷移能力明顯低于對照組，與文獻[8]報道結果相似。

表4 4組血管內皮生長因子水平比較 ng/L

目前尚不完全清楚內皮細胞生長因子的來源，但缺血心肌組織可分泌血管內皮細胞生長因子，這主要是因缺氧狀態是內皮細胞生長因子基因的始動因子。正常人群血清中存在極低的內皮細胞生長因子，當心肌細胞處于缺氧、缺血狀態下，其內皮細胞生長因子將會明顯增加。內皮細胞生長因子可促進人體內皮祖細胞動員和增殖，促進人體血管內膜修復與新生。

綜上所述，臨床可通過檢測患者血管內皮細胞生長因子和循環內皮祖細胞數量來判斷冠心病患者的預后，為臨床治療提供依據。