巖生翠柏枝葉化學(xué)成分的研究

寧德生， 鄒芷琪， 符毓夏， 李連春， 劉 演， 黃俞淞， 潘爭(zhēng)紅

（廣西植物研究所，廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 桂林541006）

巖生翠柏Calocedrus rupestris 為柏科翠柏屬植物，為中國(guó)新記錄種，零星分布于廣西北部和西北部的石灰?guī)r地區(qū)，由于人類活動(dòng)對(duì)石灰地區(qū)的破壞，該植物在廣西已列為瀕危植物［1］，據(jù)研究報(bào)道，翠柏屬植物主要含有萜類、 木脂素等成分［2-4］，具有抗菌、抗炎、抗氧化、 細(xì)胞毒等活性［4-7］。然而對(duì)該植物的化學(xué)成分研究，目前鮮有報(bào)導(dǎo)。為此，本課題組對(duì)巖生翠柏枝葉開展化學(xué)成分研究，從中分離得到11 個(gè)化合物，且均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Shimadzu LC／MS-IT-TOF 質(zhì)譜儀和LC-6AD 制備液相 （日本島津公司）； 布魯克AVANCE Ⅲ500 MHz核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司）；柱層析分離填料硅膠（100 ～200 目，青島海洋化工廠）；MCI gel（日本三菱化學(xué)公司）；島津PCRODS（50 mm×250 mm，15 μm，日本島津公司）。乙腈［色譜純，賽默飛世爾科技（中國(guó)） 有限公司］；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇（分析純，西隴化工股份有限公司）。

巖生翠柏枝葉采集于廣西環(huán)江縣，經(jīng)廣西植物研究所劉演研究員鑒定為翠柏屬植物巖生翠柏Calocedrus rupestris 的枝葉。

2 提取與分離

巖生翠柏枝葉10 kg，陰干后粉碎，加入95%乙醇50 L，在室溫下浸提24 h，過(guò)濾，濾渣再重復(fù)上述操作2 次，合并3 次提取液，減壓回收溶劑得到浸膏950 g。取900 g 浸膏用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取3 次，每次萃取溶劑為2 L，回收溶劑后，分別得到石油醚部位168 g、乙酸乙酯部位284 g。

取石油醚部位160 g，注入硅膠層析柱，以石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0 ～1 ∶1） 梯度洗脫，根據(jù)TLC 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行合并，得6 個(gè)組分A-F，E 組分采用MCI 柱層析純化，甲醇70%～100%梯度洗脫，分別得4 個(gè)部位E1-4。 部位E1 （0 ～ 40 min，50%～70%乙 腈， 乙 腈-水）、 E3 （0 ～40 min，70%～75%乙腈，乙腈-水） 分別經(jīng)HPLC 制備得化合物4（5.4 mg）、5（9.5 mg）、6（12.3 mg）、1（12.3 mg）、2（6.7 mg）、3（8.8 mg）。

取乙酸乙酯部位260 g，注入硅膠層析柱，以氯仿-甲醇（100 ∶1 ～1 ∶1） 梯度洗脫，根據(jù)TLC檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行合并，得6 個(gè)組分Fr.1-6，F(xiàn)r.6 經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇9 ∶1） 與HPLC（0～40 min，45%～65%乙腈，乙腈-水） 純化得化合物7（6.3 mg）、8（5.8 mg）、9（8.4 mg）、10（2.7 mg）、11（2.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：331.2［M-H］-，分子式C20H28O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：7.18（1H，s，H-14），4.88（1H，brs，H-17a），4.79（2H，s，H-15a and 15b），4.60（1H，br s，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：38.9（C-1），19.7（C-2），38.4（C-3），44.0（C-4），56.0（C-5），25.8（C-6），37.7（C-7），147.2（C-8），55.4（C-9），40.3（C-10），21.6（C-11），28.8（C-12），144.4（C-13），134.2（C-14），70.2（C-15），174.6（C-16），106.6（C-17），28.8（C-18），183.6（C-19），12.6（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］ 一致，故鑒定為pinusolidic acid。

化合物2： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：343.2［M＋Na］＋，分子式C20H32O3。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，t，J ＝7.0 Hz，H-14），4.85（1H，brs，H-17a），4.52（1H，brs，H-17b），4.14（2H，d，J ＝5.5 Hz，H-15），1.66（3H，s，H-16），1.22（3H，s，H-20），0.59（3H，s，H-18）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），20.0（C-2），38.1（C-3），44.2（C-4），56.3（C-5），26.2（C-6），38.5（C-7），148.1（C-8），55.6（C-9），40.5（C-10），22.0（C-11），38.8（C-12），140.4（C-13），122.9（C-14），59.3（C-15），16.4（C-16），106.5（C-17），29.1（C-18），182.8（C-19），12.9（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］ 一致，故鑒定為isocupressic acid。

化合物3： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：303.3［M-H］-，分子式C20H32O2。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.37（1H，t，J ＝5.5 Hz，H-14），4.89（1H，s，H-17a），4.56（1H，s，H-17b），4.13（2H，d，J ＝7.0 Hz，H-15），1.63（3H，s，H-16），1.02（3H，s，H-18），0.56（3H，s，H-20）；13CNMR（125 MHz，CDCl3）δ：38.4（C-1），19.2（C-2），38.4（C-3），48.6（C-4），54.8（C-5），21.9（C-6），34.3（C-7），147.3（C-8），56.0（C-9），40.0（C-10），24.0（C-11），38.3（C-12），139.7（C-13），123.3（C-14），59.1（C-15），16.3（C-16），107.3（C-17），24.3（C-18），206.0（C-19），13.5（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］ 一致，故鑒定為isoagatholal。

化合物4： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：347.1［M-H］-，分子式C20H28O5。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.99（1H，s，H-16），5.84（1H，s，H-14），4.88（1H，s，H-17a），4.50（1H，s，H-17b），1.23（1H，s，H-18），0.61 （1H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），19.9（C-2），37.9（C-3），44.2（C-4），56.2（C-5），26.1（C-6），38.6（C-7），147.3（C-8），55.7（C-9），40.6（C-10），21.1（C-11），26.9（C-12），171.0（C-13），116.9（C-14），171.0（C-15），99.6（C-16），106.8（C-17），29.1（C-18），183.4（C-19），12.8（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］ 一致，故鑒定為16-hydroxy-8（17），13-labdadien-15，16-olid-19-oic acid。

化合物5： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：347.2［M-H］-，分子式C20H28O5。1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ： 6.85 （1H， brs， H-14），6.11（1H，brs，H-15），4.88（1H，brs H-17a），4.56（1H，brs，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：39.2（C-1），19.9（C-2），37.9（C-3），44.2（C-4），56.2（C-5），26.1（C-6），38.6（C-7），147.4（C-8），55.7（C-9），40.5（C-10），21.8（C-11），24.5（C-12），138.4（C-13），143.5（C-14），97.0（C-15），172.1（C-16），106.8（C-17），29.0（C-18），183.5（C-19），12.8（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［10］ 一 致， 故 鑒 定 為15-hydroxypinusolidic acid。

化合物6：黃色油。由HR-ESI-MS m／z：333.2［M＋H］＋，分子式C20H28O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：7.12（1H，d，J ＝1.5 Hz，H-14），4.89（1H，br s H-17a），4.77（2H，d，J ＝2.0 Hz，H-15），4.59（1H，brs，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），19.9（C-2），38.0（C-3），44.3（C-4），56.3（C-5），26.1（C-6），38.7（C-7），147.5（C-8），55.8（C-9），40.6（C-10），21.9（C-11），24.7（C-12），134.9（C-13），144.1（C-14），70.3（C-15），174.5（C-16），106.9（C-17），29.1（C-18），183.9（C-19），12.9（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］ 一致，故鑒定為8（17），13-ent-labdadien-15→16-lactone-19-oic acid。

化合物7； 黃色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.5［M-H］-，分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：13.16（2H，s，5，5″-OH），10.34（2H，s，4，4?-OH），7.47（4H，d，J ＝8.5 Hz，H-2′，6′，2?，6?），6.78（2H，s，H-6，6″），6.73（4H，d，J ＝8.0 Hz，H-3′，5′，3?，5?），6.43（2H，s，H-3，3″）；13C-NMR（125 MHz，DMSO）δ：163.5（C-2，2″），102.6 （C-3 3″），182.1 （C-4，4″），161.1（C-5，5″），98.9（C-6，6″），162.7（C-7，7″），98.9（C-8，8″），154.8（C-9，9″），103.6（C-10，10″），121.3（C-1′，1?），127.9（C-2′，6′，2?，6?），115.8（C-3′，5′，3?，5?），161.1（C-4，4?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］ 一致，故鑒定為cupressuflavone。

化合物8： 黃色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.5［M-H］-，分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：13.10（1H，brs，5″-OH），12.93（1H，brs，5-OH），8.00（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-2′），7.96（1H，dd，J ＝2.0，8.5 Hz，H-6′），7.55（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2?，6?），7.11（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5′），6.78（1H，s，H-3），6.73（1H，s，H-3″），6.70（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-3?，5?），6.44（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-8），6.36（1H，s，H-6″），6.18（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，DMSO） δ： 164.3 （C-2）， 102.8 （C-3），182.0（C-4），161.2（C-5），99.1（C-6），163.9（C-7），94.3（C-8），157.6（C-9），103.9（C-10），127.9（C-1′），116.3（C-2′），120.9（C-3′），160.3（C-4′），121.7（C-5′），131.6（C-6′），164.2（C-2″），102.7（C-3″），182.3（C-4″），160.8（C-5″），99.2（C-6″），161.6（C-7″），103.6（C-8″），154.8（C-9″），103.9（C-10″），120.7（C-1?），128.4（C-2?，6?），116.0（C-3?，5?），161.2（C-4?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］ 一致，故鑒定為amentoflavone。

化合物9： 黃色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：551.4［M-H］-，分子式C31H20O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO） δ：13.10（1H，s，5″-OH），12.96（1H，s，5-OH），10.30 （1H，s，4′-OH），8.05（1H，m，H-2′），8.02（1H，m，H-6′），7.56（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2?，6?），7.12（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5′），6.90（1H，s，H-2），6.78（1H，s，H-3″），6.74（1H，s，H-8），6.70（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3?，5?），6.37 （1H，s，H-6″），6.34（1H，d，J ＝1.0 Hz， H-6），3.81（3H，s，7-OCH3）；13CNMR（125 MHz，DMSO）δ：164.2（C-2），103.1（C-3），181.9（C-4），161.0（C-5），98.1（C-6），165.2（C-7），92.7（C-8），157.4（C-9），104.7（C-10），120.6（C-1′），131.5（C-2′），120.4（C-3′），160.2（C-4′），116.5（C-5′），127.9（C-6′），163.7（C-2″），102.6（C-3″），182.1（C-4″），160.6（C-5″），98.9（C-6″），162.2（C-7″），104.3（C-8″），154.6 （C-9″），103.5 （C-10″），121.5 （C-1?），128.2（C-2?，6?），115.8（C-3?，5?），161.2（C-4?），56.1（7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］一致，故鑒定為sequoiavone。

化合物10： 黃色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.1 ［M-H］-， 分 子 式 C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：7.91（1H，dd，J ＝1.5，8.5 Hz，H-6?），7.79（1H，br s，H-2?），7.32（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.97（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5?），6.73（1H，s，H-3″），6.68（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3′，5′），6.47（1H，s，H-8），4.44（1H，s，H-8″），6.24（1H，s，H-6），6.17（1H，s，H-6″）；13C-NMR （125 MHz， DMSO） δ： 162.3 （C-2），115.5（C-3），180.8（C-4），161.7（C-5），98.9（C-6），164.4（C-7），93.7（C-8），157.3（C-9），103.3（C-10），123.0（C-1′），130.5（C-2′，6′），115.2（C-3′，5′），159.5 （C-4′），163.5（C-2″），103.0（C-3″），181.7（C-4″），161.5（C-5″），98.9（C-6″），164.2（C-7″），94.1（C-8″），157.3（C-9″），103.8（C-10″），121.3（C-1?），131.0（C-2?），120.9 （C-3?），159.7 （C-4?），116.3 （C-5?），128.2（C-6?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］ 一致，故鑒定為taiwaniaflavone。

化合物11： 黃色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.1［M-H］-），分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：8.01（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-2′，6′），7.96（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2?，6?），7.03（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-3′，5′），6.94（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3?，5?），6.86（1H，s，H-3），6.85（1H，s，H-3″），6.72（1H，s，H-8″），6.49（1H，s，H-8），6.20（1H，s，H-6）；13C-NMR（125 MHz，DMSO）δ：163.2（C-2），103.8（C-3），181.8（C-4），161.5（C-5），99.0（C-6），164.3（C-7），94.1（C-8），157.4（C-9），104.0（C-10），124.2（C-1′），128.4（C-2′，6′），115.4（C-3′，5′），160.7（C-4′），164.1（C-2″），102.6（C-3″），182.1（C-4″），153.1（C-5″），124.7（C-6″），153.8（C-7″），94.7（C-8″），157.4（C-9″），104.0（C-10″），121.2（C-1?），128.6（C-2?，6?），116.0（C-3?，5?），161.3（C-4?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］ 一致，故鑒定為hinokiflavone。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從巖生翠柏枝葉中分離并鑒定了6 個(gè)二萜、5 個(gè)雙黃酮，而且含有量豐富，表明兩者是該植物的主要特征性成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，pinusolidic acid［17］、isocupressic acid［7］、穗花杉雙黃酮［18］、 柏雙黃酮［19］、 扁柏雙黃酮［20］等化合物在抗血小板活化、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗輻射、神經(jīng)保護(hù)等方面表現(xiàn)出較好的生物活性，因此，巖生翠柏具有較高的研究與利用價(jià)值。