張掖市重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活苗免疫效果監測

何彥春，李旭蓉，李 珊，韓慶彥，郭慧琳，滾雙寶

（1.張掖市動物疫病預防控制中心，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，甘肅蘭州730046；3.甘肅農業大學，甘肅蘭州730000）

禽流感是由A 型流感病毒引起的禽類傳染病。H5、H7 亞型高致病性流感感染家禽后除引起家禽的高致病性和高死亡率外，還會感染人類，對公共衛生安全構成嚴重威脅。根據H7 流感在我國家禽中的流行態勢，為進一步做好高致病性禽流感防控工作，保障養殖業生產安全和公共衛生安全，農業部適時調整高致病性禽流感免疫方案，下發了《農業部關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（農醫發〔2017〕24號）[1]，要求在2017年秋季統一用重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）替代重組禽流感病毒H5 二價或三價滅活疫苗，對家禽實施免疫。為了切實掌握禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗的免疫效果，張掖市動物疫病預防控制中心開展了小群免疫試驗和2017年秋季、2018年春、秋季強制免疫后的抗體抽樣監測，為高致病性禽流感預防工作提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1 小群試驗

1.1.1 試驗雞選擇

選擇30日齡京紅1 號蛋雛雞50 只。

1.1.2 所用疫苗

重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），由乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠生產，批號：2017020。

1.1.3 免疫方法和和血樣采集

首次免疫前逐只翅靜脈采血，采用頸部皮下注射方法免疫，每只0.3 mL。免疫后21 d，逐只翅靜脈采血，并進行第二次免疫。第二次免疫采用胸部肌內注射，每只0.5 mL。第二次免疫后21 d，再次逐只翅靜脈采血。采集的血樣常規分離血清被檢。

1.1.4 試驗試劑

禽流感病毒H7 亞型血凝抑制試驗抗原（H7N9 株）、禽流感病毒H5 亞型血凝抑制試驗抗原（Re-8 株）：均由哈爾濱維科生物技術開發有限公司生產，批號分別為：2017007、2017005，有效期均為2年。

1.1.5 抗體水平檢測方法

按照 《 高致病性禽流感診斷技術》（GB/T18936—2003）規定的血凝和血凝抑制試驗進行抗體檢測。當被檢血清抗體滴度≥4 log2，判為免疫合格。

1.1.6 免疫后不良反應的觀察

免疫后定時觀察試驗雞精神狀態和采食飲水等表現，觀察有無副反應發生。

1.2 全市所有雞群強制免疫后的抗體抽樣監測

1.2.1 強制免疫所用疫苗

由省獸醫局集中招標采購的重組禽流感病毒（H5+H7）二 價 滅 活 苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株），2017年秋季來自乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠，批號：2017020；2018年春季和秋季均來自廣東永順生物制藥股份有限公司，批號分別為2018005、2018060。

1.2.2 免疫方法

按照《農業部關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知》（農醫發〔2017〕24 號）附件《全國高致病性禽流感免疫方案》[1]執行，頸部皮下或胸部肌注。14～35日齡雞，每只0.3 mL；35日齡以上雞，每只0.5mL，兩次免疫間隔3～4 周。

1.2.3 抽樣時間及數量

2017年秋季、2018年春季、2018年秋季集中免疫完成后，在甘州區、臨澤縣、高臺縣、山丹縣和民樂縣5 個縣（區）的規模養殖場（戶）中抽樣采集免疫血清，2017 秋季采集480 份，2018年春季采集765 份，2018年秋季采集775 份。

1.2.4 檢測試劑和檢測方法

同1.1.3 和1.1.5。

2 結果

2.1 小群試驗結果

2.1.1 免疫后不良反應

經持續觀察，除免疫后當天采食量稍有減少外，試驗雞再未見免疫后不良反應發生。

2.1.2 免疫前H5、H7 亞型禽流感抗體檢測結果

50 只試驗雞免疫前H5、H7 亞型禽流感抗體檢測結果均＜1 log2

2.1.3 H5 亞型禽流感免疫抗體檢測結果

50份被檢血清中，首免疫21 d 后合格37份，合格率為74.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率為100.00%。

2.1.4 H7 亞型禽流感免疫抗體檢測結果

50份被檢血清中，首免21 d 后合格38 份，合格率為78.00%；二免21 d 后合格50 份，合格率為100.00%。

2.2 強制免疫后的群體抗體抽樣監測結果

2.2.1 H5 亞型禽流感免疫抗體監測結果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后各全市5 縣 （區）共采集規模場雞血清各480 份、765 份、775 份，抗體合格各420 份、706 份、725份。合格率分別為87.50%（420/480）、92.29%（706/765）、93.55%（725/775）。

2.2.2 H7 亞型禽流感免疫抗體監測結果

2017年秋防、2018年春防、2018年秋防后全市5 縣（區）共采集規模場雞血清各480 份、765份、775 份，抗體合格各416 份、697 份、702 份。合格率分別為86.67%（416/480）、91.11%（697/765）、90.58%（702/775）。

3 結論

3.1 小群試驗監測結果表明：禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗 （H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）免疫后H5、H7 亞型禽流感免疫抗體合格率均在70%以上，達到了農業部規定標準。首次免疫后21 d ，H5 亞型禽流感抗體合格率為74.00%，H7 亞型禽流感抗體合格率為78.00%；二次免疫后21 d，H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率均達到100.00%。

3.2 張掖市2017年秋防結束后H5、H7 免疫抗體合格率分別達到了87.50%和86.67%；2018年春防結束后H5 和H7 亞型禽流感抗體合格率分別達到了92.29%和91.11%；2018年秋防結束后H5和H7 亞型禽流感抗體合格率均分別達到了93.55%和90.58%。總體監測結果與楊澤林等[2]報道的結果相近。從一年半的集中免疫抗體監測結果來看，使用“H5+H7”二價滅活疫苗免疫效果確實，但還存在個別養殖場戶免疫抗體不達標的問題。針對部分縣區的個別養殖場仍存在免疫抗體水平不達標的情況，應及時查找原因，采取及時補免、加強監測等措施，確保免疫合格率保持較高水平。

3.3 2017年4月，張掖市衛生部門在全市不同家禽交易市場中應用PCR 方法對外環境樣品 （糞便、飲水、燙雞水、雞籠擦拭物等）開展抽樣監測，檢出陽性樣品若干份。隨后有個別密切接觸人員發生H7N9 流感感染。接到衛生部門通報后，全市動物疫控部門立即在全市規模養禽場、屠宰交易戶、散養戶開展了H7N9 流感抗體檢測。在113 個規模養禽場的4639 份血樣中檢出血清學陽性樣品25 份；87 個屠宰交易戶1108 份雞血樣檢出血清學陽性樣品34 份；187 個散養戶的3402 份雞血樣未檢出血清學陽性樣品。對檢出血清學陽性樣品的雞群及時進行了撲殺消毒等綜合性防控措施。2017年秋季全市用重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活苗免疫以來，全市在家禽交易市場和養禽場中再未檢出H7N9 流感病原學陽性樣品，再未發生人員感染情況。這充分說明，重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活苗的應用有效阻斷了該流感病毒在家禽中的傳播，并成功阻斷了病毒由禽向人的傳播。